獸醫(yī)應(yīng)用免疫學(xué)

1、獸醫(yī)應(yīng)用免疫學(xué)獸醫(yī)應(yīng)用免疫學(xué) 獸醫(yī)專業(yè)重要基礎(chǔ)課獸醫(yī)專業(yè)重要基礎(chǔ)課黃青云黃青云 唐滿華唐滿華 謝安新謝安新編制編制2002.82第一章第一章 緒論緒論 第一節(jié) 免疫的概念 免疫（immune）是指人和動(dòng)物機(jī)體免疫系統(tǒng)特異識(shí)別、清除體內(nèi)抗原(Antigen)的生理功能。 有利方面： 防止病原微生物感染 防止腫瘤發(fā)生 不利方面：一定條件下引起 變態(tài)（超敏）反應(yīng) 自身免疫病 免疫耐受3一免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史 （一） 免疫學(xué)是人類在與傳染病的病原微生物作斗爭(zhēng)的過(guò)程中建立和發(fā)展起來(lái)的。免疫學(xué)與醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)、傳染病學(xué)有不可分割的聯(lián)系。（二） 免疫學(xué)于18世紀(jì)末開(kāi)始，至今經(jīng)歷了三個(gè)發(fā)展階段4免疫實(shí)踐

2、、免疫學(xué)形成階段（16世紀(jì)18世紀(jì)末） 16世紀(jì)（明朝）中國(guó)醫(yī)生首先實(shí)踐用人痘痂皮接種青少年預(yù)防天花 17世紀(jì)推廣 18世紀(jì)傳到亞洲、歐洲各國(guó) 18世紀(jì)末，英國(guó)醫(yī)生Jenner首次發(fā)明牛痘預(yù)防天花。 免疫學(xué)誕生 Vaccine(牛痘)定為“疫苗” Vaccination（種痘）定為“免疫接種”5免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)研究階段（19世紀(jì)末20世紀(jì)中） 實(shí)驗(yàn)室發(fā)明人工培育疫苗 Pasteur（法） 微生物學(xué)、免疫學(xué)創(chuàng)始人 1880年 雞霍亂（巴氏桿菌）弱毒菌苗 1882年 狂犬病病毒弱毒疫苗 疫苗免疫機(jī)理研究細(xì)胞免疫學(xué)說(shuō)與體液免疫學(xué)說(shuō)的爭(zhēng)論 6 細(xì)胞免疫學(xué)說(shuō)（1890） Metchnikoff（俄1883）首

3、次發(fā)現(xiàn)吞噬細(xì)胞的吞噬作用 體液免疫學(xué)說(shuō)（1897） Behring(德1890)、北里（日本）首次發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素（血清抗體） 1891年首次用抗毒素血清治好白喉病人 抗體、抗原概念、血清學(xué)試驗(yàn)形成 Erlich（德 1897）提出“體液免疫學(xué)說(shuō)” 7 兩種學(xué)說(shuō)爭(zhēng)論了70年 發(fā)現(xiàn)變態(tài)反應(yīng) 提出各種抗體產(chǎn)生理論（學(xué)說(shuō)） 發(fā)現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象 1963年Wright,Deuglas發(fā)現(xiàn)調(diào)理素 兩種學(xué)說(shuō)得以統(tǒng)一認(rèn)識(shí) 8現(xiàn)代細(xì)胞、分子免疫學(xué)研究發(fā)展階段（20世紀(jì)中期以來(lái)） 免疫概念從傳統(tǒng)概念發(fā)展為現(xiàn)代概念 傳統(tǒng)概念防御感染；有利 現(xiàn)代概念識(shí)別排除抗原；既有利也有不利 現(xiàn)代免疫學(xué)完全從微生物學(xué)中獨(dú)立出來(lái) 理論

4、和技術(shù)在細(xì)胞和分子水平上飛躍發(fā)展 免疫學(xué)研究中有20多位學(xué)者的成果獲諾貝爾獎(jiǎng)9（三）免疫學(xué)分支學(xué)科 基礎(chǔ)免疫學(xué) 免疫學(xué) 免疫遺傳學(xué) 細(xì)胞、分子免疫學(xué) 分子免疫學(xué) 免疫學(xué)原理 免疫生物學(xué) 免疫生理學(xué) 免疫病理學(xué) 免疫藥理學(xué) 應(yīng)用免疫學(xué) 醫(yī)學(xué)免疫學(xué) 臨床免疫學(xué) 移植免疫學(xué) 血液免疫學(xué) 腫瘤免疫學(xué) 繁殖免疫學(xué) 獸醫(yī)（應(yīng)用）免疫學(xué) 家禽免疫學(xué)10（四）獸醫(yī)（應(yīng)用）免疫學(xué) 理論：理論：免疫系統(tǒng)、抗原、免疫應(yīng)答、抗感染免疫、變態(tài)反應(yīng)、常用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)、免疫學(xué)在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 特點(diǎn)：特點(diǎn)：較抽象、系統(tǒng)性強(qiáng)、循序漸進(jìn) 實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)：目前最常用的6項(xiàng)實(shí)驗(yàn)（分4次做） 目的：目的：為動(dòng)物傳染病的免疫預(yù)防、診斷治

5、療打基礎(chǔ)，是重要的專業(yè)基礎(chǔ)課 為深入學(xué)習(xí)、研究免疫學(xué)（研究 生）打基礎(chǔ)11第二章第二章 免疫系統(tǒng)免疫系統(tǒng)Immune system 機(jī)體內(nèi)參與對(duì)抗原的免疫應(yīng)答，執(zhí)行免疫功能的一系列器官、細(xì)胞和分子。1213第一節(jié) 免疫器官 豬免疫器官示意圖 14雞免疫器官示意圖 15一中樞免疫器官免疫細(xì)胞產(chǎn)生與成熟場(chǎng)所 （一） 骨髓（bone marrow）長(zhǎng)骨髓 源生各種免疫細(xì)胞。 哺乳動(dòng)物B細(xì)胞成熟，直接進(jìn)行免疫應(yīng)答， 產(chǎn) 生大量抗體，約占40%。（二） 胸腺（thymus） 誘導(dǎo)淋巴干細(xì)胞成熟T細(xì)胞 （三） 禽法氏囊（bursa of fabricius） 誘導(dǎo)淋巴干細(xì)胞成熟為B細(xì)胞 16免疫細(xì)胞誘生示

6、意圖 17二外周免疫器官免疫細(xì)胞分布及進(jìn)行免疫應(yīng)答的場(chǎng)所 （一）淋巴結(jié)（lymphnode）皮質(zhì)區(qū)：B細(xì)胞25%副皮質(zhì)區(qū)：T細(xì)胞75%髓質(zhì)區(qū)：巨噬細(xì)胞(M)、樹(shù)突狀細(xì)胞(DC) （見(jiàn)下圖） 作用：對(duì)淋巴液來(lái)的抗原（注射的疫苗）進(jìn)行免疫應(yīng)答18 19（二）脾臟(spleen) 白髓 淋巴鞘T細(xì)胞25% 脾小結(jié)B細(xì)胞65% 紅髓 巨噬細(xì)胞(M)、樹(shù)突狀細(xì)胞(DC) 作用 對(duì)來(lái)自血液的抗原進(jìn)行免疫應(yīng)答，主要產(chǎn)生抗體 20（三）粘膜免疫系統(tǒng)（me mbra n e immune system，MIS） 呼吸道 消化道 泌尿生殖道 腺體分泌管 作用：接受粘膜表面侵入抗原的免疫應(yīng)答 大量產(chǎn)生分泌性抗體Ig

7、A，分布在粘 膜表面起粘膜免疫保護(hù) 粘膜下免疫細(xì)胞（T、B、M、DC）21（四） 禽哈德氏腺（Harder gland） 分布T細(xì)胞、B細(xì)胞 雞新城疫系苗滴眼免疫起重要作用 22第二節(jié) 免疫細(xì)胞 一淋巴細(xì)胞(lyphocyte) T、B、NK細(xì)胞：來(lái)源、分布、特征（重要表面標(biāo)志）、亞類及功能。（一）T細(xì)胞 1. 來(lái)源、分布：胸腺 副皮質(zhì)區(qū)、白髓、粘膜下，大量進(jìn)行淋巴細(xì)胞再循環(huán)。 (請(qǐng)看下圖) 23 242.表面標(biāo)志(1)T細(xì)胞抗原受體(T cell recepter,TCR) 組成：、二條肽鏈 多樣性：一個(gè)個(gè)體有1015克?。ㄖ辏㏕c 作用：識(shí)別結(jié)合抗原，引起T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。 （下圖）25

8、TCR結(jié)構(gòu)、作用示意圖26 基因水平上TCR多樣性產(chǎn)生的機(jī)制 TCR 胚系基因片段組合V 50 57D 2J 70 13VJ,VDJ連接多樣性 5070=3 103 57 2 13=1103 連接機(jī)動(dòng)性 + +N區(qū)核苷酸插入 V-J V-D,D-J 總的多樣性 1015 多樣性機(jī)制27(2)紅細(xì)胞受體(Erythrocyte receptor,ER) 結(jié)構(gòu)：?jiǎn)捂湺嚯模–D2） 分布：成熟T細(xì)胞 作用：與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合 E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)區(qū)分T、 B細(xì)胞，測(cè)細(xì)胞數(shù)量 （見(jiàn)下圖）28 T細(xì)胞的E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)29（3）致有絲分裂原植物血凝素（PHA）、刀豆素（ConA）受體 作用作用：與PHA或ConA

9、結(jié)合，小T細(xì)胞母細(xì)胞 化、轉(zhuǎn)化為有活性的T細(xì)胞淋巴 細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。 區(qū)分T、B細(xì)胞。 檢測(cè)T細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能。30 T細(xì)胞受PHA作用轉(zhuǎn)化后的形態(tài)示意圖31（4）T細(xì)胞表面抗原（標(biāo)志） 分化不同時(shí)期的T細(xì)胞，表達(dá)不同蛋白質(zhì)分子，稱為分化抗原（Cluster of differentiation，CD） CD2 單鏈多肽，成熟Tc上，ER CD3 5-6鏈多肽，成熟Tc上，與TCR/CD3 傳遞抗原信息 CD4 單鏈多肽，TH上，輔助TH的TCR識(shí) 別抗原，人愛(ài)滋病毒（HIV）受體 CD8 雙鏈多肽，Tc上，輔助Tc的TCR識(shí) 別抗原 （見(jiàn)下圖）32 33 3. T細(xì)胞亞群及其功能 亞群亞群 CD表

10、型表型 功能功能TC CD3+ CD4- CD8+ 殺傷靶細(xì)胞，分泌IFN-TS CD3+ CD4- CD8+ 分泌TSF，抑制T、B細(xì) 胞和m的作用 TDTH（TH1 ） CD3+ CD4+ CD8- 分泌MIF，IFN-等致 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng) TH2 CD3+ CD4+ CD8- 分泌 IL-4、IL-5等，輔助 B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體34（二）B細(xì)胞1來(lái)源、分布：骨髓（法氏囊） 皮質(zhì)區(qū)，脾小結(jié)，粘膜下；少進(jìn)行再循環(huán) B細(xì)胞發(fā)育、分化過(guò)程示意圖352重要受體（1）抗原受體（Surface membrane immunoglobuling，SmIg） 未成熟B細(xì)胞 SmIgM 成熟B細(xì)胞 SmIgM

11、+SmIgD 每個(gè)動(dòng)物體內(nèi)約有每個(gè)動(dòng)物體內(nèi)約有107B細(xì)胞克?。ㄖ辏?，細(xì)胞克?。ㄖ辏?，每個(gè)克隆每個(gè)克隆B細(xì)胞細(xì)胞SmIgM，SmIgD都不同，各識(shí)都不同，各識(shí)別結(jié)合一種抗原（每個(gè)別結(jié)合一種抗原（每個(gè)B細(xì)胞細(xì)胞105個(gè)個(gè)SmIg） SmIg多樣性的基因水平機(jī)制與多樣性的基因水平機(jī)制與TCR相似相似作用：識(shí)別結(jié)合抗原，引起B(yǎng)細(xì)胞的免疫應(yīng)答36 37 (2) Fc受體 B細(xì)胞膜上的糖蛋白 能與抗體Fc段結(jié)合（3）C3b受體 B細(xì)胞膜上的另一種蛋白 能與補(bǔ)體C3b結(jié)合 （見(jiàn)下圖）38BEEEEEEEA玫瑰花環(huán)示意圖BEEEEEEEAC玫瑰花環(huán)示意圖FcRFcC3bRC3b39 402. B細(xì)胞亞群及功

12、能 B1 、B2 亞群特性特性 B1（CD5+） B2（CD5-）發(fā)育程度 未成熟 成熟Sm Ig 類型 Sm IgM Sm IgM、Sm IgDIgG Fc受體 +C3b受體 +針對(duì)的抗原 TI Ag TD Ag產(chǎn)生的抗體 IgM IgM、IgG、IgA、IgE、IgD再次抗體應(yīng)答 +免疫耐受 易形成 難形成 41 (三）自然殺傷細(xì)胞(natural kill cell,NKC) 骨髓骨髓 體液體液 1.膜表面標(biāo)志 Fc受體（CD16）：與抗體Fc結(jié)合 抑制性受體（KIR） 激活性受體（KAR）2.作用：自然殺傷病毒感染細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞，但 不殺傷正常組織細(xì)胞。為什么？ 殺傷機(jī)理：使靶細(xì)胞凋亡

13、 發(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性 作用（ADCC）4243二、單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng) 單核吞噬細(xì)胞的發(fā)育與分布 骨髓 血液 組織多能干細(xì)胞 結(jié)蹄組織：組織細(xì)胞 單 巨 肺：肺泡巨噬細(xì)胞髓樣干細(xì)胞 核 噬 肝： Kupffer細(xì)胞 細(xì) 細(xì) 脾： 巨噬細(xì)胞前單核細(xì)胞 胞 胞 神經(jīng)組織：小膠質(zhì)細(xì)胞 骨：破骨細(xì)胞 關(guān)節(jié)：滑膜A型細(xì)胞 胸腹腔:巨噬細(xì)胞44 (一)單核吞噬細(xì)胞特征 膜受體：Fc受體 、 C3b受體 膜抗原：Ia_ M Ia+ M （二）單核吞噬細(xì)胞的功能 1. 分泌功能：分泌近百種活性物質(zhì) 2.吞噬消化功能monocyte Ia M （見(jiàn)下表和圖）45單核吞噬細(xì)胞分泌的活性物質(zhì)舉例 產(chǎn)物分

14、類 分 泌 的 活 性 物 質(zhì)酶類 溶菌酶、蛋白質(zhì)、肽酶、糖苷酶、 磷酸酶、脂酶、血纖維蛋白溶酶原、 膠原酶、彈性蛋白酶等血漿蛋白 凝血因子、a2巨球蛋白、補(bǔ)體成分 （C1 C2 C3 C4 C5 P因子、D因子、I因 子、H因子）等生物活性蛋白 IL-1、IL-6、IL-8、TNF、集落刺激 因子、間葉細(xì)胞增殖因子、血管生 成因子等低分子物質(zhì) 前列腺素E、白三烯、胸腺嘧啶核甙等 46消耗大量O2呼吸爆發(fā)O2n-自由基H2O2、OH-、IO2殺死細(xì)菌473. 遞呈抗原功能Ia+ M將侵入體內(nèi)的抗原物質(zhì)傳遞給Th細(xì)胞的TCR如何遞呈 484. 殺瘤 M分泌蛋白水解酶、腫瘤壞死因子（TNF） 抑、

15、殺瘤細(xì)胞 助瘤：M進(jìn)入腫瘤組織，分泌腫瘤血管因子，促進(jìn)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。49三抗原遞呈細(xì)胞 捕捉（攝取）、降解抗原，向T細(xì)胞遞呈抗原 種類： -巨噬細(xì)胞（M） -樹(shù)突狀細(xì)胞(DC) -郎罕氏細(xì)胞（Lc 皮膚、未成熟 DC） 共同特征：表達(dá)大量MHC-類分子 作用：捕捉、降解、遞呈抗原 50四.粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、紅細(xì)胞1. 粒細(xì)胞吞噬消化病原菌有IgG Fc受體，發(fā)揮ADCC作用，消除抗原堿性粒細(xì)胞有IgE Fc受體，參與過(guò)敏反應(yīng)2. 肥大細(xì)胞 有大量IgE Fc受體，參與過(guò)敏反應(yīng)3. 紅細(xì)胞 有C3b受體 起消除血液中抗原-抗體復(fù)合物(免疫復(fù)合物)的作用 1982年，sigel(美)提出“紅細(xì)

16、胞免疫系統(tǒng)” 51第二節(jié) 免疫分子 機(jī)體內(nèi)參與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的各種蛋白分子一免疫細(xì)胞膜上分子（4類）（一）TCR（二）BCR（SmIgM SmIgD）（三）白細(xì)胞分化抗原（CD） 機(jī)體各種細(xì)胞，分化不同群，成熟不同階段，活化不同時(shí)期出現(xiàn)于膜上的蛋白質(zhì)分子不同，以cluster of differtiation,CD命名、編號(hào)。 例如成熟T細(xì)胞都有CD2、CD3，分化成TH則有CD4，Tc有CD8 意義：以CD分子水平鑒定細(xì)胞 CD分子在細(xì)胞發(fā)揮功能時(shí)起作用 52（四）MHC分子什么叫MHC？MHC分子？著絲點(diǎn) HLA復(fù)合體 第六號(hào)染色體 DP DQ DR 補(bǔ)體基因 B C A D區(qū) HLA- H

17、LA- HLA- 10001200kb 1000kb 16002000kb 35004000kb人類人類MHC即即HLA基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)、類分子示意圖類分子示意圖 531 MHC-類分子 結(jié)構(gòu)：重鏈，輕鏈 分布：所有有核細(xì)胞 作用：(1) 組織相容性抗原 (2) 靶細(xì)胞的MHC-I與內(nèi)源性抗原結(jié) 合，限制Tc的TCR識(shí)別、殺傷靶 細(xì)胞 542 MHC-類分子 結(jié)構(gòu)：鏈，鏈 分布：抗原遞呈細(xì)胞 作用：與外源性抗原肽結(jié)合，控制抗原 遞呈細(xì)胞，將抗原遞呈給TH，又 稱免疫相關(guān)抗原（immuno- assodiated antigen，Ia）55 56 57 583MHC-類分子：C2、C

18、4、Bf、TNF等，分布于血清中，發(fā)揮作用（五）其它膜分子，各種受體 三體液中的免疫分子三體液中的免疫分子 免疫球蛋白 、補(bǔ)體系統(tǒng) 、 細(xì)胞因子(一)免疫球蛋白(Immunoglobuling，Ig) B細(xì)胞膜表面Ig (SmIgM SmIgD) B細(xì)胞受抗原作用后分泌在體液中的抗體(IgM、 IgG、 IgA 、IgE 、IgD)59 1.Ig的基本結(jié)構(gòu)602Ig的水解片段613五類Ig的主要特性 62(二)補(bǔ)體系統(tǒng)（complement system） 1補(bǔ)體系統(tǒng)的組成 20多種蛋白質(zhì)，最基本的是C1（C1q、C1r、C1s）-C9共11種蛋白 2補(bǔ)體特性 不穩(wěn)定：56OC60OC30mi

19、n可滅活 平常無(wú)活性，經(jīng)過(guò)系統(tǒng)激活才起作用 協(xié)助抗體吞噬細(xì)胞等，起非特異的清除抗原防御感染等作用 633.補(bǔ)體系統(tǒng)激活 C1途徑（傳統(tǒng)） C3途徑（替代）64 C1激活途徑（傳統(tǒng)途徑） C3激活途徑（替代途徑）IgG1及IgM的免疫復(fù)合物 細(xì)菌脂多糖、酵母多糖及 IgG、IgA的免疫復(fù)合物 Ca+ Mg+ C1C1 C3PA轉(zhuǎn)化酶（D因子） 酶原 Mg+ C3 C2+C4 C4b2a C3激活劑(Bb) C3PA C3b +C3a C5 C5b + C5a C 56789 靶細(xì)胞溶解 圖8-17 補(bǔ)體激活的兩條途徑 65 66 67補(bǔ)體系統(tǒng)激活作用 溶菌、病毒囊膜 粘連清除免疫復(fù)合物 C3a、

20、C5a的過(guò)敏毒素作用、趨化作用68(一)細(xì)胞因子 機(jī)體細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育和功能的小 分子蛋白質(zhì)，種類很多，各有特性，也有共性1. 共性 產(chǎn)生細(xì)胞與作用細(xì)胞多樣性 細(xì)胞受到刺激分泌快，自身作用或?qū)︵徑?xì)胞作用，降解快，刺激停止，細(xì)胞因子的產(chǎn)生也即停止 分子量小，產(chǎn)量微，與作用細(xì)胞的受體親和力高，作用強(qiáng) 692種類及功能(1) 白細(xì)胞介素（interleukin,IL） 產(chǎn)生：?jiǎn)魏送淌杉?xì)胞、淋巴細(xì)胞 IL-1IL-23 誘導(dǎo)造血干細(xì)胞生長(zhǎng)、分化,淋巴細(xì)胞增分化(2) 集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF) G-CSF 、M-CSF、 EPO T細(xì)胞、上皮細(xì)

21、胞、纖維母細(xì)胞產(chǎn)生 誘導(dǎo)造血干細(xì)胞定向分化、發(fā)育7071 72（1）干擾素（interferon，IFN） 產(chǎn)生： IFN- 白細(xì)胞產(chǎn)生 IFN- 成纖維細(xì)胞產(chǎn)生 IFN- T細(xì)胞產(chǎn)生 作用: 廣譜抗病毒 抗腫瘤 調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞作用 73 第三章第三章 抗原（抗原（Antigen） 完全抗原 免疫原性物質(zhì)（細(xì)菌） 機(jī)體免疫細(xì)胞 免疫產(chǎn)物 （效應(yīng)細(xì)胞、抗體）+物質(zhì) 特異反應(yīng) 反應(yīng)原性 不完全抗原（半抗原） 物質(zhì)(激素)+蛋白載體 機(jī)體免疫細(xì)胞 免疫產(chǎn)物 （抗體）+物質(zhì) 特異反應(yīng) 75第一節(jié)第一節(jié) 完全抗原（免疫原）的基本條件完全抗原（免疫原）的基本條件異物性，大分子，化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)復(fù)雜一異物性 親

22、緣關(guān)系越遠(yuǎn)的物質(zhì)，免疫性越強(qiáng) 自身物質(zhì)可以形成“天然免疫耐受” 自身物質(zhì)結(jié)構(gòu)、成分改變后成為“自身抗原” 自身也有一些“隱蔽抗原”眼球晶體、精子、甲狀腺等蛋白 76二大分子 通常在10000dal以上三化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)復(fù)雜 明膠蛋白分子量10萬(wàn)dal，但免疫原性差 因是直鏈AA組成 胰島素只有5734dal，但免疫原性好因 組成、結(jié)構(gòu)復(fù)雜 凡含有苯環(huán)、雜環(huán)AA和糖的蛋白，結(jié)構(gòu) 都較復(fù)雜，免疫原性好 思考思考：下列各物質(zhì)是否是好的免疫原？ 為什么？1. 化學(xué)藥物注入機(jī)體2. 鐵釘釘入皮膚3. 玻璃插入皮膚4. 自身蛋白質(zhì)5. 牛奶給狗喝6. 牛奶注入狗的皮下7. 細(xì)菌、病毒感染畜禽8. 細(xì)菌死苗喂

23、豬 第二節(jié)第二節(jié) 抗原決定簇抗原決定簇（antigenic determinants,AD） B細(xì)胞細(xì)胞AD T細(xì)胞細(xì)胞AD位置位置: 抗原表面(半抗原) 抗原內(nèi)部(載體內(nèi))成分成分: AA,糖,核苷酸 肽大小大小: 56個(gè)AA,單糖,核苷酸 918個(gè)AA（肽）作用作用: 直接與BCR（SmIg）特 外源性抗原外源性抗原需APC吞噬 異識(shí)別 降解 直接與抗體特異結(jié)合 MHC-分子/抗原肽-TCR (Th) 內(nèi)源性抗原內(nèi)源性抗原 MHC-/抗 原肽-TCR(Tc)79 8081 第三節(jié) 抗原分類 不同角度有不同分類 分類依據(jù)分類依據(jù) 抗原類型抗原類型 抗原舉例抗原舉例 免疫原性 -完全抗原 各種

24、病原微生物 -不完全抗原（半） 糖、藥物、激素 抗原來(lái)源 -異種抗原 各種病原微生物 -同種抗原 同種異體血型抗原、 組織相容性抗原 -自身抗原 變性自身組織,隱蔽抗原(釋放) -異嗜性抗原 一些微生物、植物、動(dòng)物、 人體細(xì)胞組織共有的抗原(鏈 球菌與人心肌,腎小球組織) 對(duì)Th -TD Ag 所有病原微生物等天然抗原 依賴性 -TI Ag 少數(shù)細(xì)菌多糖 8283 分類依據(jù)分類依據(jù) 抗原類型抗原類型 抗原舉例抗原舉例免疫保護(hù)性 -保護(hù)性抗原 新城疫病毒F、HN蛋白,口 (相應(yīng)Ab有保護(hù)作用) 蹄疫病毒VP1、VP4蛋白 -非保護(hù)性抗原 布氏桿菌一些抗原，雞白 (相應(yīng)Ab無(wú)保護(hù)作用， 痢桿菌一些

25、抗原 但有免疫診斷作用)對(duì)T細(xì)胞的 -普通抗原 絕大多數(shù)抗原 激活 AD特異識(shí)別激活T細(xì)胞 受MHC-分子限制 -超抗原 (super Ag) 少數(shù)抗原 AD非特異激活T細(xì)胞 (葡萄球菌、腸毒素、鏈 （多克隆激活） 球菌M蛋白等) 不受限制 84第四節(jié) 獸醫(yī)學(xué)中重要的天然抗原一微生物抗原 各種微生物各有不同的抗原成分，各有抗原特異性 同種微生物、不同株抗原成分也有差別，分為不同血清型 85（一）細(xì)菌抗原 例 腸道桿菌： 大腸桿菌 沙門氏菌 菌體(O)Ag 170多型 60多型,50多群 脂多糖,耐熱 畜禽AF群 鞭毛(H)Ag 60多型 60多型,第特異相(a.b.c) 蛋白質(zhì),不耐熱 第變異

26、相(1.2.3) 表面Ag -莢膜 炭疽桿菌 多糖多肽,耐熱 -菌毛 大腸桿菌(KAg) 傷寒桿菌(Vi Ag) 蛋白,不耐熱 100多種,K88、K99等 毒素Ag -外毒素(蛋白,免疫原性強(qiáng),不耐熱,0.3-0.4%甲醛處理可脫毒制 成類毒素) -內(nèi)毒素(脂多糖，免疫原性弱,耐熱,不能制成類毒素) 86 抗原結(jié)構(gòu)式：鼠傷寒沙門氏菌(1.4.5.12：i.1.2) OAg 1.4.5.12 HAg 相i,相1.2 87(二) 病毒抗原 無(wú)囊膜病毒抗原成分主要是殼粒蛋白 有囊膜病毒抗原成分主要是囊膜粒(纖突)蛋白 有的只有一個(gè)血清型(豬瘟病毒) 有的有多種血清型(流感病毒)8889第五節(jié) 佐劑

27、(adjuvant)增強(qiáng)抗原免疫原性的物質(zhì)增強(qiáng)抗原免疫原性的物質(zhì)一疫苗佐劑 氫氧化鋁膠:吸附、濃縮、緩慢釋放抗原 10號(hào)白油、水花生油: 形成油包抗原水溶液，濃縮、緩慢釋放抗原 蜂膠: 含全面的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)免疫細(xì)胞增生 維生素A、E: 促進(jìn)免疫細(xì)胞增生 脂質(zhì)體(人工制備類脂質(zhì)小球體): 包裹抗原溶液，起載體+佐劑作用 分子佐劑: IL-2、IL-12、IL-18等，正研究用于基因工程疫苗、DNA疫苗90二制備高免血清的佐劑(一)弗氏不完全佐劑(Freund,s incomplete adjuvant，F(xiàn)IA) 配制：Ag溶液+石蠟油+羊毛脂（吐溫80） 攪拌乳化成油包Ag溶液劑型 機(jī)理：濃縮

28、緩釋Ag，刺激注射部位形成炎癥 反應(yīng)，肉芽腫(二)弗氏完全佐劑(Freund,s complete adjuvant ，F(xiàn)CA) 配制: FIA+殺死的分枝桿菌 機(jī)理: 在FIA基礎(chǔ)上促進(jìn)增強(qiáng) M、T、B細(xì)胞增 殖和功能91第四章 免疫應(yīng)答(immune response) 正常免疫應(yīng)答、變態(tài)反應(yīng)、免疫耐受 第一節(jié) 正常免疫應(yīng)答的基本過(guò)程 識(shí)別階段 反應(yīng)階段 效應(yīng)階段 TDAg與TIAg有所不同92正常免疫應(yīng)答的基本過(guò)程示意圖 93免疫應(yīng)答的基本特征 自身識(shí)別 高度特異 免疫記憶（TDAg） 94第二節(jié) 細(xì)胞免疫(T cell mediated immunity,TMI)一基本過(guò)程 Ag pr

29、o-Tc 激活Tc 殺傷靶細(xì)胞 Ag Th Ag Th1(TDTC) 淋巴因子 炎癥反應(yīng) 95二激活Tc的殺傷作用 特點(diǎn)：直接、特異，重復(fù)殺傷靶細(xì)胞 過(guò)程（機(jī)制） -在MHC-分子限制下，通過(guò)TCR特異識(shí)別結(jié)合靶細(xì)胞 -釋放穿孔蛋白，溶解靶細(xì)胞 -表達(dá)蛋白毒素，致靶細(xì)胞凋亡三 Th1的作用 Th再受到同種Ag的作用，釋放50多種淋巴因子(細(xì)胞因子) 炎癥反應(yīng)、消除抗原 （主要的淋巴因子見(jiàn)下圖）969798四細(xì)胞免疫作用（一）有利方面 抗細(xì)胞內(nèi)感染免疫 -胞內(nèi)菌(結(jié)核桿菌、布氏桿菌、麻風(fēng)桿菌等) -病毒，尤其慢性病毒 -原蟲(chóng) 抗腫瘤（二）不利方面 傳染性變態(tài)反應(yīng)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(組織炎癥、損傷)9

30、9第三節(jié) 體液免疫(B cell mediated immunity,BMI) 一基本過(guò)程 TDAg APC降解 Th Th2 Bc 漿細(xì)胞 抗體(IgM、IgG) 記憶細(xì)胞 漿細(xì)胞 抗體(IgG) TDAg100 TIAg Bc 漿細(xì)胞 抗體(IgM)二抗體(Antibody,Ab；Immunoglubulin,Ig)(一) 抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律1初次應(yīng)答(primary response) 過(guò)程：陰性期(3-7天；2-3周) 對(duì)數(shù)期 穩(wěn)定期 下降期 特點(diǎn)：陰性期長(zhǎng)，主要是IgM，抗體水平低，維持時(shí)間短101B（漿）細(xì)胞合成（分泌）Ig示意圖1022再次免疫應(yīng)答 過(guò)程：陰性期 對(duì)數(shù)期(高) 穩(wěn)

31、定期(長(zhǎng)) 下降期 陰性期短，或原有Ab暫時(shí)降低 Ab水平迅速升高 大量產(chǎn)生IgG 維持時(shí)間長(zhǎng)103104（二）抗體產(chǎn)生理論 克隆選擇學(xué)說(shuō)（clone selection theory） 科學(xué)地解釋了免疫應(yīng)答（Ab產(chǎn)生）3大特點(diǎn) 哪3大特點(diǎn)？ 105106（三）抗體分類 分類依據(jù) Ab類型1. CH結(jié)構(gòu) IgM、IgG、IgA、IgE、 IgD及各亞類2. 與Ag反應(yīng) 完全Ab2價(jià) 不完全Ab單價(jià)3. Ag與免疫機(jī)體 異種Ab病原微生物Ab 的關(guān)系 同種Ab血型Ab 自身Ab 異嗜Ab鏈球菌Ab1074血清學(xué)試驗(yàn) 沉淀Ab（IgG） 凝集Ab（IgG、IgM） 補(bǔ)體結(jié)合Ab（IgG、IgM）

32、中和Ab（ IgG、IgM、IgA） 溶血素（紅細(xì)胞Ab，IgG、IgM） 調(diào)理素（IgG） 溶菌素（細(xì)菌抗體，IgG、IgM）108 5抗體均一性 多克隆Ab免疫血清Ab 單克隆Ab（monoclone Ab,McAb） McAb：一個(gè)B細(xì)胞受一種B細(xì)胞決定簇刺激增殖的漿細(xì)胞分泌的抗體只有通過(guò)雜交瘤技術(shù)才能制備。109 雜交瘤技術(shù)制備McAb流程圖 110 第四節(jié) 免疫應(yīng)答影響因素 機(jī)體、抗原兩大方面一機(jī)體(一) 遺傳受MHC-、基因控制(二) 年齡與免疫系統(tǒng)發(fā)育、成熟有關(guān) 胚胎期易形成免疫耐受 幼齡期免疫系統(tǒng)發(fā)育未成熟，易受母源抗體影響 成年期最好，但也受上次免疫Ab的影響 老年期差，易產(chǎn)

33、生自身免疫病、腫瘤111（三）營(yíng)養(yǎng) 嚴(yán)重缺蛋白、VitA、VitC、Fe、Zn、Sn等，免疫器官發(fā)育不良或退化 應(yīng)激（冷、熱、噪音、驚嚇、遷群、長(zhǎng)途運(yùn)輸、饑渴） 腎上腺素 免疫功能 健康：長(zhǎng)期患病、病毒感染、使用免疫抑制劑 免疫功能 112二抗原（一）性質(zhì) 親緣遠(yuǎn)：滅活苗 B細(xì)胞 體液免疫 親緣近：內(nèi)源性Ag T細(xì)胞 細(xì)胞免疫（二）物理狀態(tài) 可溶性Ag （血清蛋白、類毒素） Ab產(chǎn)生陰性期長(zhǎng)（2-3周） 顆粒性Ag 陰性期短（3-5天） 加佐劑Ag 陰性期短，一次注射可產(chǎn)生多次再次應(yīng)答113三接種途徑 皮下肌肉注射淋巴結(jié) 靜脈注射脾、骨髓 加弗氏佐劑淋巴結(jié)、肉芽腫部位 氣霧呼吸道粘膜 飲水呼吸

34、道、腸道 滴眼、滴鼻哈德氏腺114 四. 劑量 適當(dāng)范圍：好 大高劑量：可能發(fā)生免疫耐受 -接種間隔時(shí)間 疫苗：原有Ab還很高時(shí)不宜接種免疫監(jiān)測(cè) 制備高免血清：通常隔2周 每次接種Ab比前次增多115第五節(jié) 免疫應(yīng)答調(diào)節(jié) 正常機(jī)體自動(dòng)調(diào)節(jié)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答到最適合的程度，機(jī)制十分復(fù)雜，涉及免疫細(xì)胞、免疫分子和神經(jīng)-體液等方面的調(diào)節(jié)作用。116第五章 抗感染免疫 病原微生物 侵襲力 毒素 （感染） 寄生蟲(chóng) 畜禽機(jī)體 天然防御 抗感染 免疫應(yīng)答 （細(xì)胞免疫體液免疫） 117第一節(jié) 天然防御機(jī)制 機(jī)械阻擋 粘膜纖毛運(yùn)動(dòng) 化學(xué)作用 體表（皮膚、粘膜） 脂肪酸 溶菌酶 粘多糖 胃酸 一、生理屏障 蛋白酶

35、生物學(xué)作用 正常菌群 淋巴結(jié) 內(nèi)部 脾臟 過(guò)濾 血管壁 （ 血腦屏障 血胎屏障）118二、吞噬作用 嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、各種組織中的M 完全吞噬、不完全吞噬三、體液因素119四、細(xì)胞因子（一）單核因子 扁桃體發(fā)炎、嚴(yán)重外傷感染，為什么會(huì)發(fā)熱？ 細(xì)菌感染 單核吞噬細(xì)胞吞噬 產(chǎn)生各種單核因子 IL-1、IL-6、TNF- (1) 刺激下丘腦體溫中樞 體溫升高、發(fā)熱（抑制細(xì)菌繁殖、增強(qiáng)免疫應(yīng)答） (2) 刺激肝細(xì)胞 急性期蛋白 C3途徑激活補(bǔ)體、溶解細(xì)菌120(3) TNF刺激小血管擴(kuò)張、血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，促使白細(xì)胞、血小板粘附、移出，血液中IgG、補(bǔ)體、淋巴細(xì)胞移出，IL-8招引中性粒

36、細(xì)胞移行至感染局部。 但全身感染，全身血管擴(kuò)張、通透性增加、血漿喪失、休克、器官衰竭、死亡。(4) IL-12 Th Th1 NK細(xì)胞活化(二) 干擾素121第二節(jié) 抗各類病原體的感染免疫一、抗細(xì)菌的感染免疫（一）抗胞外菌的感染免疫1天然防御 吞噬細(xì)胞(莢膜、凝固酶抗吞噬) 肽聚糖C3激活補(bǔ)體(唾液酸抑制補(bǔ)體激活) LPS血管內(nèi)皮細(xì)胞、M產(chǎn)生TNF-、IL-1、IL-6、IL-12等1222特異性免疫 胞外菌體液免疫（Ab）為主IgG調(diào)理吞噬作用 調(diào)理素（IgG）調(diào)理吞噬作用示意圖123 IgM、IgGC1激活補(bǔ)體 IgG中和外毒素 SIgA免疫排除 分泌型抗體(SIgA)免疫排除作用示意圖

37、抗毒素(IgG)中和毒素示意圖免疫預(yù)防：弱毒菌苗、滅活菌苗均有效 124（二）抗胞內(nèi)菌感染免疫1天然防御 吞噬胞內(nèi)菌的M 激活 IFN 殺滅 IL-12 活化NK細(xì)胞2特異性免疫：細(xì)胞免疫與體液免疫結(jié)合細(xì)胞免疫殺滅胞內(nèi)細(xì)菌 淋巴因子（IFN-）活化M Tc的殺傷作用同時(shí)發(fā)生傳染性變態(tài)反應(yīng)（見(jiàn)下圖）125 傳染性變態(tài)反應(yīng)（肺結(jié)核）示意圖 126體液免疫消除胞外細(xì)菌 IgG調(diào)理吞噬 IgG、IgM，C1激活補(bǔ)體免疫預(yù)防：必須有弱毒菌苗+滅活苗127二抗病毒感染免疫（一）天然防御 病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生IFN-、，干擾病毒復(fù)制 NK細(xì)胞自然殺傷作用 IFN-、促進(jìn)NK細(xì)胞作用（二）特異性免疫：體液免疫與細(xì)

38、胞免疫聯(lián)合作用免疫預(yù)防不能只用滅活苗128-體液免疫產(chǎn)生特異抗體，作用細(xì)胞外的病毒 中和作用（IgG） 調(diào)理作用（IgG） 激活補(bǔ)體（IgM、IgG）-細(xì)胞免疫對(duì)細(xì)胞內(nèi)的病毒作用 Tc特異殺傷感染病毒的靶細(xì)胞 穿孔素溶解靶細(xì)胞 表達(dá)粘附蛋白（FasL）使靶細(xì)胞凋亡 IFN-抑制病毒復(fù)制機(jī)體抗病毒的免疫應(yīng)答也可造成型變態(tài)反應(yīng)129 三抗真菌的感染免疫 真菌感染主要見(jiàn)于狗、貓皮膚，家禽的肺及畜禽飼料中黃曲霉中毒。 真菌在表皮或肺難于接觸淋巴細(xì)胞、黃曲霉毒素則是簡(jiǎn)單的化合物，無(wú)免疫原性，所以，真菌和毒素引起機(jī)體的免疫很差，研究很少，沒(méi)疫苗可用。主要靠清潔、健康的皮膚及脂肪酸防御真菌感染皮膚。做好飼料

39、保存，防止引起的霉菌毒素中毒。130四抗寄生蟲(chóng)的感染免疫（一）因世代寄生，寄生蟲(chóng)形成了各種逃避宿主免疫的機(jī)制： 蟲(chóng)體表面帶宿主成分，免疫原性弱 生活史復(fù)雜，不同時(shí)期蟲(chóng)體表面抗原不同 有的蟲(chóng)體表面抗原不斷脫落更換 有的形成包囊寄生腸腔，蟲(chóng)體大，相應(yīng)抗體不能作用 有的能抵抗相應(yīng)抗體等作用 有的可產(chǎn)生破壞抗體的酶 故研究寄生蟲(chóng)免疫預(yù)防的疫苗比較困難 131（二）特異性免疫 原蟲(chóng)寄生于宿主細(xì)胞內(nèi)以細(xì)胞免疫為主 蠕蟲(chóng)以體液免疫（IgE）嗜酸性粒細(xì)胞脫出胞漿顆粒堿性蛋白殺滅幼蟲(chóng)132第六章 變態(tài)反應(yīng)（allergy） 對(duì)某種Ag已進(jìn)行免疫應(yīng)答的機(jī)體，再接觸同種Ag時(shí)發(fā)生的、引起生理功能紊亂或組織損傷的再次

40、免疫反應(yīng)。 變應(yīng)原（allergen）:引起機(jī)體發(fā)生變態(tài)反應(yīng)的抗原。 完全變應(yīng)原（異種血清、蛋白質(zhì)、花粉、微生物、寄生蟲(chóng)等） 不完全變應(yīng)原（藥物、青霉素等） 133 類型：、型 過(guò)程：1.變應(yīng)原初次進(jìn)入機(jī)體（第一階段） 初次免疫應(yīng)答 產(chǎn)生免疫物質(zhì)（Ab或TDTH） 機(jī)體處于敏感狀態(tài)2.變應(yīng)原再次進(jìn)入機(jī)體（第二階段） 作用到Ab或TDTH 發(fā)生癥狀 （ 如下圖所示）134135第一節(jié) 型變態(tài)反應(yīng)一發(fā)生機(jī)制（以青霉素過(guò)敏為例） 136二特點(diǎn)：1 由IgE引起2 與遺傳有關(guān)3 癥狀發(fā)生快（幾秒或幾分鐘），消失快4 只引起全身或局部功能紊亂三常見(jiàn)過(guò)敏病例 青霉素、免疫血清、花粉、食物等過(guò)敏四診斷 青霉

41、素皮試 檢出變應(yīng)原飼料137五預(yù)防 1. 避免致敏機(jī)體再次接觸變應(yīng)原 2. 脫敏注射免疫血清 分小量，隔2030min，多次注射六治療 1. 注射腎上腺素、麻黃堿、色甘酸二鈉等 穩(wěn)定肥大細(xì)胞、堿性粒細(xì)胞膜 2. 服用撲爾敏、苯海拉明等，抑制組織胺 3. 注射葡萄糖酸鈣等降低血管通透性等 138 第二節(jié) 型變態(tài)反應(yīng)（細(xì)胞溶解型）一發(fā)生機(jī)制 139二特點(diǎn)1 IgM、IgG、補(bǔ)體、M、NK細(xì)胞等參與2 血細(xì)胞溶解三常見(jiàn)病例1 輸血反應(yīng) A型紅細(xì)胞 輸給 B型紅細(xì)胞人 A型紅細(xì)胞溶解 為什么？ 如何預(yù)防？1402新生幼畜溶血癥 馬 + 驢 第一胎 Aa+ Aa- 駒Aa+ 駒（第二胎）Aa- 幼駒(吃

42、母驢初乳后溶血死亡) 為什么？（型變態(tài)反應(yīng)） 如何預(yù)防？（選擇：不吃初乳，輸血） 141142 3. 藥物引起的溶血驗(yàn)血、停藥 4感染引起的溶血用藥或用疫苗消除病原（馬傳染貧血病毒、邊蟲(chóng)、錐蟲(chóng)、焦蟲(chóng)、沙門氏菌等） 143第三節(jié) 型變態(tài)反應(yīng)（免疫復(fù)合物型） 一發(fā)生機(jī)制第一步：可溶性抗原 機(jī)體 Ab(IgG、IgA、IgM)(病毒,免疫血清)第二步：Ag+Ab (Ag-Ab)n復(fù)合物Ab過(guò)量大復(fù)合物 易被吞噬細(xì)胞消除Ag過(guò)量小復(fù)合物 易從尿中排出144 Ag稍超過(guò)Ab 中等大小復(fù)合物 易通過(guò)血管壁、沉積基底膜+補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞作用 血管炎（腎小球腎炎、關(guān)節(jié)炎、發(fā)熱、全身出血） 145146二特點(diǎn)1由

43、IgG、IgA、IgM與相應(yīng)Ag（稍大量） 形成中等大小復(fù)合物引起 2. 有補(bǔ)體、中性粒細(xì)胞等參加3. 以血管炎和臨近組織損傷為特征147三常見(jiàn)疾病 1 局部型變態(tài)反應(yīng)（Authus反應(yīng)）多次皮下注射血清注射局部出現(xiàn)炎癥（水腫、出血、壞死）2血清病（全身性型變態(tài)反應(yīng)）一次注射大量免疫血清后10天左右，全身反應(yīng)（皮膚紅斑、水腫、尋麻疹、淋巴結(jié)腫大、關(guān)節(jié)炎、發(fā)熱、蛋白尿、中性白細(xì)胞減少）幾天后自行消退 注意與血清過(guò)敏癥區(qū)別3多種傳染病表現(xiàn)的，皮疹、關(guān)節(jié)炎、眼炎、皮炎、腎小球腎炎，均因型變態(tài)反應(yīng)引起 治療：用抗菌藥等消滅病原（Ag） 148149第四節(jié) 型變態(tài)反應(yīng)（遲發(fā)型）一發(fā)生機(jī)理第一步：初次Ag

44、 機(jī)體 細(xì)胞免疫應(yīng)答 Th1(TDTH)第二步：再次Ag 機(jī)體 Th1 多種淋巴因子 大量吞噬細(xì)胞集中于Ag存在部位，引起組織細(xì)胞變性、壞死二特征 1再次進(jìn)入Ag后出現(xiàn)癥狀慢（48-72h）（遲發(fā)型） 2出現(xiàn)局部炎癥（單核細(xì)胞浸潤(rùn)、組織變性、壞死）150三常見(jiàn)疾病 1 傳染性變態(tài)反應(yīng)（胞內(nèi)菌引起） 結(jié)核分支桿菌感染肺結(jié)核（圖）-結(jié)核菌素試驗(yàn)乳牛結(jié)核病檢疫 結(jié)核菌素(核桿菌裂解提取物)0.lml注入乳牛頸側(cè)皮內(nèi)72h注射部位出現(xiàn)紅腫（陽(yáng)性） 或0.lml滴入乳牛眼結(jié)膜囊內(nèi)15-18h眼流膿性分泌物（陽(yáng)性） 1512變態(tài)反應(yīng)皮炎 人、動(dòng)物皮膚第一次接觸變應(yīng)原（油漆、染料、農(nóng)藥、塑料等） Th1 再

45、次接觸同種變應(yīng)原 Th 24-96h 皮炎(紅腫、奇癢、水皰)、抓傷、感染 治療: (1) 查出變應(yīng)原，避免再次接觸 (2) 對(duì)癥治療: 消腫、止癢、抗局部感染1523同種異體組織移植排斥反應(yīng)異體組織（MHC-） 受體細(xì)胞免疫應(yīng)答 Th1 淋巴因子 炎癥反應(yīng) 控制排斥: (1) 組織配型 (2) 用免疫抑制藥物抑制受體的免疫功能153第七章 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)包括細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù) 體液免疫檢測(cè)技術(shù)血清學(xué)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)-檢測(cè)機(jī)體血液中的T細(xì)胞數(shù)量 E玫瑰花環(huán)試驗(yàn) T細(xì)胞酸性醋酸萘酯酶測(cè)定-檢測(cè)機(jī)體血液中T細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn) T細(xì)胞

46、活化試驗(yàn)154一E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)原理：人、豬、牛、羊等的T細(xì)胞膜上的CD2是綿羊紅細(xì)胞受體，馬、豬的T細(xì)胞膜上的CD2是豚鼠紅細(xì)胞的受體。28 T細(xì)胞的E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)155 二. 酸性醋酸萘酯酶測(cè)定 原理：酸性醋酸萘酯酶 醋酸萘酯 萘酚+醋酸離子 + 大偶氮副品紅 紅色反應(yīng)物 + 甲基綠 紅黑色顆粒 用途：1.鑒別T、B細(xì)胞；2.血液中T細(xì)胞計(jì)數(shù) 156 三淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（一）形態(tài)學(xué)試驗(yàn)法原理：PHA+T細(xì)胞（有PHA受體） 轉(zhuǎn)化 大的淋巴母細(xì)胞 顯微鏡觀察計(jì)算轉(zhuǎn)化率 轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化率=(過(guò)渡型細(xì)胞過(guò)渡型細(xì)胞+母細(xì)胞母細(xì)胞)/200個(gè)淋巴細(xì)胞個(gè)淋巴細(xì)胞100%特點(diǎn)：簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性較差 15730T細(xì)

47、胞受PHA作用轉(zhuǎn)化后的形態(tài)示意圖158（二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）摻入法原理： 試驗(yàn)管 對(duì)照管 PHA+T細(xì)胞+3H-TdR PHA+T細(xì)胞 轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化 淋巴母細(xì)胞 淋巴母細(xì)胞 （摻入3H-TdR） （無(wú)3H-TdR摻入） 液體閃爍儀測(cè)摻入 測(cè)CPM 3H-T的脈沖數(shù)CPM 計(jì)算轉(zhuǎn)化刺激指數(shù)SI=試驗(yàn)管試驗(yàn)管CPM/對(duì)照管對(duì)照管CPM特點(diǎn)：準(zhǔn)確，需昂貴的閃爍儀159 四巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)原理： 試驗(yàn) 對(duì)照 Ag+T細(xì)胞+M T細(xì)胞+ M 轉(zhuǎn)化 不轉(zhuǎn)化 M移動(dòng)抑制因子 無(wú)M移動(dòng)抑制因子 M的移動(dòng)面積變小小 M的移動(dòng)面積大大 計(jì)算移動(dòng)指數(shù)MIMI=試驗(yàn)試驗(yàn)M的移動(dòng)面積的移動(dòng)面積/對(duì)照對(duì)照M

48、的移動(dòng)面積的移動(dòng)面積100% 160 五T細(xì)胞活化試驗(yàn)（MTT檢測(cè)法）原理：PHA、ConA+T細(xì)胞（受體） 轉(zhuǎn)化 分裂、增殖 脫氫酶 甲氮唑鹽（MTT） 甲簪（formazan） 酶標(biāo)儀（595nm）測(cè)OD值特點(diǎn)：敏感、準(zhǔn)確 161第二節(jié)第二節(jié) 體液免疫檢測(cè)技術(shù)體液免疫檢測(cè)技術(shù) 血清學(xué)試驗(yàn)(抗原抗體試驗(yàn))種類：1沉淀試驗(yàn) 2凝集試驗(yàn) 3補(bǔ)體參與的試驗(yàn) 傳統(tǒng)試驗(yàn) 4中和試驗(yàn) 5標(biāo)記抗體試驗(yàn)新技術(shù) 162一體外抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律1高度特異性異嗜性抗原與免疫血清之間 交叉性腸道桿菌與免疫血清之間解決辦法：解決辦法： 將動(dòng)物免疫血清中的多克隆抗體通過(guò)吸收試驗(yàn)，制成單因子血清 應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備單

49、克隆抗體 1632反應(yīng)可逆性 PH 7.0 T 370C Ag+血清(Ab) Ag-Ab復(fù)合物 PH3 T600C 利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的可逆性規(guī)律，建立親和層析技術(shù)，純化免疫純的抗原或抗體164親和層析技術(shù)提取免疫純抗體示意圖 1653反應(yīng)二階段性第一階段反應(yīng)形成Ag-Ab復(fù)合物第二階段反應(yīng)出現(xiàn)可觀察的現(xiàn)象4抗原抗體反應(yīng)結(jié)果受多因素影響（1）免疫血清質(zhì)量要好 注意注意： -空腹采血 -防止細(xì)菌污染用具滅菌，無(wú)菌操作 -防止溶血用具滅菌后干燥，防止酒精與血接觸 -保存好血清加適量防腐劑，2-80C保存 166（2）電解質(zhì) 稀釋抗原、血清常用0.85%NaCl溶液（生理 鹽水），但稀釋禽類

50、血清用6%8%鹽水更好。 作用：降低抗原抗體的電勢(shì)，完成二步反應(yīng)（3）溫度：40C560C均可 溫度低反應(yīng)慢，溫度高反應(yīng)快。 最常用370C 30min167（4）PH值 稀釋抗原、血清的溶液PH6.08.0均可以，最常用PH7.07.2 通?？乖贵w蛋白的等電點(diǎn)都在PH6以下，若抗原或抗體溶液PH接近等電點(diǎn)，自身就會(huì)凝聚，出現(xiàn)非特異性的凝集或沉淀反應(yīng) 為了穩(wěn)定PH，故在抗原抗體反應(yīng)中最好用PH7.07.2的磷酸緩沖液（PBS）作抗原抗體稀釋液因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)結(jié)果受多因素影響，為了證實(shí)試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，故在試驗(yàn)中一定要設(shè)立陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照 168二各類抗原抗體反應(yīng)簡(jiǎn)介（一）沉淀試驗(yàn) 0.85%

51、NaCl可溶性抗原 +免疫血清 出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象(血清蛋白、病毒) （抗體） 比例適合 沉淀原 沉淀素 比例不適合 不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象 容易過(guò)多 前帶現(xiàn)象（稀釋）169 170 比例不適合不能完成第二步反應(yīng) 帶現(xiàn)象 1711環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理：小試管內(nèi)，下層沉 淀素與上層沉淀原 在界面應(yīng)，形成白 色沉淀環(huán)。用途：檢測(cè)皮毛中的炭疽 桿菌抗原（Ascoli試驗(yàn)）1722雙向瓊脂擴(kuò)散（瓊擴(kuò)）原理？操作步驟？結(jié)果判斷：特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、敏感性低、耗時(shí)用途：定性分析抗原成分1733對(duì)流免疫電泳原理？操作步驟？結(jié)果判斷： Ag Ab特點(diǎn)：反應(yīng)時(shí)間短，敏感性提高用途：定性，已不多用（水貂阿留申病，以病原Ag檢測(cè)病貂血清中的

52、抗體）174（二）凝集試驗(yàn)基本原理： 生理鹽水顆粒性抗原 + 相應(yīng)抗血清 抗原顆粒凝集(細(xì)菌、紅細(xì)胞) 比例適合 凝集原 凝集素 過(guò)多 后帶現(xiàn)象 （稀釋血清）1751玻片凝集試驗(yàn) 2試管凝集試驗(yàn)原理？操作步驟？結(jié)果分析？特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速 準(zhǔn)確、耗時(shí)用途：定性，細(xì)菌鑒 診斷布氏桿菌 定、血型鑒定 病，測(cè)定抗體 的凝集價(jià)(定量) 1763間接凝集試驗(yàn)基本原理： 可溶性抗原+惰性載體（聚苯乙烯乳膠微粒、炭粒、綿羊紅細(xì)胞等） 抗原致敏載體 電解質(zhì) 抗原致敏載體+相應(yīng)免疫血清(抗體) 被動(dòng)載體凝集(間接乳膠凝集、間接炭素凝集、間接紅細(xì)胞凝集等 )177 特點(diǎn)：敏感(在微量反應(yīng)板中進(jìn)行試驗(yàn))、快速 用途：

53、用已知抗原致敏的載體可檢測(cè)血清中的特異抗體及其效價(jià) 若用已知免疫血清（Ab）致敏的紅細(xì)胞，則可檢測(cè)病毒等可溶性抗原稱為反向間接血凝試驗(yàn)。 178 179三補(bǔ)體參與的試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)1參與反應(yīng)：抗原抗體反應(yīng)系統(tǒng)、補(bǔ)體（豚鼠血清）、指示系統(tǒng)（綿羊紅細(xì)胞、溶血素）2反應(yīng)原理：如下圖所示3特點(diǎn)：敏感性特異性高 正式試驗(yàn)前要進(jìn)行下列測(cè)定，操作較繁（溶 血素效價(jià)、補(bǔ)體效價(jià)、抗原效價(jià)）4用途：用于牛肺疫、副結(jié)核、布氏桿菌病、 錐蟲(chóng)病、馬傳貧、鼻疽等的檢疫180181（四）中和試驗(yàn)（病毒、毒素中和試驗(yàn)）原理：病毒與抗血清中抗體特異結(jié)合后失去感 染易感動(dòng)物、雞或鴨胚、細(xì)胞活性例例1 -NDV 911d雞胚 24

54、48h雞胚死亡 -NDV+抗血清 911d雞胚 雞胚不死亡182例例2 口蹄疫病毒(FMDV) 47d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 47d乳鼠 乳鼠不死亡例例3 FMDV 仔豬腎傳代細(xì)胞(IB-RS-2)單層細(xì)胞 細(xì)胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解FMDV+抗血清 IB-RS-2單層細(xì)胞 細(xì)胞無(wú)病變CPU183用途：1.用已知血清堅(jiān)定病毒診斷病毒病2.用已知病毒檢測(cè)血清抗體診斷病毒感染，測(cè)定病毒免疫血清效價(jià)（中和價(jià)）184（五）標(biāo)記抗體技術(shù)（標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)）包括：熒光標(biāo)記抗體技術(shù) 酶標(biāo)記抗體技術(shù) 同位素標(biāo)記技術(shù)1.熒光標(biāo)記抗體技術(shù)（免疫熒光技術(shù)）原理：熒光素（F）+

55、Ab AbF(FITC) AbF + Ag Ag- AbF 紫外光 Ag- AbF用途：用AbF檢測(cè)抗原 （定性、定位）特點(diǎn)：敏感，需熒光顯微鏡185方法： 直接法 間接法 F F Ag Ag比較： 檢測(cè)一種抗原 標(biāo)記一種動(dòng)物的 就須標(biāo)記特異 球蛋白AbF，就能 的一種AbF 檢測(cè)多種抗原 較特異 較敏感 1862.酶標(biāo)記抗體技術(shù)（酶免疫測(cè)定技術(shù)）（1） 間接法 （2）雙抗體夾心法原理：用途：已知抗原、酶標(biāo) 已知血清抗體、酶 抗體測(cè)血清抗體 標(biāo)抗體測(cè)抗原1873. 放射免疫測(cè)定法原理：Ag+AbR Ag-AbR 或 AgR+Ab AgR-Ab 用液相閃爍儀測(cè)R放出的射線量特點(diǎn)：敏感性極高，需高

56、級(jí)閃爍儀 同位素對(duì)人有放射性危害用途：用于藥物、激素、酶、腫瘤抗原等測(cè)定188第八章 免疫學(xué)在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用主要用于動(dòng)物傳染病、寄生蟲(chóng)病的免疫學(xué)預(yù)防、診斷和治療，但必須有生物制品第一節(jié) 獸醫(yī)生物制品概念：利用微生物、寄生蟲(chóng)或其代謝產(chǎn)物制成的用于預(yù)防、診斷或治療傳染病或寄生蟲(chóng)病的制劑。種類：疫苗、診斷液、免疫血清189 一、疫苗動(dòng)物機(jī)體獲得對(duì)某種傳染病的免疫力可通過(guò)4種途徑： 天然主動(dòng)獲得自然感染病愈（免疫時(shí)間長(zhǎng)） 人工主動(dòng)獲得接種疫苗（較長(zhǎng)） 天然被動(dòng)獲得幼畜從初乳獲得母源抗體 幼禽從卵黃獲得母源抗體(短) 人工被動(dòng)獲得人工注射免疫血清或高免蛋 黃液（短）疫苗概念：給動(dòng)物進(jìn)行人工主動(dòng)免疫的生物

57、制品190疫苗種類：-傳統(tǒng)疫苗弱毒疫苗、滅活疫苗、類毒素、多價(jià)苗、多聯(lián)苗等-新型疫苗亞單位疫苗、基因工程疫苗、抗獨(dú)特型抗體、合成肽苗等（一）傳統(tǒng)疫苗1.弱毒疫苗研制：(1)從自然界中篩選弱毒株新城疫系弱毒苗（2）選擇免疫原性好的強(qiáng)毒株，經(jīng)物理、化學(xué)、生物學(xué)方法使其毒力減弱,成為無(wú)致病性(安全)具有良好免疫原性(有效)的弱毒株，大量繁殖191特點(diǎn)：（1）注射后可在動(dòng)物體內(nèi)短期繁殖（2）可誘導(dǎo)體液免疫、細(xì)胞免疫（3）用量少，成本低，接種方便（4）研究過(guò)程較長(zhǎng)，保存條件要求凍干冷藏， 毒力有返強(qiáng)的潛在危險(xiǎn)1922.死苗（滅活苗、滅能苗） 研制：選擇毒力強(qiáng)、免疫原性好的毒株大量培養(yǎng)+1%左右甲醛滅活，

58、保留免疫原性+佐劑 特點(diǎn)：（1）研制時(shí)間較短，安全，可常溫保存（2）免疫原性較差，只產(chǎn)生體液免疫，效果比弱毒疫苗差（3）用量較大，成本較高，注射沒(méi)那么方便1933.類毒素外毒素的滅活苗研制：液體大量培養(yǎng)產(chǎn)毒細(xì)菌 去除菌體，提取外毒素+甲醛，滅活成類毒素+佐劑應(yīng)用：(1)直接作疫苗注射 (2)反復(fù)注射免疫馬匹，制備抗毒素血清4.多價(jià)苗同種病原微生物多種血清型毒株制成的疫苗(例如大腸桿菌多價(jià)苗、禽流感多價(jià)苗) 194多聯(lián)苗不同種病原微生物聯(lián)合制成的疫苗例:新支二聯(lián)苗(新城疫病毒+傳染性支氣管炎毒) 豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)苗 犬瘟熱/腺病毒/傳染性肝炎/副流感/細(xì)小病毒/。 鉤端螺旋體六聯(lián)苗特點(diǎn):

59、一針?lè)蓝喾N病，節(jié)約人力、物力注意:疫苗不能任意混合注射，可能互相抑制干擾195（二）新型疫苗1.亞單位疫苗提取細(xì)菌或病毒結(jié)構(gòu)中的有效抗原+佐劑例如：豬大腸桿菌菌毛K88苗 禽巴氏桿菌微莢膜苗特點(diǎn)：安全，成本高1962.基因工程疫苗（1）基因工程亞單位苗制備的細(xì)菌或病毒中編碼保護(hù)性蛋白抗原的基因（目的基因）與表達(dá)質(zhì)粒（載體）重組轉(zhuǎn)化宿主細(xì)菌或細(xì)胞大量培養(yǎng)轉(zhuǎn)化菌或細(xì)胞，表達(dá)保護(hù)性蛋白抗原純化表達(dá)的抗原+佐劑197（2）基因工程活載體苗制備目的基因與痘病毒弱毒苗的基因組重組(可聯(lián)接多個(gè)外源基因)給動(dòng)物接種重組活痘苗重組活痘苗在動(dòng)物體內(nèi)繁殖，表達(dá)外源基因抗原，產(chǎn)生免疫198（3）基因缺失苗病毒基因組中有編碼抗原基因和編碼毒力的基因應(yīng)用基因切除、插入、缺失等方法，使毒力基因突變?nèi)コ臃N動(dòng)物，只表達(dá)抗原，產(chǎn)生免疫（無(wú)毒、安全、有效）199（4）基因疫苗獲取表達(dá)保護(hù)性抗原的基因與表達(dá)質(zhì)粒重組重組表達(dá)質(zhì)粒直接接種動(dòng)物（肌肉注射、皮下注射、基因槍轟擊接種）重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入皮膚、肌肉、細(xì)胞，表達(dá)抗原，產(chǎn)生免疫200（5）轉(zhuǎn)基因植物口服疫苗編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因與表達(dá)質(zhì)粒重組重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)植物桿菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化的植物桿菌感染食用植物目的基因在植物中表達(dá)蛋白抗原動(dòng)物吃植物，吸收蛋白抗原產(chǎn)生免疫2013.抗獨(dú)特型抗體疫苗制備抗病原微生物的