薄層色譜法注意事項(xiàng)

1、薄層色譜法檢驗(yàn)注意事項(xiàng)薄層色譜法檢驗(yàn)注意事項(xiàng)2定義定義 薄層色譜法系指以適宜的固定相涂布于玻璃薄層色譜法系指以適宜的固定相涂布于玻璃板、鋁箔片或聚酯薄膜上使成一均勻的薄層，板、鋁箔片或聚酯薄膜上使成一均勻的薄層，將供試品與相應(yīng)的對(duì)照物點(diǎn)于薄層板的一端，將供試品與相應(yīng)的對(duì)照物點(diǎn)于薄層板的一端，以適宜的溶劑置展開容器內(nèi)展開，使供試品以適宜的溶劑置展開容器內(nèi)展開，使供試品所含的相應(yīng)成分分離所含的相應(yīng)成分分離,采用適宜的顯色劑或顯采用適宜的顯色劑或顯色方法顯色，將供試品色譜與對(duì)照物色譜相色方法顯色，將供試品色譜與對(duì)照物色譜相比較，或采用薄層掃描儀掃描，以進(jìn)行鑒別、比較，或采用薄層掃描儀掃描，以進(jìn)行鑒別

2、、檢查或含量測定的方法。檢查或含量測定的方法。3薄層板的制備薄層板的制備n將將1份固定相和份固定相和3份水份水(或加有黏合劑如或加有黏合劑如0.20.5%羧甲基纖維素鈉水溶液羧甲基纖維素鈉水溶液)在研缽中向同一方在研缽中向同一方向研磨混合向研磨混合,去除表面的氣泡后去除表面的氣泡后,倒入準(zhǔn)備好的玻倒入準(zhǔn)備好的玻璃板上璃板上,用潔凈玻棒涂鋪成一個(gè)均勻的薄層用潔凈玻棒涂鋪成一個(gè)均勻的薄層,再稍再稍加振動(dòng)加振動(dòng),使整板薄層均勻。使整板薄層均勻。n0.20.5%羧甲基纖維素鈉溶液羧甲基纖維素鈉溶液:稱取稱取25g羧甲基纖維羧甲基纖維素鈉素鈉,加加1升水煮沸溶解升水煮沸溶解,過濾過濾, 靜置，用時(shí)取上清

3、液。靜置，用時(shí)取上清液。n110活化活化30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。4點(diǎn)樣點(diǎn)樣n圓點(diǎn)點(diǎn)樣直徑為圓點(diǎn)點(diǎn)樣直徑為23mm，（高效薄層，（高效薄層板一般不大于板一般不大于2mm），點(diǎn)間距離可視斑），點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜，一般為點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜，一般為1.02.0cm .點(diǎn)樣基線距底邊點(diǎn)樣基線距底邊10 15mm.5點(diǎn)樣點(diǎn)樣n盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的色譜圖色譜圖分離度分離度好，顏色分明

4、。樣品溶液的好，顏色分明。樣品溶液的含水量含水量越越小越好，樣品溶液小越好，樣品溶液含水量含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無無水乙醇水乙醇、甲醇甲醇、氯仿、氯仿、乙酸乙酯乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或的熱風(fēng)吹干或放入放入干燥器干燥器里晾干。里晾干。 薄層色譜用于定量時(shí)，點(diǎn)樣是最主要的誤差來源。薄層色譜用于定量時(shí)，點(diǎn)樣是最主要的誤差來源。 供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點(diǎn)樣的同時(shí)，樣品在原點(diǎn)就供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點(diǎn)樣的同時(shí)，樣品在原點(diǎn)就可是成環(huán)形展開，原點(diǎn)直徑的擴(kuò)散促進(jìn)了這種

5、展開，可是成環(huán)形展開，原點(diǎn)直徑的擴(kuò)散促進(jìn)了這種展開，Kaiser稱之為稱之為“上樣上樣環(huán)形色譜效應(yīng)環(huán)形色譜效應(yīng)”。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心環(huán)。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心環(huán)。這種效應(yīng)對(duì)隨后的先行展開造成很不利的影響。這種效應(yīng)對(duì)隨后的先行展開造成很不利的影響。 供試液的溶劑在原點(diǎn)的供試液的溶劑在原點(diǎn)的殘留，也會(huì)改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差殘留，也會(huì)改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時(shí)更明顯。再者，較大時(shí)更明顯。再者，親水性親水性溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分（特別在溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)

6、境）對(duì)色譜的影響也不可低估。因此點(diǎn)樣時(shí)的同步干燥或繼后干高濕度環(huán)境）對(duì)色譜的影響也不可低估。因此點(diǎn)樣時(shí)的同步干燥或繼后干燥以除去原點(diǎn)殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹燥以除去原點(diǎn)殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹風(fēng)風(fēng)筒筒加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強(qiáng)烈的吸附在加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強(qiáng)烈的吸附在吸附劑吸附劑的顆粒上，而的顆粒上，而促進(jìn)了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤促進(jìn)了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動(dòng)相在展開時(shí)對(duì)這部分樣品的溶解速度比移動(dòng)其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動(dòng)相在展

7、開時(shí)對(duì)這部分樣品的溶解速度比移動(dòng)速度慢得多而形成拖尾（斑點(diǎn)拖尾的原因之一）。速度慢得多而形成拖尾（斑點(diǎn)拖尾的原因之一）。6展開展開n浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm(切切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中)，上行展距一，上行展距一般為般為815cm，高效板，高效板上行展距為上行展距為58cm.n若展距過長，各個(gè)物質(zhì)的分離更大，能夠若展距過長，各個(gè)物質(zhì)的分離更大，能夠提高分離效果。但是斑點(diǎn)的擴(kuò)散也更大，提高分離效果。但是斑點(diǎn)的擴(kuò)散也更大，影響了斑點(diǎn)的集中。影響了斑點(diǎn)的集中。7展開劑的配置展開劑的配置n選擇合適的量器把各組成溶劑移入選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液分液

8、漏斗漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開劑。絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；煺归_缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會(huì)造成合不均勻和沒有分液的展開劑，會(huì)造成層析層析的完全失敗。各組成溶劑的比例的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)準(zhǔn)確度確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求， 8展開系統(tǒng)的飽和展開系統(tǒng)的飽和n一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另

9、一槽可加入另一槽可加入氨水氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開時(shí)防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開時(shí)難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對(duì)薄難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。量輕、快。9溫濕度的控制溫濕度的控制n溫濕度的控制 溫濕度對(duì)

10、薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。10薄層掃描法薄層掃描法定義定義n系指用一定波長的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查或含量測定的方法。 11薄層掃描法薄層掃描法供試品制備和點(diǎn)樣供試品制備和點(diǎn)樣n供試品溶液至少制備供試品溶液至少制備2份，份，,供試品供試品溶液和對(duì)照品溶液應(yīng)交叉點(diǎn)于同一溶液和對(duì)照品溶液應(yīng)交叉點(diǎn)于同一薄層色譜板上薄層色譜板上,供試品點(diǎn)樣不得少供試品點(diǎn)樣不得少于于2個(gè)個(gè),對(duì)照品溶液每一濃度不得少對(duì)照品溶液每一濃度不得少于于2個(gè)。個(gè)。12薄