獸醫(yī)應用免疫學

1、獸醫(yī)應用免疫學獸醫(yī)應用免疫學 獸醫(yī)專業(yè)重要基礎課獸醫(yī)專業(yè)重要基礎課黃青云黃青云 唐滿華唐滿華 謝安新謝安新編制編制2002.82第一章第一章 緒論緒論 第一節(jié) 免疫的概念 免疫（immune）是指人和動物機體免疫系統(tǒng)特異識別、清除體內抗原(Antigen)的生理功能。 有利方面： 防止病原微生物感染 防止腫瘤發(fā)生 不利方面：一定條件下引起 變態(tài)（超敏）反應 自身免疫病 免疫耐受3一免疫學發(fā)展簡史 （一） 免疫學是人類在與傳染病的病原微生物作斗爭的過程中建立和發(fā)展起來的。免疫學與醫(yī)學微生物學、獸醫(yī)微生物學、傳染病學有不可分割的聯(lián)系。（二） 免疫學于18世紀末開始，至今經歷了三個發(fā)展階段4免疫實踐

2、、免疫學形成階段（16世紀18世紀末） 16世紀（明朝）中國醫(yī)生首先實踐用人痘痂皮接種青少年預防天花 17世紀推廣 18世紀傳到亞洲、歐洲各國 18世紀末，英國醫(yī)生Jenner首次發(fā)明牛痘預防天花。 免疫學誕生 Vaccine(牛痘)定為“疫苗” Vaccination（種痘）定為“免疫接種”5免疫學實驗研究階段（19世紀末20世紀中） 實驗室發(fā)明人工培育疫苗 Pasteur（法） 微生物學、免疫學創(chuàng)始人 1880年 雞霍亂（巴氏桿菌）弱毒菌苗 1882年 狂犬病病毒弱毒疫苗 疫苗免疫機理研究細胞免疫學說與體液免疫學說的爭論 6 細胞免疫學說（1890） Metchnikoff（俄1883）首

3、次發(fā)現(xiàn)吞噬細胞的吞噬作用 體液免疫學說（1897） Behring(德1890)、北里（日本）首次發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素（血清抗體） 1891年首次用抗毒素血清治好白喉病人 抗體、抗原概念、血清學試驗形成 Erlich（德 1897）提出“體液免疫學說” 7 兩種學說爭論了70年 發(fā)現(xiàn)變態(tài)反應 提出各種抗體產生理論（學說） 發(fā)現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象 1963年Wright,Deuglas發(fā)現(xiàn)調理素 兩種學說得以統(tǒng)一認識 8現(xiàn)代細胞、分子免疫學研究發(fā)展階段（20世紀中期以來） 免疫概念從傳統(tǒng)概念發(fā)展為現(xiàn)代概念 傳統(tǒng)概念防御感染；有利 現(xiàn)代概念識別排除抗原；既有利也有不利 現(xiàn)代免疫學完全從微生物學中獨立出來 理論

4、和技術在細胞和分子水平上飛躍發(fā)展 免疫學研究中有20多位學者的成果獲諾貝爾獎9（三）免疫學分支學科 基礎免疫學 免疫學 免疫遺傳學 細胞、分子免疫學 分子免疫學 免疫學原理 免疫生物學 免疫生理學 免疫病理學 免疫藥理學 應用免疫學 醫(yī)學免疫學 臨床免疫學 移植免疫學 血液免疫學 腫瘤免疫學 繁殖免疫學 獸醫(yī)（應用）免疫學 家禽免疫學10（四）獸醫(yī)（應用）免疫學 理論：理論：免疫系統(tǒng)、抗原、免疫應答、抗感染免疫、變態(tài)反應、常用免疫學檢測技術、免疫學在獸醫(yī)學中的應用 特點：特點：較抽象、系統(tǒng)性強、循序漸進 實驗：實驗：目前最常用的6項實驗（分4次做） 目的：目的：為動物傳染病的免疫預防、診斷治

5、療打基礎，是重要的專業(yè)基礎課 為深入學習、研究免疫學（研究 生）打基礎11第二章第二章 免疫系統(tǒng)免疫系統(tǒng)Immune system 機體內參與對抗原的免疫應答，執(zhí)行免疫功能的一系列器官、細胞和分子。1213第一節(jié) 免疫器官 豬免疫器官示意圖 14雞免疫器官示意圖 15一中樞免疫器官免疫細胞產生與成熟場所 （一） 骨髓（bone marrow）長骨髓 源生各種免疫細胞。 哺乳動物B細胞成熟，直接進行免疫應答， 產 生大量抗體，約占40%。（二） 胸腺（thymus） 誘導淋巴干細胞成熟T細胞 （三） 禽法氏囊（bursa of fabricius） 誘導淋巴干細胞成熟為B細胞 16免疫細胞誘生示

6、意圖 17二外周免疫器官免疫細胞分布及進行免疫應答的場所 （一）淋巴結（lymphnode）皮質區(qū)：B細胞25%副皮質區(qū)：T細胞75%髓質區(qū)：巨噬細胞(M)、樹突狀細胞(DC) （見下圖） 作用：對淋巴液來的抗原（注射的疫苗）進行免疫應答18 19（二）脾臟(spleen) 白髓 淋巴鞘T細胞25% 脾小結B細胞65% 紅髓 巨噬細胞(M)、樹突狀細胞(DC) 作用 對來自血液的抗原進行免疫應答，主要產生抗體 20（三）粘膜免疫系統(tǒng)（me mbra n e immune system，MIS） 呼吸道 消化道 泌尿生殖道 腺體分泌管 作用：接受粘膜表面侵入抗原的免疫應答 大量產生分泌性抗體Ig

7、A，分布在粘 膜表面起粘膜免疫保護 粘膜下免疫細胞（T、B、M、DC）21（四） 禽哈德氏腺（Harder gland） 分布T細胞、B細胞 雞新城疫系苗滴眼免疫起重要作用 22第二節(jié) 免疫細胞 一淋巴細胞(lyphocyte) T、B、NK細胞：來源、分布、特征（重要表面標志）、亞類及功能。（一）T細胞 1. 來源、分布：胸腺 副皮質區(qū)、白髓、粘膜下，大量進行淋巴細胞再循環(huán)。 (請看下圖) 23 242.表面標志(1)T細胞抗原受體(T cell recepter,TCR) 組成：、二條肽鏈 多樣性：一個個體有1015克隆（株）Tc 作用：識別結合抗原，引起T細胞的免疫應答。 （下圖）25

8、TCR結構、作用示意圖26 基因水平上TCR多樣性產生的機制 TCR 胚系基因片段組合V 50 57D 2J 70 13VJ,VDJ連接多樣性 5070=3 103 57 2 13=1103 連接機動性 + +N區(qū)核苷酸插入 V-J V-D,D-J 總的多樣性 1015 多樣性機制27(2)紅細胞受體(Erythrocyte receptor,ER) 結構：單鏈多肽（CD2） 分布：成熟T細胞 作用：與綿羊紅細胞結合 E玫瑰花環(huán)試驗區(qū)分T、 B細胞，測細胞數(shù)量 （見下圖）28 T細胞的E玫瑰花環(huán)試驗29（3）致有絲分裂原植物血凝素（PHA）、刀豆素（ConA）受體 作用作用：與PHA或ConA

9、結合，小T細胞母細胞 化、轉化為有活性的T細胞淋巴 細胞轉化試驗。 區(qū)分T、B細胞。 檢測T細胞轉化功能。30 T細胞受PHA作用轉化后的形態(tài)示意圖31（4）T細胞表面抗原（標志） 分化不同時期的T細胞，表達不同蛋白質分子，稱為分化抗原（Cluster of differentiation，CD） CD2 單鏈多肽，成熟Tc上，ER CD3 5-6鏈多肽，成熟Tc上，與TCR/CD3 傳遞抗原信息 CD4 單鏈多肽，TH上，輔助TH的TCR識 別抗原，人愛滋病毒（HIV）受體 CD8 雙鏈多肽，Tc上，輔助Tc的TCR識 別抗原 （見下圖）32 33 3. T細胞亞群及其功能 亞群亞群 CD表

10、型表型 功能功能TC CD3+ CD4- CD8+ 殺傷靶細胞，分泌IFN-TS CD3+ CD4- CD8+ 分泌TSF，抑制T、B細 胞和m的作用 TDTH（TH1 ） CD3+ CD4+ CD8- 分泌MIF，IFN-等致 遲發(fā)型變態(tài)反應 TH2 CD3+ CD4+ CD8- 分泌 IL-4、IL-5等，輔助 B 細胞產生抗體34（二）B細胞1來源、分布：骨髓（法氏囊） 皮質區(qū)，脾小結，粘膜下；少進行再循環(huán) B細胞發(fā)育、分化過程示意圖352重要受體（1）抗原受體（Surface membrane immunoglobuling，SmIg） 未成熟B細胞 SmIgM 成熟B細胞 SmIgM

11、+SmIgD 每個動物體內約有每個動物體內約有107B細胞克?。ㄖ辏毎寺。ㄖ辏?，每個克隆每個克隆B細胞細胞SmIgM，SmIgD都不同，各識都不同，各識別結合一種抗原（每個別結合一種抗原（每個B細胞細胞105個個SmIg） SmIg多樣性的基因水平機制與多樣性的基因水平機制與TCR相似相似作用：識別結合抗原，引起B(yǎng)細胞的免疫應答36 37 (2) Fc受體 B細胞膜上的糖蛋白 能與抗體Fc段結合（3）C3b受體 B細胞膜上的另一種蛋白 能與補體C3b結合 （見下圖）38BEEEEEEEA玫瑰花環(huán)示意圖BEEEEEEEAC玫瑰花環(huán)示意圖FcRFcC3bRC3b39 402. B細胞亞群及功

12、能 B1 、B2 亞群特性特性 B1（CD5+） B2（CD5-）發(fā)育程度 未成熟 成熟Sm Ig 類型 Sm IgM Sm IgM、Sm IgDIgG Fc受體 +C3b受體 +針對的抗原 TI Ag TD Ag產生的抗體 IgM IgM、IgG、IgA、IgE、IgD再次抗體應答 +免疫耐受 易形成 難形成 41 (三）自然殺傷細胞(natural kill cell,NKC) 骨髓骨髓 體液體液 1.膜表面標志 Fc受體（CD16）：與抗體Fc結合 抑制性受體（KIR） 激活性受體（KAR）2.作用：自然殺傷病毒感染細胞、腫瘤細胞，但 不殺傷正常組織細胞。為什么？ 殺傷機理：使靶細胞凋亡

13、 發(fā)揮抗體依賴的細胞介導的細胞毒性 作用（ADCC）4243二、單核-吞噬細胞系統(tǒng) 單核吞噬細胞的發(fā)育與分布 骨髓 血液 組織多能干細胞 結蹄組織：組織細胞 單 巨 肺：肺泡巨噬細胞髓樣干細胞 核 噬 肝： Kupffer細胞 細 細 脾： 巨噬細胞前單核細胞 胞 胞 神經組織：小膠質細胞 骨：破骨細胞 關節(jié)：滑膜A型細胞 胸腹腔:巨噬細胞44 (一)單核吞噬細胞特征 膜受體：Fc受體 、 C3b受體 膜抗原：Ia_ M Ia+ M （二）單核吞噬細胞的功能 1. 分泌功能：分泌近百種活性物質 2.吞噬消化功能monocyte Ia M （見下表和圖）45單核吞噬細胞分泌的活性物質舉例 產物分

14、類 分 泌 的 活 性 物 質酶類 溶菌酶、蛋白質、肽酶、糖苷酶、 磷酸酶、脂酶、血纖維蛋白溶酶原、 膠原酶、彈性蛋白酶等血漿蛋白 凝血因子、a2巨球蛋白、補體成分 （C1 C2 C3 C4 C5 P因子、D因子、I因 子、H因子）等生物活性蛋白 IL-1、IL-6、IL-8、TNF、集落刺激 因子、間葉細胞增殖因子、血管生 成因子等低分子物質 前列腺素E、白三烯、胸腺嘧啶核甙等 46消耗大量O2呼吸爆發(fā)O2n-自由基H2O2、OH-、IO2殺死細菌473. 遞呈抗原功能Ia+ M將侵入體內的抗原物質傳遞給Th細胞的TCR如何遞呈 484. 殺瘤 M分泌蛋白水解酶、腫瘤壞死因子（TNF） 抑、

15、殺瘤細胞 助瘤：M進入腫瘤組織，分泌腫瘤血管因子，促進瘤細胞生長、轉移。49三抗原遞呈細胞 捕捉（攝取）、降解抗原，向T細胞遞呈抗原 種類： -巨噬細胞（M） -樹突狀細胞(DC) -郎罕氏細胞（Lc 皮膚、未成熟 DC） 共同特征：表達大量MHC-類分子 作用：捕捉、降解、遞呈抗原 50四.粒細胞、肥大細胞、紅細胞1. 粒細胞吞噬消化病原菌有IgG Fc受體，發(fā)揮ADCC作用，消除抗原堿性粒細胞有IgE Fc受體，參與過敏反應2. 肥大細胞 有大量IgE Fc受體，參與過敏反應3. 紅細胞 有C3b受體 起消除血液中抗原-抗體復合物(免疫復合物)的作用 1982年，sigel(美)提出“紅細

16、胞免疫系統(tǒng)” 51第二節(jié) 免疫分子 機體內參與調節(jié)免疫應答的各種蛋白分子一免疫細胞膜上分子（4類）（一）TCR（二）BCR（SmIgM SmIgD）（三）白細胞分化抗原（CD） 機體各種細胞，分化不同群，成熟不同階段，活化不同時期出現(xiàn)于膜上的蛋白質分子不同，以cluster of differtiation,CD命名、編號。 例如成熟T細胞都有CD2、CD3，分化成TH則有CD4，Tc有CD8 意義：以CD分子水平鑒定細胞 CD分子在細胞發(fā)揮功能時起作用 52（四）MHC分子什么叫MHC？MHC分子？著絲點 HLA復合體 第六號染色體 DP DQ DR 補體基因 B C A D區(qū) HLA- H

17、LA- HLA- 10001200kb 1000kb 16002000kb 35004000kb人類人類MHC即即HLA基因結構及表達基因結構及表達、類分子示意圖類分子示意圖 531 MHC-類分子 結構：重鏈，輕鏈 分布：所有有核細胞 作用：(1) 組織相容性抗原 (2) 靶細胞的MHC-I與內源性抗原結 合，限制Tc的TCR識別、殺傷靶 細胞 542 MHC-類分子 結構：鏈，鏈 分布：抗原遞呈細胞 作用：與外源性抗原肽結合，控制抗原 遞呈細胞，將抗原遞呈給TH，又 稱免疫相關抗原（immuno- assodiated antigen，Ia）55 56 57 583MHC-類分子：C2、C

18、4、Bf、TNF等，分布于血清中，發(fā)揮作用（五）其它膜分子，各種受體 三體液中的免疫分子三體液中的免疫分子 免疫球蛋白 、補體系統(tǒng) 、 細胞因子(一)免疫球蛋白(Immunoglobuling，Ig) B細胞膜表面Ig (SmIgM SmIgD) B細胞受抗原作用后分泌在體液中的抗體(IgM、 IgG、 IgA 、IgE 、IgD)59 1.Ig的基本結構602Ig的水解片段613五類Ig的主要特性 62(二)補體系統(tǒng)（complement system） 1補體系統(tǒng)的組成 20多種蛋白質，最基本的是C1（C1q、C1r、C1s）-C9共11種蛋白 2補體特性 不穩(wěn)定：56OC60OC30mi

19、n可滅活 平常無活性，經過系統(tǒng)激活才起作用 協(xié)助抗體吞噬細胞等，起非特異的清除抗原防御感染等作用 633.補體系統(tǒng)激活 C1途徑（傳統(tǒng)） C3途徑（替代）64 C1激活途徑（傳統(tǒng)途徑） C3激活途徑（替代途徑）IgG1及IgM的免疫復合物 細菌脂多糖、酵母多糖及 IgG、IgA的免疫復合物 Ca+ Mg+ C1C1 C3PA轉化酶（D因子） 酶原 Mg+ C3 C2+C4 C4b2a C3激活劑(Bb) C3PA C3b +C3a C5 C5b + C5a C 56789 靶細胞溶解 圖8-17 補體激活的兩條途徑 65 66 67補體系統(tǒng)激活作用 溶菌、病毒囊膜 粘連清除免疫復合物 C3a、

20、C5a的過敏毒素作用、趨化作用68(一)細胞因子 機體細胞分泌的調節(jié)細胞發(fā)育和功能的小 分子蛋白質，種類很多，各有特性，也有共性1. 共性 產生細胞與作用細胞多樣性 細胞受到刺激分泌快，自身作用或對鄰近細胞作用，降解快，刺激停止，細胞因子的產生也即停止 分子量小，產量微，與作用細胞的受體親和力高，作用強 692種類及功能(1) 白細胞介素（interleukin,IL） 產生：單核吞噬細胞、淋巴細胞 IL-1IL-23 誘導造血干細胞生長、分化,淋巴細胞增分化(2) 集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF) G-CSF 、M-CSF、 EPO T細胞、上皮細

21、胞、纖維母細胞產生 誘導造血干細胞定向分化、發(fā)育7071 72（1）干擾素（interferon，IFN） 產生： IFN- 白細胞產生 IFN- 成纖維細胞產生 IFN- T細胞產生 作用: 廣譜抗病毒 抗腫瘤 調節(jié)淋巴細胞作用 73 第三章第三章 抗原（抗原（Antigen） 完全抗原 免疫原性物質（細菌） 機體免疫細胞 免疫產物 （效應細胞、抗體）+物質 特異反應 反應原性 不完全抗原（半抗原） 物質(激素)+蛋白載體 機體免疫細胞 免疫產物 （抗體）+物質 特異反應 75第一節(jié)第一節(jié) 完全抗原（免疫原）的基本條件完全抗原（免疫原）的基本條件異物性，大分子，化學組成、結構復雜一異物性 親

22、緣關系越遠的物質，免疫性越強 自身物質可以形成“天然免疫耐受” 自身物質結構、成分改變后成為“自身抗原” 自身也有一些“隱蔽抗原”眼球晶體、精子、甲狀腺等蛋白 76二大分子 通常在10000dal以上三化學組成、結構復雜 明膠蛋白分子量10萬dal，但免疫原性差 因是直鏈AA組成 胰島素只有5734dal，但免疫原性好因 組成、結構復雜 凡含有苯環(huán)、雜環(huán)AA和糖的蛋白，結構 都較復雜，免疫原性好 思考思考：下列各物質是否是好的免疫原？ 為什么？1. 化學藥物注入機體2. 鐵釘釘入皮膚3. 玻璃插入皮膚4. 自身蛋白質5. 牛奶給狗喝6. 牛奶注入狗的皮下7. 細菌、病毒感染畜禽8. 細菌死苗喂

23、豬 第二節(jié)第二節(jié) 抗原決定簇抗原決定簇（antigenic determinants,AD） B細胞細胞AD T細胞細胞AD位置位置: 抗原表面(半抗原) 抗原內部(載體內)成分成分: AA,糖,核苷酸 肽大小大小: 56個AA,單糖,核苷酸 918個AA（肽）作用作用: 直接與BCR（SmIg）特 外源性抗原外源性抗原需APC吞噬 異識別 降解 直接與抗體特異結合 MHC-分子/抗原肽-TCR (Th) 內源性抗原內源性抗原 MHC-/抗 原肽-TCR(Tc)79 8081 第三節(jié) 抗原分類 不同角度有不同分類 分類依據(jù)分類依據(jù) 抗原類型抗原類型 抗原舉例抗原舉例 免疫原性 -完全抗原 各種

24、病原微生物 -不完全抗原（半） 糖、藥物、激素 抗原來源 -異種抗原 各種病原微生物 -同種抗原 同種異體血型抗原、 組織相容性抗原 -自身抗原 變性自身組織,隱蔽抗原(釋放) -異嗜性抗原 一些微生物、植物、動物、 人體細胞組織共有的抗原(鏈 球菌與人心肌,腎小球組織) 對Th -TD Ag 所有病原微生物等天然抗原 依賴性 -TI Ag 少數(shù)細菌多糖 8283 分類依據(jù)分類依據(jù) 抗原類型抗原類型 抗原舉例抗原舉例免疫保護性 -保護性抗原 新城疫病毒F、HN蛋白,口 (相應Ab有保護作用) 蹄疫病毒VP1、VP4蛋白 -非保護性抗原 布氏桿菌一些抗原，雞白 (相應Ab無保護作用， 痢桿菌一些

25、抗原 但有免疫診斷作用)對T細胞的 -普通抗原 絕大多數(shù)抗原 激活 AD特異識別激活T細胞 受MHC-分子限制 -超抗原 (super Ag) 少數(shù)抗原 AD非特異激活T細胞 (葡萄球菌、腸毒素、鏈 （多克隆激活） 球菌M蛋白等) 不受限制 84第四節(jié) 獸醫(yī)學中重要的天然抗原一微生物抗原 各種微生物各有不同的抗原成分，各有抗原特異性 同種微生物、不同株抗原成分也有差別，分為不同血清型 85（一）細菌抗原 例 腸道桿菌： 大腸桿菌 沙門氏菌 菌體(O)Ag 170多型 60多型,50多群 脂多糖,耐熱 畜禽AF群 鞭毛(H)Ag 60多型 60多型,第特異相(a.b.c) 蛋白質,不耐熱 第變異

26、相(1.2.3) 表面Ag -莢膜 炭疽桿菌 多糖多肽,耐熱 -菌毛 大腸桿菌(KAg) 傷寒桿菌(Vi Ag) 蛋白,不耐熱 100多種,K88、K99等 毒素Ag -外毒素(蛋白,免疫原性強,不耐熱,0.3-0.4%甲醛處理可脫毒制 成類毒素) -內毒素(脂多糖，免疫原性弱,耐熱,不能制成類毒素) 86 抗原結構式：鼠傷寒沙門氏菌(1.4.5.12：i.1.2) OAg 1.4.5.12 HAg 相i,相1.2 87(二) 病毒抗原 無囊膜病毒抗原成分主要是殼粒蛋白 有囊膜病毒抗原成分主要是囊膜粒(纖突)蛋白 有的只有一個血清型(豬瘟病毒) 有的有多種血清型(流感病毒)8889第五節(jié) 佐劑

27、(adjuvant)增強抗原免疫原性的物質增強抗原免疫原性的物質一疫苗佐劑 氫氧化鋁膠:吸附、濃縮、緩慢釋放抗原 10號白油、水花生油: 形成油包抗原水溶液，濃縮、緩慢釋放抗原 蜂膠: 含全面的營養(yǎng)物質，促進免疫細胞增生 維生素A、E: 促進免疫細胞增生 脂質體(人工制備類脂質小球體): 包裹抗原溶液，起載體+佐劑作用 分子佐劑: IL-2、IL-12、IL-18等，正研究用于基因工程疫苗、DNA疫苗90二制備高免血清的佐劑(一)弗氏不完全佐劑(Freund,s incomplete adjuvant，F(xiàn)IA) 配制：Ag溶液+石蠟油+羊毛脂（吐溫80） 攪拌乳化成油包Ag溶液劑型 機理：濃縮

28、緩釋Ag，刺激注射部位形成炎癥 反應，肉芽腫(二)弗氏完全佐劑(Freund,s complete adjuvant ，F(xiàn)CA) 配制: FIA+殺死的分枝桿菌 機理: 在FIA基礎上促進增強 M、T、B細胞增 殖和功能91第四章 免疫應答(immune response) 正常免疫應答、變態(tài)反應、免疫耐受 第一節(jié) 正常免疫應答的基本過程 識別階段 反應階段 效應階段 TDAg與TIAg有所不同92正常免疫應答的基本過程示意圖 93免疫應答的基本特征 自身識別 高度特異 免疫記憶（TDAg） 94第二節(jié) 細胞免疫(T cell mediated immunity,TMI)一基本過程 Ag pr

29、o-Tc 激活Tc 殺傷靶細胞 Ag Th Ag Th1(TDTC) 淋巴因子 炎癥反應 95二激活Tc的殺傷作用 特點：直接、特異，重復殺傷靶細胞 過程（機制） -在MHC-分子限制下，通過TCR特異識別結合靶細胞 -釋放穿孔蛋白，溶解靶細胞 -表達蛋白毒素，致靶細胞凋亡三 Th1的作用 Th再受到同種Ag的作用，釋放50多種淋巴因子(細胞因子) 炎癥反應、消除抗原 （主要的淋巴因子見下圖）969798四細胞免疫作用（一）有利方面 抗細胞內感染免疫 -胞內菌(結核桿菌、布氏桿菌、麻風桿菌等) -病毒，尤其慢性病毒 -原蟲 抗腫瘤（二）不利方面 傳染性變態(tài)反應遲發(fā)型變態(tài)反應(組織炎癥、損傷)9

30、9第三節(jié) 體液免疫(B cell mediated immunity,BMI) 一基本過程 TDAg APC降解 Th Th2 Bc 漿細胞 抗體(IgM、IgG) 記憶細胞 漿細胞 抗體(IgG) TDAg100 TIAg Bc 漿細胞 抗體(IgM)二抗體(Antibody,Ab；Immunoglubulin,Ig)(一) 抗體產生的一般規(guī)律1初次應答(primary response) 過程：陰性期(3-7天；2-3周) 對數(shù)期 穩(wěn)定期 下降期 特點：陰性期長，主要是IgM，抗體水平低，維持時間短101B（漿）細胞合成（分泌）Ig示意圖1022再次免疫應答 過程：陰性期 對數(shù)期(高) 穩(wěn)

31、定期(長) 下降期 陰性期短，或原有Ab暫時降低 Ab水平迅速升高 大量產生IgG 維持時間長103104（二）抗體產生理論 克隆選擇學說（clone selection theory） 科學地解釋了免疫應答（Ab產生）3大特點 哪3大特點？ 105106（三）抗體分類 分類依據(jù) Ab類型1. CH結構 IgM、IgG、IgA、IgE、 IgD及各亞類2. 與Ag反應 完全Ab2價 不完全Ab單價3. Ag與免疫機體 異種Ab病原微生物Ab 的關系 同種Ab血型Ab 自身Ab 異嗜Ab鏈球菌Ab1074血清學試驗 沉淀Ab（IgG） 凝集Ab（IgG、IgM） 補體結合Ab（IgG、IgM）

32、中和Ab（ IgG、IgM、IgA） 溶血素（紅細胞Ab，IgG、IgM） 調理素（IgG） 溶菌素（細菌抗體，IgG、IgM）108 5抗體均一性 多克隆Ab免疫血清Ab 單克隆Ab（monoclone Ab,McAb） McAb：一個B細胞受一種B細胞決定簇刺激增殖的漿細胞分泌的抗體只有通過雜交瘤技術才能制備。109 雜交瘤技術制備McAb流程圖 110 第四節(jié) 免疫應答影響因素 機體、抗原兩大方面一機體(一) 遺傳受MHC-、基因控制(二) 年齡與免疫系統(tǒng)發(fā)育、成熟有關 胚胎期易形成免疫耐受 幼齡期免疫系統(tǒng)發(fā)育未成熟，易受母源抗體影響 成年期最好，但也受上次免疫Ab的影響 老年期差，易產

33、生自身免疫病、腫瘤111（三）營養(yǎng) 嚴重缺蛋白、VitA、VitC、Fe、Zn、Sn等，免疫器官發(fā)育不良或退化 應激（冷、熱、噪音、驚嚇、遷群、長途運輸、饑渴） 腎上腺素 免疫功能 健康：長期患病、病毒感染、使用免疫抑制劑 免疫功能 112二抗原（一）性質 親緣遠：滅活苗 B細胞 體液免疫 親緣近：內源性Ag T細胞 細胞免疫（二）物理狀態(tài) 可溶性Ag （血清蛋白、類毒素） Ab產生陰性期長（2-3周） 顆粒性Ag 陰性期短（3-5天） 加佐劑Ag 陰性期短，一次注射可產生多次再次應答113三接種途徑 皮下肌肉注射淋巴結 靜脈注射脾、骨髓 加弗氏佐劑淋巴結、肉芽腫部位 氣霧呼吸道粘膜 飲水呼吸

34、道、腸道 滴眼、滴鼻哈德氏腺114 四. 劑量 適當范圍：好 大高劑量：可能發(fā)生免疫耐受 -接種間隔時間 疫苗：原有Ab還很高時不宜接種免疫監(jiān)測 制備高免血清：通常隔2周 每次接種Ab比前次增多115第五節(jié) 免疫應答調節(jié) 正常機體自動調節(jié)對抗原的免疫應答到最適合的程度，機制十分復雜，涉及免疫細胞、免疫分子和神經-體液等方面的調節(jié)作用。116第五章 抗感染免疫 病原微生物 侵襲力 毒素 （感染） 寄生蟲 畜禽機體 天然防御 抗感染 免疫應答 （細胞免疫體液免疫） 117第一節(jié) 天然防御機制 機械阻擋 粘膜纖毛運動 化學作用 體表（皮膚、粘膜） 脂肪酸 溶菌酶 粘多糖 胃酸 一、生理屏障 蛋白酶

35、生物學作用 正常菌群 淋巴結 內部 脾臟 過濾 血管壁 （ 血腦屏障 血胎屏障）118二、吞噬作用 嗜中性粒細胞、單核細胞、各種組織中的M 完全吞噬、不完全吞噬三、體液因素119四、細胞因子（一）單核因子 扁桃體發(fā)炎、嚴重外傷感染，為什么會發(fā)熱？ 細菌感染 單核吞噬細胞吞噬 產生各種單核因子 IL-1、IL-6、TNF- (1) 刺激下丘腦體溫中樞 體溫升高、發(fā)熱（抑制細菌繁殖、增強免疫應答） (2) 刺激肝細胞 急性期蛋白 C3途徑激活補體、溶解細菌120(3) TNF刺激小血管擴張、血管內皮細胞表達粘附分子，促使白細胞、血小板粘附、移出，血液中IgG、補體、淋巴細胞移出，IL-8招引中性粒

36、細胞移行至感染局部。 但全身感染，全身血管擴張、通透性增加、血漿喪失、休克、器官衰竭、死亡。(4) IL-12 Th Th1 NK細胞活化(二) 干擾素121第二節(jié) 抗各類病原體的感染免疫一、抗細菌的感染免疫（一）抗胞外菌的感染免疫1天然防御 吞噬細胞(莢膜、凝固酶抗吞噬) 肽聚糖C3激活補體(唾液酸抑制補體激活) LPS血管內皮細胞、M產生TNF-、IL-1、IL-6、IL-12等1222特異性免疫 胞外菌體液免疫（Ab）為主IgG調理吞噬作用 調理素（IgG）調理吞噬作用示意圖123 IgM、IgGC1激活補體 IgG中和外毒素 SIgA免疫排除 分泌型抗體(SIgA)免疫排除作用示意圖

37、抗毒素(IgG)中和毒素示意圖免疫預防：弱毒菌苗、滅活菌苗均有效 124（二）抗胞內菌感染免疫1天然防御 吞噬胞內菌的M 激活 IFN 殺滅 IL-12 活化NK細胞2特異性免疫：細胞免疫與體液免疫結合細胞免疫殺滅胞內細菌 淋巴因子（IFN-）活化M Tc的殺傷作用同時發(fā)生傳染性變態(tài)反應（見下圖）125 傳染性變態(tài)反應（肺結核）示意圖 126體液免疫消除胞外細菌 IgG調理吞噬 IgG、IgM，C1激活補體免疫預防：必須有弱毒菌苗+滅活苗127二抗病毒感染免疫（一）天然防御 病毒感染細胞產生IFN-、，干擾病毒復制 NK細胞自然殺傷作用 IFN-、促進NK細胞作用（二）特異性免疫：體液免疫與細

38、胞免疫聯(lián)合作用免疫預防不能只用滅活苗128-體液免疫產生特異抗體，作用細胞外的病毒 中和作用（IgG） 調理作用（IgG） 激活補體（IgM、IgG）-細胞免疫對細胞內的病毒作用 Tc特異殺傷感染病毒的靶細胞 穿孔素溶解靶細胞 表達粘附蛋白（FasL）使靶細胞凋亡 IFN-抑制病毒復制機體抗病毒的免疫應答也可造成型變態(tài)反應129 三抗真菌的感染免疫 真菌感染主要見于狗、貓皮膚，家禽的肺及畜禽飼料中黃曲霉中毒。 真菌在表皮或肺難于接觸淋巴細胞、黃曲霉毒素則是簡單的化合物，無免疫原性，所以，真菌和毒素引起機體的免疫很差，研究很少，沒疫苗可用。主要靠清潔、健康的皮膚及脂肪酸防御真菌感染皮膚。做好飼料

39、保存，防止引起的霉菌毒素中毒。130四抗寄生蟲的感染免疫（一）因世代寄生，寄生蟲形成了各種逃避宿主免疫的機制： 蟲體表面帶宿主成分，免疫原性弱 生活史復雜，不同時期蟲體表面抗原不同 有的蟲體表面抗原不斷脫落更換 有的形成包囊寄生腸腔，蟲體大，相應抗體不能作用 有的能抵抗相應抗體等作用 有的可產生破壞抗體的酶 故研究寄生蟲免疫預防的疫苗比較困難 131（二）特異性免疫 原蟲寄生于宿主細胞內以細胞免疫為主 蠕蟲以體液免疫（IgE）嗜酸性粒細胞脫出胞漿顆粒堿性蛋白殺滅幼蟲132第六章 變態(tài)反應（allergy） 對某種Ag已進行免疫應答的機體，再接觸同種Ag時發(fā)生的、引起生理功能紊亂或組織損傷的再次

40、免疫反應。 變應原（allergen）:引起機體發(fā)生變態(tài)反應的抗原。 完全變應原（異種血清、蛋白質、花粉、微生物、寄生蟲等） 不完全變應原（藥物、青霉素等） 133 類型：、型 過程：1.變應原初次進入機體（第一階段） 初次免疫應答 產生免疫物質（Ab或TDTH） 機體處于敏感狀態(tài)2.變應原再次進入機體（第二階段） 作用到Ab或TDTH 發(fā)生癥狀 （ 如下圖所示）134135第一節(jié) 型變態(tài)反應一發(fā)生機制（以青霉素過敏為例） 136二特點：1 由IgE引起2 與遺傳有關3 癥狀發(fā)生快（幾秒或幾分鐘），消失快4 只引起全身或局部功能紊亂三常見過敏病例 青霉素、免疫血清、花粉、食物等過敏四診斷 青霉

41、素皮試 檢出變應原飼料137五預防 1. 避免致敏機體再次接觸變應原 2. 脫敏注射免疫血清 分小量，隔2030min，多次注射六治療 1. 注射腎上腺素、麻黃堿、色甘酸二鈉等 穩(wěn)定肥大細胞、堿性粒細胞膜 2. 服用撲爾敏、苯海拉明等，抑制組織胺 3. 注射葡萄糖酸鈣等降低血管通透性等 138 第二節(jié) 型變態(tài)反應（細胞溶解型）一發(fā)生機制 139二特點1 IgM、IgG、補體、M、NK細胞等參與2 血細胞溶解三常見病例1 輸血反應 A型紅細胞 輸給 B型紅細胞人 A型紅細胞溶解 為什么？ 如何預防？1402新生幼畜溶血癥 馬 + 驢 第一胎 Aa+ Aa- 駒Aa+ 駒（第二胎）Aa- 幼駒(吃

42、母驢初乳后溶血死亡) 為什么？（型變態(tài)反應） 如何預防？（選擇：不吃初乳，輸血） 141142 3. 藥物引起的溶血驗血、停藥 4感染引起的溶血用藥或用疫苗消除病原（馬傳染貧血病毒、邊蟲、錐蟲、焦蟲、沙門氏菌等） 143第三節(jié) 型變態(tài)反應（免疫復合物型） 一發(fā)生機制第一步：可溶性抗原 機體 Ab(IgG、IgA、IgM)(病毒,免疫血清)第二步：Ag+Ab (Ag-Ab)n復合物Ab過量大復合物 易被吞噬細胞消除Ag過量小復合物 易從尿中排出144 Ag稍超過Ab 中等大小復合物 易通過血管壁、沉積基底膜+補體、吞噬細胞作用 血管炎（腎小球腎炎、關節(jié)炎、發(fā)熱、全身出血） 145146二特點1由

43、IgG、IgA、IgM與相應Ag（稍大量） 形成中等大小復合物引起 2. 有補體、中性粒細胞等參加3. 以血管炎和臨近組織損傷為特征147三常見疾病 1 局部型變態(tài)反應（Authus反應）多次皮下注射血清注射局部出現(xiàn)炎癥（水腫、出血、壞死）2血清病（全身性型變態(tài)反應）一次注射大量免疫血清后10天左右，全身反應（皮膚紅斑、水腫、尋麻疹、淋巴結腫大、關節(jié)炎、發(fā)熱、蛋白尿、中性白細胞減少）幾天后自行消退 注意與血清過敏癥區(qū)別3多種傳染病表現(xiàn)的，皮疹、關節(jié)炎、眼炎、皮炎、腎小球腎炎，均因型變態(tài)反應引起 治療：用抗菌藥等消滅病原（Ag） 148149第四節(jié) 型變態(tài)反應（遲發(fā)型）一發(fā)生機理第一步：初次Ag

44、 機體 細胞免疫應答 Th1(TDTH)第二步：再次Ag 機體 Th1 多種淋巴因子 大量吞噬細胞集中于Ag存在部位，引起組織細胞變性、壞死二特征 1再次進入Ag后出現(xiàn)癥狀慢（48-72h）（遲發(fā)型） 2出現(xiàn)局部炎癥（單核細胞浸潤、組織變性、壞死）150三常見疾病 1 傳染性變態(tài)反應（胞內菌引起） 結核分支桿菌感染肺結核（圖）-結核菌素試驗乳牛結核病檢疫 結核菌素(核桿菌裂解提取物)0.lml注入乳牛頸側皮內72h注射部位出現(xiàn)紅腫（陽性） 或0.lml滴入乳牛眼結膜囊內15-18h眼流膿性分泌物（陽性） 1512變態(tài)反應皮炎 人、動物皮膚第一次接觸變應原（油漆、染料、農藥、塑料等） Th1 再

45、次接觸同種變應原 Th 24-96h 皮炎(紅腫、奇癢、水皰)、抓傷、感染 治療: (1) 查出變應原，避免再次接觸 (2) 對癥治療: 消腫、止癢、抗局部感染1523同種異體組織移植排斥反應異體組織（MHC-） 受體細胞免疫應答 Th1 淋巴因子 炎癥反應 控制排斥: (1) 組織配型 (2) 用免疫抑制藥物抑制受體的免疫功能153第七章 免疫學實驗技術包括細胞免疫檢測技術 體液免疫檢測技術血清學技術第一節(jié)第一節(jié) 細胞免疫檢測技術細胞免疫檢測技術-檢測機體血液中的T細胞數(shù)量 E玫瑰花環(huán)試驗 T細胞酸性醋酸萘酯酶測定-檢測機體血液中T細胞轉化功能 淋巴細胞轉化試驗 巨噬細胞移動抑制試驗 T細胞

46、活化試驗154一E玫瑰花環(huán)試驗原理：人、豬、牛、羊等的T細胞膜上的CD2是綿羊紅細胞受體，馬、豬的T細胞膜上的CD2是豚鼠紅細胞的受體。28 T細胞的E玫瑰花環(huán)試驗155 二. 酸性醋酸萘酯酶測定 原理：酸性醋酸萘酯酶 醋酸萘酯 萘酚+醋酸離子 + 大偶氮副品紅 紅色反應物 + 甲基綠 紅黑色顆粒 用途：1.鑒別T、B細胞；2.血液中T細胞計數(shù) 156 三淋巴細胞轉化試驗（一）形態(tài)學試驗法原理：PHA+T細胞（有PHA受體） 轉化 大的淋巴母細胞 顯微鏡觀察計算轉化率 轉化率轉化率=(過渡型細胞過渡型細胞+母細胞母細胞)/200個淋巴細胞個淋巴細胞100%特點：簡便，準確性較差 15730T細

47、胞受PHA作用轉化后的形態(tài)示意圖158（二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）摻入法原理： 試驗管 對照管 PHA+T細胞+3H-TdR PHA+T細胞 轉化 轉化 淋巴母細胞 淋巴母細胞 （摻入3H-TdR） （無3H-TdR摻入） 液體閃爍儀測摻入 測CPM 3H-T的脈沖數(shù)CPM 計算轉化刺激指數(shù)SI=試驗管試驗管CPM/對照管對照管CPM特點：準確，需昂貴的閃爍儀159 四巨噬細胞移動抑制試驗原理： 試驗 對照 Ag+T細胞+M T細胞+ M 轉化 不轉化 M移動抑制因子 無M移動抑制因子 M的移動面積變小小 M的移動面積大大 計算移動指數(shù)MIMI=試驗試驗M的移動面積的移動面積/對照對照M

48、的移動面積的移動面積100% 160 五T細胞活化試驗（MTT檢測法）原理：PHA、ConA+T細胞（受體） 轉化 分裂、增殖 脫氫酶 甲氮唑鹽（MTT） 甲簪（formazan） 酶標儀（595nm）測OD值特點：敏感、準確 161第二節(jié)第二節(jié) 體液免疫檢測技術體液免疫檢測技術 血清學試驗(抗原抗體試驗)種類：1沉淀試驗 2凝集試驗 3補體參與的試驗 傳統(tǒng)試驗 4中和試驗 5標記抗體試驗新技術 162一體外抗原抗體反應的一般規(guī)律1高度特異性異嗜性抗原與免疫血清之間 交叉性腸道桿菌與免疫血清之間解決辦法：解決辦法： 將動物免疫血清中的多克隆抗體通過吸收試驗，制成單因子血清 應用雜交瘤技術制備單

49、克隆抗體 1632反應可逆性 PH 7.0 T 370C Ag+血清(Ab) Ag-Ab復合物 PH3 T600C 利用抗原抗體特異性結合反應的可逆性規(guī)律，建立親和層析技術，純化免疫純的抗原或抗體164親和層析技術提取免疫純抗體示意圖 1653反應二階段性第一階段反應形成Ag-Ab復合物第二階段反應出現(xiàn)可觀察的現(xiàn)象4抗原抗體反應結果受多因素影響（1）免疫血清質量要好 注意注意： -空腹采血 -防止細菌污染用具滅菌，無菌操作 -防止溶血用具滅菌后干燥，防止酒精與血接觸 -保存好血清加適量防腐劑，2-80C保存 166（2）電解質 稀釋抗原、血清常用0.85%NaCl溶液（生理 鹽水），但稀釋禽類

50、血清用6%8%鹽水更好。 作用：降低抗原抗體的電勢，完成二步反應（3）溫度：40C560C均可 溫度低反應慢，溫度高反應快。 最常用370C 30min167（4）PH值 稀釋抗原、血清的溶液PH6.08.0均可以，最常用PH7.07.2 通?？乖贵w蛋白的等電點都在PH6以下，若抗原或抗體溶液PH接近等電點，自身就會凝聚，出現(xiàn)非特異性的凝集或沉淀反應 為了穩(wěn)定PH，故在抗原抗體反應中最好用PH7.07.2的磷酸緩沖液（PBS）作抗原抗體稀釋液因為抗原抗體反應結果受多因素影響，為了證實試驗的準確性，故在試驗中一定要設立陽性、陰性和空白對照 168二各類抗原抗體反應簡介（一）沉淀試驗 0.85%

51、NaCl可溶性抗原 +免疫血清 出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象(血清蛋白、病毒) （抗體） 比例適合 沉淀原 沉淀素 比例不適合 不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象 容易過多 前帶現(xiàn)象（稀釋）169 170 比例不適合不能完成第二步反應 帶現(xiàn)象 1711環(huán)狀沉淀試驗原理：小試管內，下層沉 淀素與上層沉淀原 在界面應，形成白 色沉淀環(huán)。用途：檢測皮毛中的炭疽 桿菌抗原（Ascoli試驗）1722雙向瓊脂擴散（瓊擴）原理？操作步驟？結果判斷：特點：簡便、敏感性低、耗時用途：定性分析抗原成分1733對流免疫電泳原理？操作步驟？結果判斷： Ag Ab特點：反應時間短，敏感性提高用途：定性，已不多用（水貂阿留申病，以病原Ag檢測病貂血清中的

52、抗體）174（二）凝集試驗基本原理： 生理鹽水顆粒性抗原 + 相應抗血清 抗原顆粒凝集(細菌、紅細胞) 比例適合 凝集原 凝集素 過多 后帶現(xiàn)象 （稀釋血清）1751玻片凝集試驗 2試管凝集試驗原理？操作步驟？結果分析？特點：簡單、快速 準確、耗時用途：定性，細菌鑒 診斷布氏桿菌 定、血型鑒定 病，測定抗體 的凝集價(定量) 1763間接凝集試驗基本原理： 可溶性抗原+惰性載體（聚苯乙烯乳膠微粒、炭粒、綿羊紅細胞等） 抗原致敏載體 電解質 抗原致敏載體+相應免疫血清(抗體) 被動載體凝集(間接乳膠凝集、間接炭素凝集、間接紅細胞凝集等 )177 特點：敏感(在微量反應板中進行試驗)、快速 用途：

53、用已知抗原致敏的載體可檢測血清中的特異抗體及其效價 若用已知免疫血清（Ab）致敏的紅細胞，則可檢測病毒等可溶性抗原稱為反向間接血凝試驗。 178 179三補體參與的試驗補體結合試驗1參與反應：抗原抗體反應系統(tǒng)、補體（豚鼠血清）、指示系統(tǒng)（綿羊紅細胞、溶血素）2反應原理：如下圖所示3特點：敏感性特異性高 正式試驗前要進行下列測定，操作較繁（溶 血素效價、補體效價、抗原效價）4用途：用于牛肺疫、副結核、布氏桿菌病、 錐蟲病、馬傳貧、鼻疽等的檢疫180181（四）中和試驗（病毒、毒素中和試驗）原理：病毒與抗血清中抗體特異結合后失去感 染易感動物、雞或鴨胚、細胞活性例例1 -NDV 911d雞胚 24

54、48h雞胚死亡 -NDV+抗血清 911d雞胚 雞胚不死亡182例例2 口蹄疫病毒(FMDV) 47d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 47d乳鼠 乳鼠不死亡例例3 FMDV 仔豬腎傳代細胞(IB-RS-2)單層細胞 細胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解FMDV+抗血清 IB-RS-2單層細胞 細胞無病變CPU183用途：1.用已知血清堅定病毒診斷病毒病2.用已知病毒檢測血清抗體診斷病毒感染，測定病毒免疫血清效價（中和價）184（五）標記抗體技術（標記免疫測定技術）包括：熒光標記抗體技術 酶標記抗體技術 同位素標記技術1.熒光標記抗體技術（免疫熒光技術）原理：熒光素（F）+

55、Ab AbF(FITC) AbF + Ag Ag- AbF 紫外光 Ag- AbF用途：用AbF檢測抗原 （定性、定位）特點：敏感，需熒光顯微鏡185方法： 直接法 間接法 F F Ag Ag比較： 檢測一種抗原 標記一種動物的 就須標記特異 球蛋白AbF，就能 的一種AbF 檢測多種抗原 較特異 較敏感 1862.酶標記抗體技術（酶免疫測定技術）（1） 間接法 （2）雙抗體夾心法原理：用途：已知抗原、酶標 已知血清抗體、酶 抗體測血清抗體 標抗體測抗原1873. 放射免疫測定法原理：Ag+AbR Ag-AbR 或 AgR+Ab AgR-Ab 用液相閃爍儀測R放出的射線量特點：敏感性極高，需高

56、級閃爍儀 同位素對人有放射性危害用途：用于藥物、激素、酶、腫瘤抗原等測定188第八章 免疫學在獸醫(yī)學中的應用主要用于動物傳染病、寄生蟲病的免疫學預防、診斷和治療，但必須有生物制品第一節(jié) 獸醫(yī)生物制品概念：利用微生物、寄生蟲或其代謝產物制成的用于預防、診斷或治療傳染病或寄生蟲病的制劑。種類：疫苗、診斷液、免疫血清189 一、疫苗動物機體獲得對某種傳染病的免疫力可通過4種途徑： 天然主動獲得自然感染病愈（免疫時間長） 人工主動獲得接種疫苗（較長） 天然被動獲得幼畜從初乳獲得母源抗體 幼禽從卵黃獲得母源抗體(短) 人工被動獲得人工注射免疫血清或高免蛋 黃液（短）疫苗概念：給動物進行人工主動免疫的生物

57、制品190疫苗種類：-傳統(tǒng)疫苗弱毒疫苗、滅活疫苗、類毒素、多價苗、多聯(lián)苗等-新型疫苗亞單位疫苗、基因工程疫苗、抗獨特型抗體、合成肽苗等（一）傳統(tǒng)疫苗1.弱毒疫苗研制：(1)從自然界中篩選弱毒株新城疫系弱毒苗（2）選擇免疫原性好的強毒株，經物理、化學、生物學方法使其毒力減弱,成為無致病性(安全)具有良好免疫原性(有效)的弱毒株，大量繁殖191特點：（1）注射后可在動物體內短期繁殖（2）可誘導體液免疫、細胞免疫（3）用量少，成本低，接種方便（4）研究過程較長，保存條件要求凍干冷藏， 毒力有返強的潛在危險1922.死苗（滅活苗、滅能苗） 研制：選擇毒力強、免疫原性好的毒株大量培養(yǎng)+1%左右甲醛滅活，

58、保留免疫原性+佐劑 特點：（1）研制時間較短，安全，可常溫保存（2）免疫原性較差，只產生體液免疫，效果比弱毒疫苗差（3）用量較大，成本較高，注射沒那么方便1933.類毒素外毒素的滅活苗研制：液體大量培養(yǎng)產毒細菌 去除菌體，提取外毒素+甲醛，滅活成類毒素+佐劑應用：(1)直接作疫苗注射 (2)反復注射免疫馬匹，制備抗毒素血清4.多價苗同種病原微生物多種血清型毒株制成的疫苗(例如大腸桿菌多價苗、禽流感多價苗) 194多聯(lián)苗不同種病原微生物聯(lián)合制成的疫苗例:新支二聯(lián)苗(新城疫病毒+傳染性支氣管炎毒) 豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)苗 犬瘟熱/腺病毒/傳染性肝炎/副流感/細小病毒/。 鉤端螺旋體六聯(lián)苗特點:

59、一針防多種病，節(jié)約人力、物力注意:疫苗不能任意混合注射，可能互相抑制干擾195（二）新型疫苗1.亞單位疫苗提取細菌或病毒結構中的有效抗原+佐劑例如：豬大腸桿菌菌毛K88苗 禽巴氏桿菌微莢膜苗特點：安全，成本高1962.基因工程疫苗（1）基因工程亞單位苗制備的細菌或病毒中編碼保護性蛋白抗原的基因（目的基因）與表達質粒（載體）重組轉化宿主細菌或細胞大量培養(yǎng)轉化菌或細胞，表達保護性蛋白抗原純化表達的抗原+佐劑197（2）基因工程活載體苗制備目的基因與痘病毒弱毒苗的基因組重組(可聯(lián)接多個外源基因)給動物接種重組活痘苗重組活痘苗在動物體內繁殖，表達外源基因抗原，產生免疫198（3）基因缺失苗病毒基因組中有編碼抗原基因和編碼毒力的基因應用基因切除、插入、缺失等方法，使毒力基因突變去除接種動物，只表達抗原，產生免疫（無毒、安全、有效）199（4）基因疫苗獲取表達保護性抗原的基因與表達質粒重組重組表達質粒直接接種動物（肌肉注射、皮下注射、基因槍轟擊接種）重組質粒轉入皮膚、肌肉、細胞，表達抗原，產生免疫200（5）轉基因植物口服疫苗編碼病原微生物保護性抗原的基因與表達質粒重組重組質粒轉化進植物桿菌細胞轉化的植物桿菌感染食用植物目的基因在植物中表達蛋白抗原動物吃植物，吸收蛋白抗原產生免疫2013.抗獨特型抗體疫苗制備抗病原微生物的