青霉素發(fā)酵技術(shù)1.4 大米孢子制備(六步教學(xué)法)

1、教 案 首 頁授課順序 學(xué)時 日期 年 月 日 班級課題1.4大米孢子制備學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)大米培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)及計數(shù)操作技術(shù)，掌握大米孢子制備的目的、原理、步驟以及應(yīng)用領(lǐng)域，掌握試管斜面孢子到大米培養(yǎng)基（三角瓶或茄子瓶）的接種方法，掌握大米孢子的培養(yǎng)條件，進(jìn)一步鞏固無菌操作技術(shù)。主要內(nèi)容（1）大米培養(yǎng)基制備（2）大米孢子的接種方法（3）大米孢子的培養(yǎng)（4）米孢子保藏（5）米孢子計數(shù)（6）無菌操作技術(shù)教學(xué)過程1、資訊 2、計劃 3、決策 4、實施 5、檢查 6、評價教具或工具 工作任務(wù)單、多媒體設(shè)備、滅菌鍋、顯微鏡、超凈工作臺等載體產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)物考核與評價采用工作任務(wù)單上的考核表進(jìn)行評價，將評

2、價結(jié)果記入期末總成績，并填寫教師評語部分。輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院 教 案 NO 1 課程 青霉素發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù) 201 /201 學(xué)年第 2 學(xué)期 教師 授課日期班 級工作過程：青霉素發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)教學(xué)任務(wù)1.3：產(chǎn)黃青霉菌株的平皿培養(yǎng)及菌種檢測知識目標(biāo)：（1）了解青霉素的分類及分子結(jié)構(gòu)、作用機(jī)理應(yīng)用等。（2）掌握青霉菌在固體培養(yǎng)基形態(tài)特征（3）熟悉青霉素產(chǎn)生菌生長發(fā)育過程（4）熟悉產(chǎn)黃青霉菌的特點（5）掌握大米孢子的制備方法。（6）掌握青霉菌菌種的保藏（7）掌握青霉菌的直接制片觀察法（8）熟悉母瓶斜面固體培養(yǎng)基配方（9）掌握種子質(zhì)量要求技能目標(biāo)：（1）能配制察氏斜面培養(yǎng)基（2）會使用高壓蒸汽滅菌鍋（3

3、）學(xué)會無菌操作（4）會斜面劃線接種產(chǎn)黃青霉菌株（5）學(xué)會使用恒溫培養(yǎng)箱（6）會制備大米培養(yǎng)基（8）會配制乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液（9）會配制50%乙醇（10）會青霉菌直接制片（11）能正確使用顯微鏡（12）會制備菌懸液（供凍干用）（13）學(xué)會操作小型凍干機(jī)（14）會使用高頻火花真空測定器測定凍干菌種真空度重點難點：（1） 青霉菌插片制片觀察（2）青霉菌形態(tài)的準(zhǔn)確鑒定（3）產(chǎn)黃青霉菌株保存 教學(xué)方法： “課堂，實訓(xùn)一體化”的現(xiàn)場教學(xué)方法；項目導(dǎo)入教學(xué)法?？己朔椒ǎ航M內(nèi)自我評分和組間互評、實施過程評分、實驗結(jié)果評分。學(xué)時安排：設(shè)計方案2學(xué)時、組織實施2學(xué)時教學(xué)札記： 編寫日期：輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院 教 案

4、 附 頁教學(xué)組織一、分組學(xué)生全部進(jìn)入發(fā)酵室后，將其分為7組，各組組長兼任安全員、副組長兼任設(shè)備材料員，達(dá)到學(xué)生的自管自治和相互監(jiān)督，學(xué)生與教師的高度配合。二、工作過程導(dǎo)入（資訊）教師通過ppt向?qū)W生展示青霉菌大米培養(yǎng)物，提出問題：大家想，由試管到茄子瓶培養(yǎng)物有什么變化？學(xué)生回答引導(dǎo)學(xué)生：容器大小？產(chǎn)黃青霉生長數(shù)量？孢子數(shù)量？最后得出結(jié)論。繼續(xù)引導(dǎo)學(xué)生思考：我們在實驗室自己如何能獲得青霉菌大米培養(yǎng)物？為何用茄子瓶？如果沒有茄子瓶，可拿什么容器代替（三角瓶？）。大米培養(yǎng)基如何制作，如何接種（還用劃線法嗎）？霉菌孢子的培養(yǎng)一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。培養(yǎng)的溫度一般為252

5、8C。培養(yǎng)時間一般為414天。培養(yǎng)基的特點：成本低、米粒之間結(jié)構(gòu)疏松提高比表面積和氧的傳質(zhì)，營養(yǎng)適當(dāng)（要求大米的白點?。?；有利于孢子的生長。怎樣才能獲得數(shù)量集中的孢子量？能否將一個玻片斜插如培養(yǎng)基上，來獲得制片？（答案是肯定的）得到的培養(yǎng)物能否檢測其生長量？大米孢子的要求：1粒米含1.4*106個孢子三、教學(xué)任務(wù)導(dǎo)入（資訊）要求學(xué)生快速瀏覽青霉素發(fā)酵學(xué)習(xí)指導(dǎo)書上的參考資料，并提煉出大米孢子制備的關(guān)鍵技術(shù)點，從而讓學(xué)生建立對該工作過程的感性認(rèn)識。接著教師隨機(jī)指定學(xué)生回答問題：大米孢子培養(yǎng)物在青霉素發(fā)酵生產(chǎn)流程中的作用是什么？從而引出本次課要完成的任務(wù)。附：大米孢子制備過程：1. 將優(yōu)質(zhì)新米（大米

6、白點?。┯盟?. 倒入搪瓷盤內(nèi)蒸15分鐘3. 蒸畢，取出搓散團(tuán)塊，稍冷，加0.5%到1.0%玉米漿4. 分裝于茄形瓶內(nèi)，裝2到3層5. 蒸汽滅菌（121攝氏度30分鐘）冷卻備用6. 取制備好的斜面孢子管，加入少量無菌水，制成孢子懸液7. 接入到裝有大米的茄形瓶（250毫升）中，培養(yǎng)2到3天，上下翻動一次，繼續(xù)培養(yǎng)，直到大米表面長滿菌絲，形成綠色孢子（4攝氏度冰箱內(nèi)保存，10天內(nèi)使用）。引導(dǎo)學(xué)生分析大米孢子制備的詳細(xì)步驟，找出關(guān)鍵技術(shù)點，導(dǎo)出工作過程：由試管斜面培養(yǎng)物到大米培養(yǎng)基（三角瓶或茄子瓶）培養(yǎng)物的菌種擴(kuò)增制備流程。四、任務(wù)實施1. 初步方案討論（計劃）以小組為單位，按照發(fā)酵實訓(xùn)任務(wù)書

7、上的“任務(wù)1.4、產(chǎn)黃青霉菌株大米孢子制備”的學(xué)習(xí)目標(biāo)及任務(wù)要求，查閱學(xué)習(xí)指導(dǎo)書上的相應(yīng)參考資料，通過學(xué)習(xí)，各小組分別討論產(chǎn)黃青霉菌株的大米培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)及計數(shù)操作技術(shù)、填寫項目任務(wù)書。2. 最佳方案篩選（決策）教師對各小組方案進(jìn)行點評，推薦最佳方案，進(jìn)行修改完善，并對其它小組的方案進(jìn)行指導(dǎo)，找出錯誤或不足之處。同時，學(xué)生填寫項目任務(wù)書。3. 方案具體實施各小組按照產(chǎn)黃青霉菌株大米孢子制備制備流程的定稿方案，利用實驗室的器材，具體實施：將優(yōu)質(zhì)新米（大米白點?。┯盟?、倒入搪瓷盤內(nèi)蒸15分鐘、蒸畢，取出搓散團(tuán)塊，稍冷，加0.5%到1.0%玉米漿；分裝于茄形瓶內(nèi)，裝2到3層；蒸汽滅菌（1

8、21攝氏度30分鐘）冷卻備用；取制備好的斜面孢子管，加入少量無菌水，制成孢子懸液、接入到裝有大米的茄形瓶（250毫升）中，培養(yǎng)2到3天，上下翻動一次，繼續(xù)培養(yǎng)，直到大米表面長滿菌絲，形成綠色孢子（4攝氏度冰箱內(nèi)保存，10天內(nèi)使用）、分組交流以及進(jìn)行孢子計數(shù)，最后進(jìn)行顯微拍照，制作自己青霉素發(fā)酵實訓(xùn)動漫演示作業(yè)。仔細(xì)觀察實訓(xùn)生產(chǎn)的過程，對每一步都進(jìn)行記錄，最后完成小組用書的項目記錄表。4. 關(guān)鍵能力的重點指導(dǎo)（檢查）教師對學(xué)生的實踐練習(xí)進(jìn)行有效監(jiān)控，巡回指導(dǎo)，及時指出不規(guī)范的操作。并對其關(guān)鍵能力進(jìn)行重點指導(dǎo)。如大米篩選、拌制、分裝、滅菌，孢子液制備、接種、培養(yǎng)，以及顯微操作進(jìn)行孢子計數(shù)等。5. 任務(wù)結(jié)果評價完成產(chǎn)黃青霉菌株的大米孢子制備任務(wù)后，各小組分別展示產(chǎn)黃青霉菌株的大米孢子三角瓶培養(yǎng)物。首先，進(jìn)行組內(nèi)自我評價和組間互評，接著，教師對每組結(jié)果進(jìn)行評價，指出存在的問題和改進(jìn)的方法。（附：評價項目包括：產(chǎn)黃青霉菌株大米培養(yǎng)物無雜菌污染、產(chǎn)黃青霉菌株在大米培養(yǎng)基上生長指標(biāo)、鏡下能觀察到典型的不對稱分生孢子梗及青綠色成串圓球形小孢子。）6. 任務(wù)小結(jié) 各組討論進(jìn)行項目小結(jié)、填寫項目報告書。教師指出各小組在操作過