2022年2022年細(xì)胞生物學(xué)筆記-第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

1、精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載第三章細(xì)胞生物學(xué)討論方法如何學(xué)習(xí)細(xì)胞生物學(xué)？.抽象思維與動(dòng)態(tài)觀點(diǎn).結(jié)構(gòu)與功能統(tǒng)一的觀點(diǎn).同一性 unity 和多樣性 diversity 的問題.細(xì)胞生物學(xué)的主要內(nèi)容：結(jié)構(gòu)與功能（動(dòng)態(tài)特點(diǎn)）；細(xì)胞的生命活動(dòng)；.試驗(yàn)科學(xué)與試驗(yàn)技術(shù) 細(xì)胞真知源于試驗(yàn)室 what we know/how we know.第三章細(xì)胞生物學(xué)討論方法細(xì)胞形狀結(jié)構(gòu)的觀看方法細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞培育.細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞形狀結(jié)構(gòu)的觀看方法光學(xué)顯微鏡技術(shù) （ light microscopy）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載電子顯微鏡技術(shù)electro micros

2、copy掃描探針顯微鏡（ scanning probe microscope ） 掃描遂道顯微鏡scanning tunneling microscope 其次節(jié)細(xì)胞組分的分析方法離心分別技術(shù)細(xì)胞內(nèi)核酸.蛋白質(zhì).酶.糖與脂類等的顯示方法特異蛋白抗原的定位與定性細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性放射自顯影技術(shù)定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)第三節(jié)細(xì)胞培育.細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)細(xì)胞的培育細(xì)胞工程一.光學(xué)顯微鏡技術(shù)（light microscopy一般復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)熒光顯微鏡技術(shù) （fluorescence microscopy）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)（ laser

3、confocal microscopy）相差顯微鏡 （phase-contrast microscope）微分干涉顯微鏡（differential interference contrast microscope、 dic） 錄像增差顯微鏡技術(shù)（ video-enhance microscopy）二.電子顯微鏡技術(shù)電子顯微鏡的基本學(xué)問電鏡與光鏡的比較電鏡與光鏡光路圖比較電子顯微鏡的基本構(gòu)造主要電鏡制樣技術(shù)負(fù)染色技術(shù) 冰凍蝕刻技術(shù)超薄切片技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)掃描電鏡（ scanning electron microscope, sem） spmscanning probe microscope三

4、. 掃描遂道顯微鏡scanning probe microscope、spm80歲月進(jìn)展起來的檢測樣品微觀結(jié)構(gòu)的儀器包括： stm.afm.磁力顯微鏡.摩擦力顯微鏡等原理： 掃描探針與樣品接觸或達(dá)到很近距離時(shí),即產(chǎn)生彼此間相互作用力,如量子力學(xué)中的隧道效應(yīng)（隧道電流）.原子間作用力.磁力.摩擦力等,并在運(yùn)算機(jī)顯示出來,從而反映出樣品表面形貌信息.電精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載特性或磁特性等；裝置：掃描的壓電陶瓷,靠近裝置,電子學(xué)反饋掌握系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集.處理.顯示系統(tǒng)；特點(diǎn)：（ 1）可對晶體或非晶體成像,無需復(fù)雜運(yùn)算,且辨論本事高；（側(cè)辨論率為 0.1 0.2nm,縱辨論率可達(dá)

5、 0.01nm）；（ 2）可實(shí)時(shí)得到樣品表面三維圖象,可測量厚度信息；（ 3）可在真空.大氣.液體等多種條件下工作；非破壞性測量；（ 4）可連續(xù)成像,進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀看用途：納米生物學(xué)討論領(lǐng)域中的重要工具、 在原子水平上揭示樣本表面的結(jié)構(gòu)；一般復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)光鏡樣本制作辨論率為指區(qū)分開兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的最小距離熒光顯微鏡技術(shù)（ fluorescence microscopy ）原理與應(yīng)用直接熒光標(biāo)記技術(shù)間接免疫熒光標(biāo)記技術(shù)精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載在光鏡水平用于特異蛋白質(zhì)等生物大分子的定性定位：如綠色熒光蛋白 gfp 的應(yīng)用激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)（laser scanning co

6、nfocal microscopy）原 理 應(yīng)用：排除焦平面以外光的干擾,增強(qiáng)圖像反差和提高辨論率1.4 1.7,可重構(gòu)樣品的三維結(jié)構(gòu)；相差顯微鏡（ phase-contrast microscope ）將光程差或相位差轉(zhuǎn)換成振幅差,可用于觀看活細(xì)胞微分干涉顯微鏡（ differential-interference microscope ） 偏振光經(jīng)合成后,使樣品中厚度上的微小區(qū)分轉(zhuǎn)化成明暗區(qū)分,增加了樣品反差且具有立體感；適于討論活細(xì)胞中較大的細(xì)胞器錄像增差顯微鏡技術(shù)（video-enhance microscopy）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載運(yùn)算機(jī)幫助的 dic 顯微

7、鏡可在高辨論率下討論活細(xì)胞中的顆粒及細(xì)胞器的運(yùn)動(dòng)電鏡與光鏡的比較主要電鏡制樣技術(shù)超薄切片技術(shù)用于電鏡觀看的樣本制備示意圖負(fù)染色技術(shù)（ negative staining ）與金屬投影染色背景,襯托出樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)冰凍蝕刻技術(shù)（ freeze etching ）（技術(shù)示意圖） 冰凍斷裂與蝕刻復(fù)型：主要用來觀看膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒和膜表面結(jié)構(gòu)；快速冷凍深度蝕刻技術(shù)（quick freeze deep etching）電鏡三維重構(gòu)技術(shù)電子顯微術(shù).電子衍射與運(yùn)算機(jī)圖象處理相結(jié)合而形成的具有重要應(yīng)用前景的一門新技術(shù)；電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與x- 射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振分 析技術(shù)相 結(jié) 合 , 為當(dāng) 前結(jié)

8、構(gòu) 生 物 學(xué)（ structural biology）主要討論生物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系的主要試驗(yàn)手段；掃描電鏡原理與應(yīng)用：精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載電子 “探針 ”掃描,激發(fā)樣品表面放出二次電子,探測器收集二次電子成象；co 2臨界點(diǎn)干燥法防止引起樣品變形的表面張力問題一. 離心分別技術(shù)用途：于分別細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物差速離心：分別密度不同的細(xì)胞組分密度梯度離心：精細(xì)組分或生物大分子的分別二.細(xì)胞內(nèi)核酸.蛋白質(zhì). 酶.糖與脂類等的顯示方法原理 ：利用一些顯色劑與所檢測物質(zhì)中一些特別基團(tuán)特異性結(jié)合的特點(diǎn),通過顯色劑在細(xì)胞中的定位及顏色的深淺來 判定某種物質(zhì)在細(xì)

9、胞中的分布和含量；feulgen staining精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載三.特異蛋白抗原的定位與定性免疫酶標(biāo)技術(shù)免疫膠體金免疫熒光技術(shù)：快速.靈敏.有特異性,但其辨論率有限（圖）蛋白電泳 sds-page與免疫印跡反應(yīng) western-blot免疫電鏡技術(shù)： 免疫鐵蛋白技術(shù)技術(shù)應(yīng)用： 通過對分泌蛋白的定位, 可以確定某種蛋白的分泌動(dòng)態(tài)；胞內(nèi)酶的討論；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等四.細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性光鏡水平的原位雜交技術(shù)（同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的探針）電鏡水平的原位雜交技術(shù)（生物素標(biāo)記的探針與抗生物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合）pcr技術(shù)五.放射自顯影技術(shù)原理及

10、應(yīng)用：利用同位素的放射自顯影,對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性.定位與半定量討論；實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動(dòng)態(tài)和追蹤討論；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載步驟：前體物摻入細(xì)胞（標(biāo)記：連續(xù)標(biāo)記和脈沖標(biāo)記） 放射自顯影六定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)細(xì)胞顯微分光光度術(shù)（microspectrophotometry）利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對特異光譜的吸取,測定這些物質(zhì)（如核酸與蛋白質(zhì)等）在細(xì)胞內(nèi)的含量；包括：紫外光顯微分光光度測定法可見光顯微分光光度測定法流式細(xì)胞儀（ flow cytometry）主要應(yīng)用：用于定量測定細(xì)胞中的dna.rna或某一特異蛋白的含量；測定細(xì)胞群體中不同時(shí)相細(xì)胞的數(shù)量；從細(xì)胞

11、群體中分別某些特異染色的細(xì)胞；分別 dna含量不同的中期染色體；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載動(dòng)物細(xì)胞培育一.細(xì)胞的培育類型：原代培育細(xì)胞（primary culture cell）繼代培育細(xì)胞（ sub-culture cell）細(xì)胞株（ cell strain） 正常二倍體,接觸抑制細(xì)胞系（ cell line） 亞二倍體,接觸抑制丟失精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載植物細(xì)胞類型： 原生質(zhì)體培育（體細(xì)胞培育）單倍體細(xì)胞培育（花藥培育）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載非細(xì)胞體系（ cell-free system）二.細(xì)胞工程細(xì)胞融合（cell fusion ）與細(xì)胞雜交（ cell hybridization）技術(shù)單克隆抗體（ monocl