神經(jīng)元特異性烯醇化酶操作規(guī)程

1、杭州杭邦爾醫(yī)院檢驗科免疫室項目SOP文件編制人：劉鳳婷文 件 編 號HBE-JYK-NrYS-007 生效日期：2018年1丿1標準操作規(guī)程審核人：鐘劍版本號/修訂號：1/3神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定發(fā)布部門：檢驗科批準人：張延亮頁碼數(shù)：2528貞30神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨檢驗項1_1申請：神經(jīng)元特異性烯醇化酶；組合項LI申請：腫瘤標志物檢 查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1標本采集2. 1.1常規(guī)靜脈采血約2 ml,不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空 采血管。2?1. 2檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3急診標

2、本釆集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4標本釆集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收 并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5下列標本為不合格標本2.1.5.1標本量不足：少于03ml的全血標本，或少于0. lml的血清或血漿。2.1. 5. 2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。 2.1.5.3無法確認標本與申請單對應關(guān)系的。2.1. 5. 4其他如標識涂改、標本試管破裂等。2. 2標本保存2. 2. 1接收標本后在60min內(nèi)將標本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心 必須達到4000rpmX 15min,離心后的血清中不能含有顆

3、粒物或微量纖維蛋口。 22.2標本保存時間：室溫（1525°C）下可穩(wěn)定8h,普通冰箱中（28°C） 穩(wěn)定3d,在-20°C最多可保存4周。避免反復凍融。為避免標本中水分揮發(fā)使血 清濃縮，對保存時間超過Id的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2. 2. 3已完成測試的標本保持完整的識別號，置48°C冰箱內(nèi)保存7do2. 3標本釆集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動，早上或上午釆血。3. 3. 1方法及原理神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定采用雙位點加心化學發(fā)光免疫分析法，其檢測原理來 如下：第一步：將標本與包被著抗NSE單克隆抗體的超順磁性磁珠

4、以及抗NSE抗體- 堿性磷酸酶標記物添加到反應管中，經(jīng)過孵化，標本中的NSE和包被在磁珠上的 NSE抗體結(jié)合，樣本內(nèi)的NSE與包被在磁珠上的抗NSE抗體結(jié)合，同時抗SE抗 體-堿性磷酸酶標記物與樣本NSE上另一位點結(jié)合。在反應完成后，磁場吸附磁 珠，洗去未結(jié)合的物質(zhì)。第二步：將化學發(fā)光物添加到反應管內(nèi)，發(fā)光底物（AMPPD）被堿性磷酸酶所 分解，脫去一個磷酸基，生成一個不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物通過分子內(nèi)電 子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生間氧苯屮酸屮酯陰離子，處于激發(fā)態(tài)的間氧苯屮酸屮酯陰離子從激發(fā) 態(tài)返回基態(tài)時，產(chǎn)生化學發(fā)光，再通過光電倍增管對反應中所產(chǎn)生的光子數(shù)進行 測量。所產(chǎn)生光子數(shù)與樣本內(nèi)神經(jīng)元特異性烯醇

5、化酶的濃度成正比。樣本內(nèi)分析HBE-JYK-NrYS-007 生效日期：2018年1丿1 日版本號/修訂號：1/3標準操作規(guī)程神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定審核人：鐘劍批準人:張延亮頁碼數(shù)：2528貞發(fā)布部門：檢驗科物的量油校準曲線來確定。4試劑及其他用品4.1試劑：神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定試劑包，山深圳邁瑞公司出品。未打開的試劑保存保存于28°C,有效期18個月。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28do 4.2試劑盒組分4. 2. 1磁珠包被物（RG成分：包被著抗NSE抗體（小鼠單抗，IgG）的超順磁 力微粒，懸浮于緩沖液，含防腐劑。裝量：2X30 人份/盒，2X2. 7ml； 2X50 人

6、份/盒,2X3. 8ml； 2X100 人份 /盒,2X6. 6mlo4.2.2酶標記物（Rb）成分：抗NSE抗體（小鼠單抗，IgG） -堿性磷酸酶標記物 溶解于緩沖液，含防腐劑。裝量 2X30 人份/盒，2X2. 4ml； 2X50 人份/盒,2X3. 5ml； 2X100 人份/ 盒，2X6. 3ml o4. 2.3試劑即開即用，臨用時輕柔旋轉(zhuǎn)混勻數(shù)次，無須特殊準備。4.3其他試劑與用品4.3.1底物液4. 3.2清洗緩沖液等。5. 1校準品與校準模式校準類型和校準點數(shù)Lh非線性模式，6個校準點。儀器根據(jù)校準曲線卡片 數(shù)據(jù)（6參數(shù)對數(shù)擬合曲線）自動建立校準曲線。5.3校準周期：在同一批號試

7、劑使用期間校準曲線有效，但在間隔28d后需要 重新校準。另在：更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時；儀器進行全面保養(yǎng)后； 儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4校準液重建方法：液態(tài)校準液，即可使用。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則61質(zhì)控品釆用神經(jīng)元特異性烯醇化酶質(zhì)控品或釆用自備混合血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控液，即開即用，充分顛倒混勻，無需特殊準備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標本中測定質(zhì)控血清一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用L-J質(zhì)控圖，以±3s為失控限。標準差由本室實驗數(shù)據(jù)得 出。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時 糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標

8、本檢測。7適用儀器深圳邁瑞CL-12001自動發(fā)光免疫分析儀。8標本檢測步驟裝載試劑一進行校準一進行質(zhì)控一輸入工作表一加載樣本一測 定操作一結(jié)果復核一報告。9主要分析參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預設的分析項LI參數(shù)和試劑條碼的信息自動進 行分析。標本5卩1。文 件 編 號HBE-JYK-NrYS-007 生效日期：2018年1丿1標準操作規(guī)程審核人：鐘劍版本號/修訂號：1/3神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定發(fā)布部門：檢驗科批準人：張延亮頁碼數(shù)：2528貞10結(jié)果計算儀器根據(jù)校準曲線自動給岀每個標本測定結(jié)果。測定結(jié)果單位以ng/mLo 11檢驗結(jié)果的報告及范圍 11-1結(jié)果的報告11. 1.1結(jié)果經(jīng)審

9、核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11. 1.2報告單上標明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和 審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11. 1. 3如收到標本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：0.0016. 5 ng/mL。超過此范圉的結(jié)果報告時必須附有證明該 結(jié)果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本重新稀釋后重復測定的結(jié)果。12操作性能12-1 精密度：批內(nèi) CV 3. 5%4. 4%；批間 CV 1. 34%2.15%。12. 2 分析范圍：0. 05370ng/mL12.3分析靈敏度：0. 05ng/mLo12.4方法的有限性及干擾因素:甘油

10、三脂（W3000mg/L）、血紅蛋白（W10g/L） 或膽紅素（W73mg/L），高總蛋白（W10g/dl）的樣本，對測定結(jié)果的干擾偏差 在正負10%范圍；含類風濕因子（W400IU/H11）的樣本，對測試結(jié)果的干擾偏差 在正負15%范圍內(nèi)。14臨床意義14.1小細胞肺癌患者SE水平明顯高于肺腺癌、肺鱗癌、大細胞肺癌等非小細 胞肺癌（NSCLC）,可用于鑒別診斷，監(jiān)測小細胞肺癌放療、化療后的治療效果， 治療有效時SE濃度逐漸降低至正常水平，復發(fā)時血清NSE升高。用神經(jīng)元特異 性烯醇化酶監(jiān)測小細胞肺癌的復發(fā)，比臨床確定復發(fā)要早412周。14. 2、神經(jīng)元特異性烯醇化酶還可用于神經(jīng)母細胞瘤和腎母細

11、胞瘤的鑒別診斷， 前者神經(jīng)元特異性烯醇化酶異常增高而后者增高不明顯，對神經(jīng)母細胞瘤的早期 診斷亦有較高的臨床應用價值。也可用來監(jiān)測神經(jīng)母細胞瘤的病情變化，評價療 效和預報復發(fā)。14.3.神經(jīng)內(nèi)分泌細胞腫瘤，如嗜銘細胞瘤，胰島細胞瘤，屮狀腺髓樣癌，黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細胞瘤等患者的血清NSE也可增高。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項H的聯(lián)系 15.1山資深專業(yè)人員負責檢驗結(jié)果的審核。15.2審核者認真審核每一個測定結(jié)果，對發(fā)出報告結(jié)果的可靠性負責，并在報 告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項U：審核與其他腫瘤標志物等的關(guān)系，或參考受檢者臨床資料，若 發(fā)現(xiàn)與臨床相悖的情況，應分析與查找原因。16有關(guān)引用程

12、序與文件16.1 CL-12001自動發(fā)光分析儀儀器標準操作規(guī)程。16. 2免疫檢驗室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序。16.3檢驗結(jié)果審核程序。16. 4標本送檢和接收程序。杭州杭邦爾醫(yī)院檢驗科免疫室項目SOP文件編制人：劉鳳婷頁碼數(shù)：2528貞HBE-JYK-NrYS-007 生效日期：2018年1丿1 日版本號/修訂號：1/3標準操作規(guī)程神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定審核人：鐘劍批準人:張延亮發(fā)布部門：檢驗科17參考文獻17.1陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗管理與技術(shù)規(guī)程.杭州：浙江大學出版 社,2004.17. 2神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定試劑說明書。17.3葉應嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第三版）.東南大學出版社，2006.18本S0P變動程序任何一位使用本SOP的工作人員如提岀對本SOP改動意見，或本測定項L1的方法、試劑有變動的悄況，可以對本SOP作出改動，但必須先報經(jīng)專業(yè)主管