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1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清dna酶測(cè)是的臨床意義系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清dna齣測(cè)定的臨床意義屮華皮膚科雜志1998年第6期笫31卷論著作者：曾凡欽陳宜芳李伯冇林寶珠許德清單位：510120廣州，中山醫(yī)科大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院皮膚科關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡；系統(tǒng)性；脫氧核糖核酸酶類【摘要】1=1的 研究血清dnafw(dnase)濃度異常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)發(fā)生發(fā)展屮所起的作用。方法 于 國(guó)內(nèi)首次用單和陸擴(kuò)散法檢測(cè)了 63例sle患者。結(jié)果 患者血清中dnase濃度明顯低于正常人；活動(dòng)期患 者明顯低于緩解期患者；sle伴腎損害患者低于非腎損害患者。血清dnase的濃度卜-降與dna含量升高呈 負(fù)相關(guān)；與血

2、沉、ana呈負(fù)相關(guān)；與補(bǔ)體c3、c4呈正札i關(guān)；與病情活動(dòng)積分呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論sle患者由 于其dnase水平低下，使得血循環(huán)中含dna的自身抗原氏期滯留，發(fā)揮免疫原性，并與抗dna抗體結(jié)合形 成免疫復(fù)合物，造成免疫損傷。患者血清dnase水平低下在sle的發(fā)病機(jī)制中起著一定作用。the measurement of deoxyribonuclease and its clinical significanee in patients with slezeng fanqin, chen yifang, li boyou, et al department of dermatology, sun

3、yat?sen memorial hospital, sun yat?sen university of medical sciences, guangzhou 510120abstract objective to study the role of abnormal concentration of dnase in the development of sle.methods the concentration of dnase was measured by single radial enzyme diffusion method in the sera of 63 sle pati

4、ents.results the concentration of dnase in the patients was sign訐icantly lower than that in healthy inpiduals, significantly lower in patients at active stage than that in remission, and lowest in patients with lupus n ephritis the decrease of serum dnase was n egatively correlated with the in creas

5、e of serum dna the level of dnase was negatively correlated with ana and esr, positively correlated with c3, c4, and negatively correlated with the severity of the disease.conclusion the above data suggest that the decrease of serum dnase makes the persistence of dna in the blood circulation which c

6、ombines with antidna antibody to form immune complex, resulting in autoimmune lesions. the decrease of serum dnase may play an important role in the pathogenesis f sle.【key words lupus erythematosus, systemic deoxyribonucleases已經(jīng)證實(shí)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)患者血循環(huán)中dna水平升高，但其升高的原因尚不清楚，冇可能是因?yàn)閐na 清除機(jī)制的缺陷。我們用單相臨擴(kuò)散法檢測(cè)sl

7、e患者血清dna卿(dnase)的濃度，并探討血清dnase濃度異 常與dna升高的關(guān)系以及在sle發(fā)生發(fā)展中所起的作用。材料與方法1.主要試劑：三疑甲基氨基甲烷(tris)、牛胸腺dna、牛胰dna腮i (dnase)、rna fw a(rnase)： fluka公司和 sigma公司產(chǎn)品;漠化乙喘(ethidium bromide, eb)、瓊脂糖：華美生物工程公司產(chǎn)品。2儀器：熒光分光光度計(jì)：f-2000型，h本hitachi公司產(chǎn)品；紫外透射儀：wp-1型，永嘉上塘教學(xué)儀器廠。3. 檢測(cè)對(duì)象：sle患者63例，男6例，女57例，全部為我科1997年9月至1998年3月的住院及門診患者。

8、 所有患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)1982年修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。參照文獻(xiàn)，患者按臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查評(píng)定病 情活動(dòng)積分，并分類為活動(dòng)期患者和緩解期患者、伴腎損患者和非腎損患者。4. 正常對(duì)照組：為我市中心血站的健康獻(xiàn)血員38例，性別及年齡均與患者組相匹配。5. dnase的測(cè)定(單相酶擴(kuò)散法)：用ph7.2 0 05mol/l tris?hci緩沖液配1%的瓊脂糖凝膠20ml,其中含牛胸 腺dna和eb分別為6mg和0.5mg,灌制凝膠板,用直徑為1.5mm的打孔器于凝膠板上打孔。加入4卩1樣 木(標(biāo)準(zhǔn)dna或待檢血清)，37°c濕盒孵育16小時(shí)，0.1mol/l的edta終止反應(yīng)，于紫外透

9、射儀下觀察并測(cè) 量dna水解環(huán)的大小。在一定范圍內(nèi)，水解環(huán)的大小與dnase的濃度成正比。6. 血清 dna 含量的測(cè)定:取血清 0.lml,加 ph7.2 0 2mol/l tris?hci 緩沖液 0.7ml、rnase(lmg/ml)0.2ml, 37°c 水浴30分鐘，加eb工作液(20ug/ml)lml,用熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光強(qiáng)度。7其他觀察指標(biāo)：ana：間接免疫熒光法，抗dna抗體：金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法，補(bǔ)體c3及c4：免疫化學(xué)比濁法， beckman array 360蛋白分析儀。以上檢查全部為我科的常規(guī)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目。結(jié)果l.dnase標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定:將牛胰dnase分別稀釋

10、成10、20、30、40、50、60ng/ml,測(cè)量dna水解環(huán)的大小 (圖1),以dnase的濃度為橫坐標(biāo)、水解環(huán)的直徑為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知標(biāo)本可根據(jù)其水解環(huán)的大小 從標(biāo)準(zhǔn)illi線上查得其dnase的濃度。1 6： dnase 標(biāo)準(zhǔn)濃度：60、50、40、30、20、10ng/ml圖1 dnase的濃度測(cè)定(單相酶擴(kuò)散法)2.sle患者血清中dnase濃度的測(cè)定：共檢測(cè)了正常人血清38份,sle患者血清63份,其中活動(dòng)期患者35 例，緩解期患者28例，伴腎損害患者21例。結(jié)果見附表。sle患者血清中dnase濃度明顯低于正常人；活 動(dòng)期患者明顯低于緩解期患者；伴腎損害患者明顯低于非腎

11、損害患者。附表 不同病期sle患者與正常人血清dnase濃度的測(cè)定結(jié)果 受檢対象檢測(cè)例數(shù) 血清 dnase 濃度（土s, ng/ml）t值p值健康獻(xiàn)血員3851.23i3.686.128<0.01sle患者6328.52 土8.25活動(dòng)期3518.68±5.976.454<0.01緩解期2840.81±4.28伴腎損害15.46±5.817.305<0.01不伴腎損害4235.04±4.783.sle患者的血清dnase濃度與dna含量的相關(guān)性：63份患者血清用熒光分光光度法檢測(cè)其dna含量，結(jié) 果35例活動(dòng)期患者的血清dna含量為（3

12、3150） p g/ml（92.06±20.32）, 28例緩解期患者的血清dna含量為 31-90h g/ml（57.18±16.13）,相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，不論在活動(dòng)期還是緩解期，血清dnase的濃度都與dna含量 呈負(fù)相關(guān)（活動(dòng)期：w 0.754, p< 0.01；緩解期:r=-0.827, p< 0.01）。4.sle患者的血清dnase與ana、抗dna抗體、補(bǔ)體、血沉等的相關(guān)性：將sle患者的血清dnase濃度與 ana、抗dna抗體、補(bǔ)體、血沉等作直線相關(guān)分析，結(jié)果為dnase的濃度與血沉、ana呈負(fù)相關(guān)（r分別為 -0.701、-0.416, p 值均

13、v 0.01）；與 c3、c4 呈正相關(guān)（r 分別為 0.469、0.438, p 值均 v 0.01）；與抗 dsdna 抗體無(wú)相關(guān)性（r為0.217, p >0.05）o5.sle患者的血清dnase水平與病情積分的相關(guān)性：直線相關(guān)分析表明，患者的血清dnase水平與病情積分 呈高度負(fù)相關(guān)（r為一0.884, p< 0.01）«討論sle的發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，大量研究表明dna?抗dna免疫復(fù)合物在sle的發(fā)病以及器官損害中起著重 要作用，患者血中的dna含量比正簾人高，并隨病情的活動(dòng)與緩解而波動(dòng)，說明患者的確存在dna的代謝 異常。機(jī)體清除dna的途徑主要是通過d

14、nase的降解作用。我們同時(shí)檢測(cè)了 63例sle患者的血清dna與 dnase,發(fā)現(xiàn)患者的dnase濃度低于正常人，活動(dòng)期患者dnase濃度低下更為明顯；dnase低下的程度與 dna水平升高的程度呈負(fù)相關(guān)，提示dnase活性不足是造成血屮dna升高以及sle發(fā)病的重要因素么一。 國(guó)外學(xué)者檢測(cè)了 nzb/wf1狼瘡鼠血清中的dnase,發(fā)現(xiàn)其濃度明顯低于同樣性別和年齡的正常小鼠，更有 意義的是小鼠先有dnase的低卜（510周），然后才有抗dna抗體的產(chǎn)牛（1216周）。本文實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，伴有 腎損害的患者dnase濃度明顯低于非腎損害，在63例患者中，血清dnase濃度最低的5例（28ng/ml

15、）患者 全部為伴腎損害的活動(dòng)期患者；提示dnase的低下在sle腎損害中起著重要作用。在正常機(jī)體中，因衰老或因發(fā)牛感染、炎癥等，都可釋放dna到血中，這些dna可迅速被循環(huán)中的dnase 降解，其半衰期僅約4分鐘。在sle患者，因其血中dnase活性低于正常水平，不能有效地處理急劇增加 的dna,于是多量的dna在體內(nèi)滯留?？偨Y(jié)木文結(jié)果并綜合文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，我們得出以下推理：sle患者體內(nèi) dnase活性低下，不能充分行使其水解dna的作用，使得血循環(huán)中含dna的自身抗原長(zhǎng)期滯留，于是發(fā)揮 免疫原性，并抗dna抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，隨血循環(huán)沉積于腎臟等組織器官，造成多系統(tǒng)免疫損傷。 測(cè)定患者dna

16、se活性在研究sle復(fù)雜的免疫發(fā)病機(jī)制上貝-有一定意義。參考文獻(xiàn)1 mccoubrey?hoyer a, okarma tb, holman hr. partial purification and characterization of plasma dna and its relation to disease activity in systemic lupus erythematosus am j med, 1984,77 : 23-34.2 rumore pm, stein man cr en dogenous circulating dna in systemic lupus er

17、ythematosus: occurrence as multimeric complexes bound to hist one. clin in vest, 1990,86 : 69-743 morimoto c, sano h, abe t, et al. correlation between clinical activity of sle and the amounts of dna in dna/anti?dna antibody immune complexes. j immunol, 1982,139 : i960.4 macanovic m, lachmann pj measurement of deoxyribonuclease in the serum and urine of system lupus erythemoatosus?prone nzb/w mice by a new radial enzyme diffusion assay clin exp immunol, 1997,108 : 220-226.5許禧紅，許德淸，謝彥博.sle患者bpmc表面的dna受體及其臨