水通道蛋白5在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義

1、水通道蛋白5在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義李成文1張國(guó)勝1（通訊作者）田軍2（1濰坊醫(yī)學(xué)院 山東濰坊261042； 2濰坊市人民醫(yī)院耳鼻喉科 山東濰坊 261041）【摘要】目的 探討水通道蛋白5（aquaporin-5,aqp-5）在鼻息肉組織中的表達(dá)， 分析其在該病變中的作用機(jī)制。方法 選擇正常下鼻甲組織24例和鼻息肉組織 32例，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)aqp-5在下鼻甲和鼻息肉組織中的表達(dá)及分 布情況。結(jié)果免疫組化染色顯示aqp-5在鼻息肉和正常下鼻甲組織中均有不同 程度的表達(dá)；固有層腺體中aqp-5的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率，下鼻甲組顯著高于鼻息肉 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（pv0.05）；血管及血管

2、內(nèi)皮中aqp5的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率， 下鼻甲組顯著低于鼻息肉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（pv0.05）。結(jié)論aqp-5在鼻 息肉組織中的異常表達(dá)與鼻息肉的形成密切相關(guān)。【關(guān)鍵詞】鼻息肉 水通道蛋白 免疫組織化學(xué)【中圖分類號(hào)】r765【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】2095-1752 （2012） 32-0024-02鼻息肉是耳鼻喉科的常見(jiàn)病和多發(fā)病，成年人的發(fā)病率較高，其發(fā)病有 著極其復(fù)雜的因素1。臨床上最常見(jiàn)的病理類型是水腫型，約占總數(shù)的85% 90%,組織學(xué)表現(xiàn)為炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管擴(kuò)張、間質(zhì)水腫及腺體增殖亢進(jìn)，因此 對(duì)鼻息肉水腫機(jī)制的研究具有重要的臨床意義。水通道蛋白（aquaporins, aqps）

3、是近年新發(fā)現(xiàn)的一種膜蛋白，是一族 廣泛存在于原核和真核牛物細(xì)胞膜上選擇性高效轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的特異孔道，其在體 內(nèi)液體轉(zhuǎn)運(yùn)和腺體分泌方面具有重要作用。己有報(bào)道指出aqp1、aqp2、aqp3 及aqp8與鼻息肉組織水腫的發(fā)牛密切相關(guān)。aqp5是否在鼻息肉的形成中起一 定作用，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道較少。木研究利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)aqp5在鼻息 肉中的表達(dá)和分布，以探討aqp5與鼻息肉形成的關(guān)系。1材料與方法1.1臨床資料鼻息肉組：32例，其中男20例，女12例，年齡3748歲，標(biāo)本取自 2011年4月2012年4月在昌樂(lè)縣人民醫(yī)院耳鼻喉科住院行鼻內(nèi)鏡下鼻息肉切 除患者，術(shù)前2周未行鼻用糖皮質(zhì)激素、抗組胺

4、類藥物治療，術(shù)后病理證實(shí)為鼻 息肉組織。下鼻甲組：24例，其中男16例，女8例，年齡4056歲，標(biāo)本來(lái)自 同一時(shí)期慢性肥厚性鼻炎患者行下鼻甲部分切除術(shù)的下鼻甲黏膜。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1免疫組化染色材料 美國(guó)santa cruz公司生產(chǎn)的羊抗人aqp-5,鏈 霉素抗生物素蛋白過(guò)氧化物酶(streptavidinperoxidase, sp)免疫組化試劑盒購(gòu) 自北京中山生物技術(shù)公司，抗體均以0.1mol/l的磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffor silutlon,pbs,ph 7.4)稀釋，濃度為 1:100。1.2.2免疫組化染色 所有標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定48h后，石蠟包埋， 連

5、續(xù)切片，制成厚約5μm切片，脫蠟、梯度酒精脫水，3%甲醇雙氧水漂洗 除去內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，微波修復(fù)抗原，37°c滴加一抗，4°c過(guò)俊，加入sp, 37°c反應(yīng)20minz pbs沖洗，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene,dab)顯色，蘇木 精復(fù)染，脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。用已知人腎曲小管 陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，用pbs緩沖液代替一抗同步染色作為陰性對(duì)照。1.3陽(yáng)性結(jié)果判定及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)為棕黃色，每一標(biāo)本做連續(xù)切片，選其中23張結(jié)構(gòu)背 景清晰，陽(yáng)性表達(dá)好的切片作為統(tǒng)計(jì)分析對(duì)象，低倍鏡下觀察每張切片的陽(yáng)性細(xì)

6、 胞表達(dá)區(qū)域，從中隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野(&times;200),手工計(jì)數(shù)鼻息肉與 下鼻甲組織的各層結(jié)構(gòu)的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)。用spss17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn), 以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1aqp-5在鼻息肉與下鼻甲黏膜組織中的分布aqp-5在陰性對(duì)照均不著色，在陽(yáng)性對(duì)照片中見(jiàn)人腎曲小管胞漿呈明顯 棕黃色。下鼻甲組織的上皮細(xì)胞層、黏膜下腺體及血管中均有aqp5的表達(dá)，但 主要表達(dá)于黏膜下腺體，血管及其內(nèi)皮表達(dá)較少。鼻息肉組織的上皮細(xì)胞及固有 層均有aqp-5表達(dá)，但主要表達(dá)于固有層毛細(xì)血管及其內(nèi)皮細(xì)胞。2.2aqp-5在鼻息肉與下鼻甲黏膜組織中的表達(dá)aqp-

7、5在鼻息肉和下鼻甲組織中均有不同程度的表達(dá)，aqp-5陽(yáng)性細(xì)胞 表達(dá)率在固有腺體中鼻息肉組織較下鼻甲組織低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)； 而在血管及血管內(nèi)皮中鼻息肉組織較下鼻甲組織高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p< 0.05)；在上皮細(xì)胞中鼻息肉組織較下鼻甲組織低但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)； 見(jiàn)表1表1鼻息肉和下鼻甲組織中aqp-5的陽(yáng)性表達(dá)(x-&plusmn;s)注：采用t檢驗(yàn)，與下鼻甲組織比較，*p<0053討論鼻息肉是一種以極度水腫的鼻黏膜在中鼻道形成單發(fā)或多發(fā)息肉為特 征的良性病變組織，其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明，但作為種獨(dú)特的炎性水 腫組織，

8、其水腫形成的機(jī)制可能存在多種因素2。有學(xué)者認(rèn)為鼻息肉組織水腫3 是由于鼻黏膜血管通透性增加所致。水通道蛋白(aquaporins, aqps)是一類與水的通透有關(guān)的蛋白,是快 速跨膜運(yùn)輸水的專用通道，目前在哺乳動(dòng)物已發(fā)現(xiàn)至少13種水通道蛋白，即 aqp0aqp124o介導(dǎo)自由水分子的跨生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)是其基本功能，由于其活化 能較低，轉(zhuǎn)運(yùn)速度快，不受質(zhì)膜分子組成、溫度等生物因素的影響，因此只要流 體靜水壓或滲透壓梯度不同，就可以有水分子順滲透壓梯度通過(guò)水通道蛋白5。 實(shí)驗(yàn)證實(shí)aqp5蛋白有265個(gè)氨基酸組成，分子量為27kd,具有高度選擇性水通 透性，跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)是其最基本的生理功能。從目前的研究來(lái)看

9、，aqp5主要表達(dá) 于哺乳動(dòng)物唾液腺、淚腺和呼吸道粘膜下腺等組織，被認(rèn)為與機(jī)體各種腺體的分 泌功能密切相關(guān)。近年來(lái)隨著對(duì)aqps研究的不斷深入，aqps與鼻息肉組織水 腫發(fā)病機(jī)制的關(guān)系也越來(lái)越得到人們的關(guān)注。本研究發(fā)現(xiàn)，aqp-5在鼻息肉和正常下鼻甲組織中均有不同程度的表達(dá), 但分布不同。aqp-5在下鼻甲組織的上皮細(xì)胞、黏膜下腺體和血管中均有表達(dá)， 但主要表達(dá)于腺體，血管表達(dá)較少。表明aqp-5在維持下鼻甲黏膜下腺體正常分 泌功能方面具有重要的意義。aqp-5在鼻息肉組織中的表達(dá)及分布提示其病理改 變與水通透性有關(guān)：©aqp-5在毛細(xì)血管及內(nèi)皮細(xì)胞中的高表達(dá)，使血管通透性 增加，血

10、漿滲出，導(dǎo)致組織間液增多，促進(jìn)鼻息肉的形成。腺體上皮細(xì)胞的腔 膜是跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)的限速屏障，而aqp-5在腺體中的低表達(dá)，使液體轉(zhuǎn)運(yùn)失去了限 速屏障的作用，導(dǎo)致運(yùn)輸通道發(fā)生障礙，不利于液體在腺體上皮細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)， 從而分泌和滲出到組織間隙中的液體大量積聚，造成局部組織水腫，隨著水腫的 加劇，局部組織張力增高，易造成上皮破裂和損傷。按照tos的鼻息肉形成的“上 皮破裂”學(xué)說(shuō)，也有助于鼻息肉的形成。aqp-5在鼻息肉的發(fā)生過(guò)程中可能并非孤立地發(fā)揮作用，其在鼻息肉形 成過(guò)程中的具體調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)-步明確。本實(shí)驗(yàn)從病理學(xué)的角度出發(fā)，證實(shí)了 aqp-5在鼻息肉組織中的表達(dá)，從其在鼻息肉和下鼻甲組織中的不同的

11、表達(dá)量并 結(jié)合下鼻甲的功能可以推測(cè)出aqp-5的正常的表達(dá)對(duì)保持機(jī)體局部組織適當(dāng)?shù)?水分及維持正常的生理滲透壓具有重要的作用。而通過(guò)研制水通道蛋白抑制因子 來(lái)抑制其過(guò)多的表達(dá)或通過(guò)控制水通道蛋白的表達(dá)量來(lái)平衡液體的分泌和吸收， 可能為鼻息肉的治療及防止術(shù)后復(fù)發(fā)提供一種新的治療手段。參考文獻(xiàn)楊禧禧內(nèi)窺鏡鼻竇外科鼻鼻竇鼻息肉病與變態(tài)反應(yīng)j 國(guó)外醫(yī)學(xué)耳鼻喉科 學(xué)分冊(cè)，1995,19 (2)： 75-792meltzer eo. the phama cological basis for the treatment of perennial allergic rhinitis and non2 all

12、ergic rhinitis with topical corticosteroidsj .aiiergy/1997/52(suppl36):33-40.張欣欣，郭永清，張文杰，等na +通道與鼻息肉形成關(guān)系的初步研究中華耳鼻咽喉科雜志，2000, 35 (5)： 359-3624 yung-chang chenmelissa a,cadnapaphomchaietal.ciinical update on renal aquaporins j .biology of the cell,2005,97:357371.5 verkman as, vanhoek an, ma xetal water transport across mammalian cell mem