納米粒對(duì)鼠增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變玻璃體內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

1、納米粒對(duì)鼠增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變玻璃體內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究曹永梅1李山丹2 （1內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院內(nèi)蒙古呼和浩特010065； 2通遼市 醫(yī)院內(nèi)蒙古通遼028000）【屮圖分類號(hào)】r965【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】1672-5085 （2013 ） 06-0107-02 【摘要】目的 探討納米粒療法對(duì)鼠增殖期糖尿病病變玻璃體內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng) 因子vegf表達(dá)影響并探討機(jī)制。方法 應(yīng)用對(duì)抗體央心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)elisa 法，對(duì)經(jīng)過納米粒法治療增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變，檢測(cè)玻璃體標(biāo)本vegf含量 并與空白對(duì)照組比較采用t檢驗(yàn)比較方差分析治療前后差異，p<0.05差異有

2、統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 治療組玻璃體vegf含量平均152.3011±17.8671ng/l, 對(duì)照組玻璃體vegf含量平均609.7452±87.4238ng/lo結(jié)論 納米粒療法 對(duì)鼠增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變玻璃體vegf有顯著抑制作用，通過下調(diào) hif-iα表達(dá)，降低vegf的分泌，抑制新生血管生長(zhǎng)。【關(guān)鍵詞】血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 糖尿病視網(wǎng)膜病變 玻璃體1材料方法1.1材料sprague-dauley大鼠20支，體重100g左右，制成糖尿病鼠 模型。每只大鼠腹腔注射60mg/kg鏈）1尿菌素，23天后出現(xiàn)糖尿病癥狀，1月后 出現(xiàn)增殖

3、型糖尿病視網(wǎng)膜病變表現(xiàn)。大鼠分成兩組，10支處死取玻璃體標(biāo)本作 為對(duì)照組，另外10支玻璃體腔注射納米粒液4ul, 2周后處死取玻璃體標(biāo)本作為 實(shí)驗(yàn)組。1.2 vegf檢測(cè) 采用鼠vegf免疫試劑盒，spectra酶標(biāo)儀。按100ul/ 孔加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品及樣本，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37°c孵箱孵育90分 鐘，洗板5次，加入100ul/孔生物素化抗體工作液，同樣操作孵育60分鐘，洗 板5次。加入底物顯色劑looul/jl, 37°c避光孵育20分鐘。加入終止液100ul/ 孔，混勻，用酶標(biāo)儀測(cè)出樣品吸光度值，從而測(cè)出vegf含量。1.3半定量rt-pcr法檢測(cè)玻璃體血管

4、hif-lαmpna與vegf mrna。 采用大鼠hiflα、vegf、gapdh的dna序列，應(yīng)用primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引 物，per擴(kuò)增。將per產(chǎn)物2ul置2%瓊脂凝膠電泳，對(duì)電泳帶用凝膠成像儀進(jìn)行 拍攝,軟件分析，測(cè)出積分吸光度(a)值，測(cè)出hif-iαmar, vegfmrna 的相對(duì)表達(dá)量。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法利用spss 12.0軟件系統(tǒng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(x±s)進(jìn)行分析，方差分 析q檢驗(yàn)，p<0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果治療組玻璃體vegf含量平均152.3011&

5、plusmn;17.8671ng/l,對(duì)照組玻 璃體vegf含量平均609.7452±87.4238ng/l；治療組玻璃體新生血管組織 hif-iα 0.08±0.012,對(duì)照組玻璃體新生血管組織 hif-iα0.225±0.017o p<0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3討論vegf作為一種較強(qiáng)的促新生血管生成因子,在正常眼組織中有較低水平 的分泌，參與生理過程血管形成，維持血管內(nèi)皮活性vegf是在糖尿病視網(wǎng)膜病 變?nèi)毖獏迹a(chǎn)生了-種可溶性的血管生長(zhǎng)因子，特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞

6、 vegf受體，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂,增殖期vegf含量明顯增加2, 3。納米粒療法能降低vegf分泌含量，其具體作用抑制為下調(diào)新生血管形 成過程中一種重要的轉(zhuǎn)錄因子hif-iα的表達(dá)，從而達(dá)到抑制新生血管的作用 4, 5, 6。采用rtpcr及免疫組織化學(xué)方法，發(fā)現(xiàn)納米粒療法能抑制hif-iαmrna與hif-iα的表遲降低vegf mrna與vegf的表達(dá)，并xl這兩種表達(dá)高 度相關(guān)，提示可能通過抑制hif-iα的表達(dá)及活性，降低vegf mrna與vegf的 表達(dá),進(jìn)而抑制新生血管的形成。納米作為一種新型

7、的眼用藥物載體，沒有免疫原性,生物相容性好，治療 長(zhǎng)效。探討納米粒療法的作用機(jī)制和作用途徑為臨床治療糖尿病視網(wǎng)膜新生血管 增殖提供重要的參考和依據(jù)，但納米工藝還有待于進(jìn)-步完善。參考文獻(xiàn)1 smiddy we , flynmhw viectomy in the management of diabeticretinpathy .survopathalmol 1999, 43:491-507.2 董白霞，高福祿，龐曉靜.糖尿病小鼠內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)與血糖病程的關(guān)系中 華眼底病雜志，2000,16:182-183.3 周浩川，張惠蓉增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變患者玻璃體中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子含 量的研究中華眼

8、科雜志，1997,33:247-250.4 buchlerp peberha, eta i. hypoxia inducible factor-1 regulates vaacular en dothelial growth factor expression in human pancreatic canler.pancreas ,2003,26:56-64.5 semenza gl ,regulation of mammalian 02 homeostasis by hypoxia inducible factor.annu rew cell dev biol, 1999,15:551-578.6 gao n ,etal arsenite induces hif-iαlpha an