甘肅省手足口病防控技術(shù)方案(試行)

1、甘肅省手足口病防控技術(shù)方案（試行）手足口病（hand-foot-mouth disease, hfmd）是由多種腸道病毒 引起的常見傳染病，以嬰幼兒發(fā)病為主。大多數(shù)患者癥狀輕微，以發(fā) 熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。少數(shù)患兒可出現(xiàn) 中樞神經(jīng)、呼吸系統(tǒng)損害，引發(fā)腦炎、急性弛緩性麻痹、腦水腫和心 肌炎等，個(gè)別重癥患兒病情進(jìn)展快，易發(fā)生死亡。少年兒童和成人感 染后多不發(fā)病，但能夠傳播病毒。引起手足口病的腸道病毒包括腸道 病毒71型（ev71）和a組柯薩奇病毒（coxa）、?？刹《荆╡cho）的 某些血清型。ev71感染引起重癥病例的比例較大。腸道病毒傳染性強(qiáng)， 隱性感染比例大，傳播途徑

2、復(fù)雜，傳播速度快，易引起暴發(fā)或流行。 為指導(dǎo)各地做好手足口病的預(yù)防控制，依據(jù)衛(wèi)生部手足口病預(yù)防控 制指南（2008版5月13日更新）、腸道病毒（ev71）感染診療 指南（2008年版）、醫(yī)療機(jī)構(gòu)手足口病診療技術(shù)指南（試行） 制定本方案。一、目的（一）指導(dǎo)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)開展手足口病的疫情報(bào) 告和監(jiān)測(cè)；全面落實(shí)綜合性防治措施，科學(xué)有效控制疫情；（二）加強(qiáng)手足口病病例的救治工作，減少危重病例死亡，提高 治愈率；（三）指導(dǎo)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)開展流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)；（四）指導(dǎo)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展公眾預(yù)防和疫情應(yīng)急處置。二、病原學(xué)引起手足口病的病原體主要為小rna病毒科、腸道病毒

3、屬的柯薩奇 病毒（coxsackie virus） a 組 16、4、5、7、9、10 型，b 組 2、5 型; ?？刹《荆╡cho viruses）和腸遒病毒71型（ev71）。其中以ev71 及cox a16型最為常見。腸道病毒適合在濕、熱的環(huán)境下生存與傳播，對(duì)乙醚、去氯膽酸 鹽等不敏感，75%酒精和5%來蘇亦不能將其滅活，但對(duì)紫外線及干燥 敏感。各種氧化劑（高錳酸鉀、漂白粉等）、甲醛、碘酒都能滅活病毒。 病毒在50 1可被迅速滅活，但lmol濃度二價(jià)陽離子環(huán)境可提高病毒對(duì)熱滅活的抵抗力，病毒在4 °c可存活1年，在-20 °c可長(zhǎng)期保存， 在外環(huán)境中病毒可長(zhǎng)期存活。三

4、、流行病學(xué)（一）流行概況手足口病是全球性傳染病，世界大部分地區(qū)均有此病流行的報(bào)道。 1957年新西蘭首次報(bào)道該病。1958年分離出柯薩奇病毒，1959年提 出“手足口病”命名。之后保加利亞、英國、馬來西亞等國均有本病 流行。我國于1981年上海首次報(bào)道本病，此后，北京、河北、天津、福 建、吉林、山東、湖北、青海和廣東等10幾個(gè)省份均有本病報(bào)道。1983 年天津發(fā)生柯薩奇病毒a16型引起的手足口病暴發(fā)，5-10月間發(fā)生了 7000余病例。1998年，我國臺(tái)灣地區(qū)發(fā)生腸道病毒71型感染引起的 手足口病和皰疹性咽峽炎流行，監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)共報(bào)告129106例病例。當(dāng)年 共發(fā)生重癥病人405例，死亡78例，大

5、多為5歲以下的幼兒。手足口病流行無明顯的地區(qū)性。一年四季均可發(fā)病，以夏秋季多見， 冬季的發(fā)病較為少見。該病流行期間，可發(fā)生幼兒園和托兒所集體感 染和家庭聚集發(fā)病現(xiàn)象。（二）傳染源和傳播途徑人是人腸遒病毒唯一宿主，患者和隱性感染者均為本病的傳染源。 腸道病毒主要經(jīng)糞-口和/或呼吸道飛沫傳播，亦可經(jīng)接觸病人皮膚、 粘膜泡疹液而感染。是否可經(jīng)水或食物傳播尚不明確。病人糞便、皰 疹液和呼吸遒分泌物及其污染的手、毛巾、手絹、牙杯、玩具、食具、 奶具、床上用品、內(nèi)衣以及醫(yī)療器具等均可傳播本病。該病潛伏期一般為37天，沒有明顯的前驅(qū)癥狀，多數(shù)病人突然 起病。發(fā)病前數(shù)天，感染者咽部與糞便就可檢出病毒，通常以發(fā)

6、病后 一周內(nèi)傳染性最強(qiáng)。（三）易感性人對(duì)腸道病毒普遍易感，顯性感染和隱性感染后均可獲得特異性 免疫力，持續(xù)時(shí)間尚不明確。病毒的各型間無交叉免疫。各年齡組均 可感染發(fā)病，但以3歲年齡組發(fā)病率最高。四、診斷與治療各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)要嚴(yán)格診斷標(biāo)準(zhǔn)，注意鑒別診斷，科學(xué)合理診 斷手足口?。▍⒁娛肿憧诓☆A(yù)防控制指南（2008版5月13日更新）、 腸遒病毒（ev71）感染診療指南（2008年版）、醫(yī)療機(jī)構(gòu)手足口病診療技術(shù)指南（試行），努力做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。認(rèn) 真落實(shí)轉(zhuǎn)診制度、病例篩選制度和分類救治原則，及早發(fā)現(xiàn)和及時(shí)救 治危重患者，防止出現(xiàn)死亡病例。對(duì)住院手足口病人要提高診治效率， 使患者盡快康復(fù)。

7、五、疫情報(bào)告和管理（一）疫情報(bào)告1. 自2008年5月2日起，手足口病納入丙類傳染病管理。各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)要按照中華人民共和國法定傳染病防治法和 傳染病信息報(bào)告管理規(guī)范的有關(guān)規(guī)定，對(duì)符合上述病例定義的手 足口病病例進(jìn)行報(bào)告。2. 報(bào)告內(nèi)容與方法發(fā)現(xiàn)手足口病患者時(shí)，要在中華人民共和國法定傳染病報(bào)告卡 中“其他法定管理及重點(diǎn)監(jiān)測(cè)傳染病” 一欄中填報(bào)該病。實(shí)行網(wǎng)絡(luò)直 報(bào)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)于24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。未實(shí)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)的醫(yī)療機(jī) 構(gòu)應(yīng)于24小時(shí)之內(nèi)寄送出傳染病報(bào)告卡。報(bào)告病例分“臨床診斷病例” 和“實(shí)驗(yàn)室診斷病例”兩類。如為實(shí)驗(yàn)室診斷病例，則應(yīng)在報(bào)告卡片 “實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果”欄內(nèi)選擇相應(yīng)腸道病毒的具體

8、型別，在“重癥患 者” 一欄選擇“是、否”為重癥患者。報(bào)告卡基本項(xiàng)目要填全。報(bào)告 卡中帶部分為必填項(xiàng)目。必須填寫患者工作單位，如為托幼兒童 或?qū)W生應(yīng)填寫托幼機(jī)構(gòu)或?qū)W校名稱。現(xiàn)住址必須完整，農(nóng)村填寫到行 政村下的自然村，有門牌號(hào)的應(yīng)記錄，城鎮(zhèn)居民填寫到門牌號(hào)。基本 格式為“某某省，某某市，某某縣（區(qū)），某某鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道），某某行 政村（居委會(huì)）某某自然村”。為便于聯(lián)系，診療醫(yī)師盡可能記錄填寫就診者聯(lián)系電話。根據(jù)報(bào)告卡進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)時(shí)，應(yīng)錄入完整信息。發(fā)現(xiàn)卡上信息不全要追蹤補(bǔ)齊。傳染病報(bào)告卡由首診醫(yī)師填寫。對(duì)于回顧調(diào)查發(fā)現(xiàn)的病例以及漏報(bào)后的補(bǔ)報(bào)病例要在備注欄標(biāo)示。（二）疫情管理縣（區(qū)）級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)

9、構(gòu)疫情管理人員，要保證每日（包括 節(jié)假日）上網(wǎng)瀏覽6次以上，及時(shí)對(duì)疫情報(bào)告信息進(jìn)行審核、查重等 訂正工作，查重條件可按姓名、性別、現(xiàn)住址、病種及其它項(xiàng)目認(rèn)真 審核，注意查詢外地報(bào)當(dāng)?shù)乜?，?yán)禁延時(shí)后集中審卡，所有卡片必須 保證當(dāng)日審核。對(duì)每一張電子卡片都要打開后詳細(xì)逐項(xiàng)審核，發(fā)現(xiàn)有 疑問、信息不全要追蹤核查，保證網(wǎng)絡(luò)直報(bào)數(shù)據(jù)的質(zhì)量。同時(shí)加強(qiáng)對(duì) 轄區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)直報(bào)技術(shù)指導(dǎo)，特別是重點(diǎn)做好對(duì)當(dāng)?shù)厥肿憧诓《?點(diǎn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的指導(dǎo)和信息溝通。及時(shí)對(duì)網(wǎng)絡(luò)直報(bào)的個(gè)案信息進(jìn)行專題 分析，使之成為各地政府清楚掌握疫情的主渠道。日?qǐng)?bào)常規(guī)按照“審 核曰期”統(tǒng)計(jì)到前一天24時(shí)止。如果需要專門分析，可導(dǎo)出個(gè)案用電 子表格

10、按需求進(jìn)行分析。應(yīng)加強(qiáng)主動(dòng)搜索，發(fā)現(xiàn)異常升高或病例呈聚集性分布或暴發(fā)疫情 或出現(xiàn)重癥病例或死亡病例，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行核實(shí)，確定真實(shí)性后， 立即向同級(jí)衛(wèi)生行政部門及上級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)電話報(bào)告，隨后2 小時(shí)內(nèi)完成書面報(bào)告，以傳真形式逐級(jí)上報(bào)，并根據(jù)疫情發(fā)展、處置情 況，及時(shí)上報(bào)進(jìn)程報(bào)告和結(jié)案報(bào)告。（三）局部地區(qū)或在同一托幼機(jī)構(gòu)、學(xué)校等集體單位發(fā)生手足口 病流行或暴發(fā)時(shí)，按照突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急條例、全國突發(fā)公 共衛(wèi)生事件應(yīng)急預(yù)案、突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測(cè)信息報(bào) 告管理辦法、甘肅省突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急預(yù)案及有關(guān)規(guī)定，及 時(shí)進(jìn)行突發(fā)公共衛(wèi)生事件信息報(bào)告。暴發(fā)疫情：是指1周內(nèi)，同一學(xué)校、托幼機(jī)

11、構(gòu)等集體單位、自然村 寨（居委會(huì)）發(fā)生5例及以上病例；或1例及以上重癥病例，或發(fā)生1 例及以上手足口病死亡病例。六、現(xiàn)場(chǎng)處置堅(jiān)持屬地化原則，上級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)可以給予技術(shù)指導(dǎo)和實(shí) 驗(yàn)室支持，根據(jù)疫情需要參與現(xiàn)場(chǎng)處置工作。在現(xiàn)場(chǎng)處置工作中，堅(jiān)持控制優(yōu)先、實(shí)驗(yàn)室和流行病學(xué)調(diào)查相結(jié) 合的原則，采取邊搶救、邊調(diào)查、邊核實(shí)、邊處理的方式，以有效措 施控制事態(tài)發(fā)展。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查信息，將患者生活、學(xué)習(xí)或玩耍 地點(diǎn)作為處置重點(diǎn)（見附件2）。（一）流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)手足口病報(bào)告病例數(shù)明顯增多、病例呈聚集性分布、重癥病 例或死亡病例時(shí)，應(yīng)組織開展流行病學(xué)調(diào)查。接到疫情報(bào)告后，屬地疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)，

12、對(duì)報(bào) 告的病例進(jìn)行核實(shí)診斷，確定流行或暴發(fā)的存在。一經(jīng)查實(shí)，立即組 織派遣應(yīng)急處理人員趕赴現(xiàn)場(chǎng)或接診醫(yī)院，迅速開展流行病學(xué)調(diào)查。 住院病例、暴發(fā)疫情個(gè)案調(diào)查率應(yīng)迗w0%，就診較集中的醫(yī)療機(jī)構(gòu) 的個(gè)案調(diào)查率應(yīng)迗50%以上。在病例個(gè)案調(diào)查時(shí)，要詳細(xì)了解一般情 況、流行病學(xué)接觸史、發(fā)病就診過程、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果、危險(xiǎn)因素等情況；對(duì)臨床表現(xiàn)和臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目等內(nèi)容的結(jié)果，要及時(shí) 與有關(guān)醫(yī)院聯(lián)系，從病歷中提取。個(gè)案調(diào)查要由流行病學(xué)專業(yè)人員承 擔(dān)，逐一問卷調(diào)查，表格填寫要工整、仔細(xì)，不得有漏項(xiàng)、缺項(xiàng)（個(gè) 案表見附件5）。所有個(gè)案調(diào)查表和采樣登記表等要有專人負(fù)責(zé)，對(duì) 收集的信息及時(shí)進(jìn)行分析。主要分析內(nèi)容

13、是病例的分布特點(diǎn)，時(shí)間、空間等聚集性病例分布特點(diǎn)，病例就診醫(yī)院變化情況，病例就診間隔 的變化情況，發(fā)病趨勢(shì)分析等。（二）規(guī)范采集標(biāo)本發(fā)現(xiàn)手足口病報(bào)告病例數(shù)明顯增多、病例呈聚集性分布、重癥病 例或死亡病例時(shí)應(yīng)采集咽試子、糞便、水皰液和雙份血清標(biāo)本，每個(gè) 病例的標(biāo)本要詳細(xì)填寫采送樣登記表、個(gè)案表，各種標(biāo)本的采樣方法 和有關(guān)要求說見附件3、4、5。采樣登記表的編號(hào)要與個(gè)案調(diào)查表的 編號(hào)一致。（三）疫情控制1. 控制傳染源對(duì)患者實(shí)行隔離治療，嚴(yán)格管理傳染源。對(duì)住院治療的患者，要 限制其陪護(hù)和接觸者人數(shù)，接觸人員要做好個(gè)人衛(wèi)生及個(gè)人防護(hù)；對(duì) 居家治療的病人，具體指導(dǎo)、落實(shí)隔離措施。患者的密切接觸者可居

14、家醫(yī)學(xué)觀察，一旦出現(xiàn)類似癥狀督促及時(shí)到定點(diǎn)醫(yī)院治療。2. 采取措施，切斷傳播途徑患者衣物用品、吐泄物、吐瀉容器及污染場(chǎng)所等用含氯消毒劑、 生石灰進(jìn)行消毒，防止家庭及醫(yī)院內(nèi)交叉感染；疫點(diǎn)、疫區(qū)所在地要 及時(shí)組織開展愛國衛(wèi)生運(yùn)動(dòng)，積極滅蠅、滅蚊，對(duì)垃圾、糞便、污水 及時(shí)清運(yùn)和消毒處理，整治城鄉(xiāng)衛(wèi)生環(huán)境，嚴(yán)防水源污染。3. 在手足口病流行季節(jié)，疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)督促、指導(dǎo)幼托機(jī) 構(gòu)和學(xué)校（尤其是出現(xiàn)病例的幼托機(jī)構(gòu)和學(xué)校）加強(qiáng)教室、校舍通風(fēng)， 落實(shí)消毒制度，對(duì)兒童玩具用品進(jìn)行每日消毒處理；落實(shí)每日晨檢制 度，及時(shí)了解兒童缺課情況，并做好記錄，發(fā)現(xiàn)患有發(fā)熱或皰疹的患 兒，應(yīng)立即動(dòng)員家長(zhǎng)送患兒及時(shí)到醫(yī)院就

15、診，進(jìn)行家庭隔離治療或住 院隔離治療，直至病愈方可返校。做好患病兒童的隨訪工作，隨時(shí)掌據(jù)患兒的病情進(jìn)展，病情加重應(yīng) 立即動(dòng)員家長(zhǎng)將患兒轉(zhuǎn)往條件好的二級(jí)以上綜合醫(yī)院或兒童醫(yī)院。當(dāng)同一幼托機(jī)構(gòu)內(nèi)出現(xiàn)暴發(fā)疫情或重癥病例或死亡病例時(shí)，建議 該幼托機(jī)構(gòu)暫時(shí)停課2-3周；當(dāng)學(xué)校出現(xiàn)暴發(fā)疫情或重癥病例或死亡 病例，根據(jù)疫情進(jìn)展情況以及疫情控制需要，必要時(shí)可建議采取停課 或部分停課措施，以保護(hù)易感兒童。4. 在手足口病流行季節(jié)及疫情發(fā)生時(shí)期，各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu) 應(yīng)積極開展健康教育，采取張貼宣傳畫、發(fā)放宣傳單、板報(bào)等形式， 向社會(huì)人群宣傳防治知識(shí)，提高群眾防病知識(shí)水平。暴發(fā)疫情處理結(jié)束后，要及時(shí)收集、整理、統(tǒng)

16、計(jì)、分析調(diào)查資料， 寫出詳細(xì)的報(bào)告，報(bào)告主要內(nèi)容包括：事件名稱、事件類別、發(fā)生時(shí) 間、地點(diǎn)、涉及的地域范圍、人數(shù)、主要癥狀與體征、病情輕重情況、 可能的原因、已經(jīng)采取的措施、隨訪情況、事件的發(fā)展趨勢(shì)、下一步 工作計(jì)劃等。個(gè)案表、調(diào)查報(bào)告以傳真形式逐級(jí)上報(bào)。七、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（一）在手足口病流行季節(jié)，省疾病預(yù)防控制中心組織開展對(duì)手 足口病病例的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)。本年度初次發(fā)病的縣（區(qū)）應(yīng)采集5-10例 患者標(biāo)本，送省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行檢測(cè)（見附件10）。如有住院 或重癥或死亡病例，應(yīng)對(duì)所有病例進(jìn)行標(biāo)本采集及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。如有 暴發(fā)疫情應(yīng)采集部分標(biāo)本進(jìn)行病原檢測(cè)。有檢測(cè)能力的市（州）可以 自行檢測(cè)，陽性標(biāo)本

17、送至省疾病預(yù)防控制中心復(fù)核。（二）檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告與反饋省疾病預(yù)防控制中心每周五將已完成實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的病例個(gè)案調(diào)查 表以及檢測(cè)結(jié)果一覽表（見附件6）上傳至中國疾病控預(yù)防控制中心。 并及時(shí)以書面報(bào)告形式向各市（州）疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)反饋。八、日?qǐng)?bào)告制度當(dāng)出現(xiàn)暴發(fā)疫情或重癥病例或死亡病例時(shí)，要求實(shí)行日?qǐng)?bào)告（見 附件7）。即接診醫(yī)院除對(duì)手足口病例進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)外，應(yīng)于次日9: 前向轄地內(nèi)縣（區(qū)）疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告前日0: 00-24： 00內(nèi) 的發(fā)病情況，縣（區(qū)）級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)于11: 00前向市（州） 級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和本級(jí)衛(wèi)生行政部門報(bào)告，市（州）疾病預(yù)防控 制機(jī)構(gòu)于13: 00前以傳真形式向

18、本級(jí)衛(wèi)生行政部門和省疾病預(yù)防控制 中心上報(bào)，省疾病預(yù)防控制中心匯總分析后于15: 00前以簡(jiǎn)報(bào)形式上 報(bào)省衛(wèi)生廳。省疾病預(yù)防控制中心傳電話九、預(yù)防控制措施手足口病傳播途徑多，嬰幼兒和兒童普遍易感。做好個(gè)人、家庭和 托幼機(jī)構(gòu)的衛(wèi)生，防止醫(yī)院感染是預(yù)防手足口病的關(guān)鍵措施。（一）個(gè)人預(yù)防措施1. 看護(hù)人要給孩子勤洗手，并教育指導(dǎo)兒童養(yǎng)成良好的洗手習(xí)慣。 飯前便后、外出后要用肥皂或洗手液洗手；2. 看護(hù)人接觸兒童前、替幼童更換尿布、處理糞便后均要洗手， 并妥善處理污物；3. 嬰幼兒使用的奶瓶、奶嘴、餐具及毛巾使用前后應(yīng)充分清洗；4. 不要讓兒童喝

19、生水、吃生冷食物，避免接觸患病兒童；5. 本病流行期間不宜帶兒童到人群聚集、空氣流通差的公共場(chǎng)所， 注意保持家庭環(huán)境衛(wèi)生，居室要經(jīng)常通風(fēng)，勤曬衣被；6. 兒童出現(xiàn)相關(guān)癥狀要及時(shí)到醫(yī)療機(jī)構(gòu)就診。居家治療的兒童， 不要接觸其他兒童，父母要及時(shí)對(duì)患兒的衣物進(jìn)行晾曬或消毒，對(duì)患 兒糞便及時(shí)進(jìn)行消毒處理；輕癥患兒不必住院，宜居家治療、休息， 以減少交叉感染。（二）托幼機(jī)構(gòu)及小學(xué)等集體單位的預(yù)防控制措施1. 本病流行季節(jié)，教室和宿舍等場(chǎng)所要保持良好通風(fēng)，每日對(duì)門 把手、樓梯扶手、桌面等物體表面進(jìn)行擦拭消毒。當(dāng)?shù)匕l(fā)生本病流 行時(shí)，要增加每日擦拭、消毒次數(shù)。2. 每日對(duì)玩具、教具、生活用具、餐具等物品進(jìn)行清洗

20、消毒；3. 每日進(jìn)行晨檢，發(fā)現(xiàn)可疑患兒時(shí)，要對(duì)患兒采取及時(shí)送診、居 家休息的措施；對(duì)患兒所用的物品要立即進(jìn)行消毒處理；4. 發(fā)現(xiàn)患兒時(shí)，要及時(shí)向衛(wèi)生和教育部門報(bào)告。根據(jù)疫情控制需 要當(dāng)?shù)亟逃托l(wèi)生部門可決定采取托幼機(jī)構(gòu)或小學(xué)放假措施。5. 根據(jù)病情，患病兒童居家或住院隔離、治療，建議期限為癥 狀出現(xiàn)后2周且癥狀消失，或癥狀消退后一周?？祻?fù)返園后要注意 個(gè)人衛(wèi)生。（三）醫(yī)療機(jī)構(gòu)的預(yù)防控制措施1. 疾病流行期間，醫(yī)院應(yīng)實(shí)行預(yù)檢分診，并專辟診室（臺(tái)）接診 手足口病人，引導(dǎo)發(fā)熱出疹患兒到專門診室（臺(tái)）就診，候診及就診 等區(qū)域應(yīng)增加清潔消毒頻次，室內(nèi)清掃時(shí)應(yīng)采用濕式清潔方式；2. 醫(yī)務(wù)人員在診療、護(hù)理每

21、一位病人后，均應(yīng)認(rèn)真洗手或?qū)﹄p手 消毒；3. 診療、護(hù)理病人過程中所使用的非一次性的儀器、物品等要擦 拭消毒；4. 同一間病房?jī)?nèi)不應(yīng)收治其他非腸道病毒感染的患兒。重癥患兒 應(yīng)單獨(dú)隔離治療；5. 對(duì)住院患兒使用過的病床及桌椅等設(shè)施和物品必須消毒后才 能繼續(xù)使用；6. 患兒的呼吸道分泌物和糞便及其污染的物品要進(jìn)行消毒處理；7. 醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)手足口患者增多或腸道病毒感染相關(guān)死亡病例 時(shí)，要立即向當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門和疾控機(jī)構(gòu)報(bào)告。8. 完善診療紀(jì)錄。各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)包括村衛(wèi)生室要建立健全門 診曰志，出入院登記要詳細(xì)、認(rèn)真，尤其要詳細(xì)登記患者的家庭住址、 家長(zhǎng)姓名等，以利于開展流調(diào)和傳染源追蹤。十、健康教

22、育以廣播、電視、網(wǎng)絡(luò)、報(bào)紙、宣傳單等各種宣傳形式，開展腸道 傳染病防病知識(shí)宣傳，告誡家長(zhǎng)不要帶兒童到人群聚集的公共場(chǎng)所， 不要與患病兒童接觸；糾正兒童不良習(xí)慣，餐前便后要經(jīng)常洗手，對(duì) 兒童的玩具、餐具、衣物、用品要經(jīng)常消毒，托幼機(jī)構(gòu)課間洗手等， 家長(zhǎng)要注意個(gè)人衛(wèi)生，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣。附件1. 甘肅省手足口病應(yīng)急處置流程2. 標(biāo)本采集和保存技術(shù)要求一覽表3. 手足口病病例標(biāo)本送檢登記表4. 手足口病個(gè)案調(diào)查表5. 手足口病臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果報(bào)表6. 手足口病日?qǐng)?bào)告統(tǒng)計(jì)表7. 正確的洗手方法8. 腸道病毒消毒方法9. 手足口實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案康宣病教傳知畫單等 傳傳報(bào) 健育防識(shí)宣宣板毒點(diǎn)毒導(dǎo)毒 消疫消

23、指消:室確情動(dòng)m驗(yàn)驗(yàn)疫延 實(shí)檢認(rèn)蔓因采樣：糞便、咽拭子、流行病學(xué)：皰疹液、雙份病例確認(rèn)血清、腦脊液個(gè)案調(diào)查隔離治療流行因素調(diào)及時(shí)搶救查隔離病區(qū)消毒密接者追蹤污染物無害化調(diào)查保護(hù)易感人群資料整理、事件調(diào)查處理進(jìn)程、結(jié)案報(bào)附件2標(biāo)本采集和保存技術(shù)要求一覽表病人類型種類采集時(shí)間和頻次采集方法保存條件一般病例血清入院后立即采集真空采血管無菌采集全血，分離血清。最好在使 用抗生素前采集。如當(dāng)天內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，可4°c-8°c冷 藏保存，否則應(yīng)-20°c以下低溫保 存，-70'c最佳，咽拭子入院后立即采集塑料桿拭子檫拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭 子頭分別浸入含3ml病毒

24、或細(xì)菌采樣液的螺口 塑料管中同上便標(biāo)本1、入院后立即采集；2、臨床檢查采集標(biāo)本時(shí)留樣無菌管采集糞便標(biāo)本，標(biāo)簽清楚同上有fli疹癥狀病例皰疹液有皰疹時(shí)無菌采集同上有明確腦膜腦炎 或腦炎癥狀病例腦脊液急性期無菌采集同上死亡病例心臟穿刺組織死亡后未做尸檢時(shí)采集同上肺穿刺組織心包液胸腔積液尸檢標(biāo)本2份同上，1份福爾馬林充分固定后， rc保存附件3手足口病例標(biāo)本送檢登記表編號(hào)：-口口 （按照國家標(biāo)準(zhǔn)編碼：省編碼+市編碼+縣編碼 +病例序號(hào)）一、一般情況1.1患者姓名，若為14歲以下兒童，家長(zhǎng)姓名1.2性別1.3出生日期年月日（陰/陽歷）二、發(fā)病情況2. 1發(fā)病日期年_月_日2.2初診日期年_月_日2.

25、3初步診斷：2.4臨床癥狀：（1 ）輕型 （2 ）重型2.5是否住院 （1）是（2）否三、標(biāo)本采集情況類本標(biāo)型送標(biāo)編樣期采日否藏是冷本標(biāo)旦里樣期收日測(cè)期檢日果結(jié)驗(yàn)實(shí)rpc1rtrd21pe和體中抗子拭咽血清b標(biāo)便糞液脊腦液疹皰注：送檢標(biāo)本編號(hào)為“病例編號(hào)+標(biāo)本類型”，其中“t”為咽拭子代碼，“s1” 為急性期血清代碼，“s2”為恢復(fù)期血清代碼，“f”為糞便標(biāo)本代碼，“csf” 為腦脊液代碼，“h”為皰疹液代碼。米樣人:采樣單位:送樣人:附件4 手足口病個(gè)案調(diào)查表編號(hào)：-口口（按照國家標(biāo)準(zhǔn)編碼：省編碼+市編碼+縣編碼+病例序號(hào)） 調(diào)查單位：是否報(bào)傳染病卡（1）否（2）是卡號(hào)口口口一、一般情況1

26、.患者姓名2. 性別3. 出生日期年月日4 .職業(yè) （1）托幼兒童（2）散居兒童 （3）學(xué)生 （4）其他5. 工作單位（就讀學(xué)?；蛲杏讬C(jī)構(gòu)）6. 監(jiān)護(hù)人姓名：與患兒關(guān)系（父、母、袓父母、外袓父母、其他）聯(lián)系電話：7. 現(xiàn)住址市鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街辦）村（居）號(hào)8 .身高厘米體重公斤9 .有無既往病史（1）無 （2）有，主要疾病二、發(fā)病及就診情況1 .發(fā)病日期年_月_曰2.初診日期年_月_0;初診單位 （省級(jí)/市級(jí)/縣級(jí)/鄉(xiāng)級(jí)/村級(jí)）初步診斷：3 .臨床癥狀：（1 ）輕型 （2 ）重型4. 是否住院治療（1）否 （2）是，如住院，則：4.1所住醫(yī)院4. 2入院日期年_月_日時(shí)4. 3入院診斷4.4出院日期

27、年_月_日4.5出院診斷5. 預(yù)后：（1）痊愈（2）好轉(zhuǎn)（3）未愈（4）死亡，死亡日期年_月日時(shí)（5）其他;后遺癥無有，三、臨床情況 （一）臨床表現(xiàn)1. 發(fā)熱 （1）無 （2）有，最高°c,發(fā)熱持續(xù)時(shí)間天2. 皮疹（1）無 （2）有，如有，部位手足臀其他：3. 口腔粘膜上有無出現(xiàn)潰瘍/皰疹（1）無 （2）有4. 呼吸系統(tǒng)癥狀（1）無（2）有，如有請(qǐng)選擇流涕 咳嗽咽痛其他：5. 消化系統(tǒng)癥狀：（1）無（2）有，如有請(qǐng)選擇惡心嘔吐，如有，嘔吐方式：噴射性非噴射性不詳 腹痛腹瀉其他：6. 神經(jīng)系統(tǒng)癥狀：（1）無（2）有，如有請(qǐng)選擇頭痛精神異常嗜睡肌體無力肢體抖動(dòng)意識(shí)障礙昏迷驚厥7.心律失常

28、：（1）無(2)有8.頸項(xiàng)強(qiáng)直：（1）無(2)有9.巴氏癥：（1）無(2)有10.克氏癥：（1）無有11.布氏癥：（1）無(2)有12.腱反射：（1）正常（2）亢進(jìn)（3）減弱13.肌張力：（1）正常（2）亢進(jìn)（3）減弱（二）輔助檢查1.有無血常規(guī)檢測(cè)：（1）無（2）有，有則：wbc (x1o7l), n (%), l (2. 有無腦脊液檢測(cè)：（1）無（2）有，有則壓力（pa）,外觀（正常/異常），細(xì)胞記數(shù)（個(gè)），蛋白（）糖含量（）3. 有無x線檢查：（1）無 （2）有，表現(xiàn)為4. 心肌酶譜：（1）無 （2）有，肌鈣蛋白酶肌紅蛋白酶四、標(biāo)本采集情況型類標(biāo)送檢標(biāo)本編號(hào)否藏是冷量本標(biāo)樣期收日測(cè)期檢日

29、果結(jié)驗(yàn)實(shí)r3ctrtrd21peh中和抗體滴度子拭咽血h清本標(biāo)糞液脊腦液疹皰注：送檢標(biāo)本編號(hào)為“病例編號(hào)+標(biāo)本類型”，其中“t”為咽拭子代碼，“s1”為急性期血 清代碼，“s2”為恢復(fù)期血清代碼，“f”為糞便標(biāo)本代碼，“csf”為腦脊液代碼，“h”為皰疹 液代碼。調(diào)查人調(diào)查日期：年 月 日附件5甘肅省手足口病臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果報(bào)表號(hào)編名姓別性址住現(xiàn)病期發(fā)日斷診床本型標(biāo)類樣期采日現(xiàn)期檢日果結(jié)驗(yàn)r3c-rtrd21peh中和抗體 滴度型輕型報(bào)告單位: 填表人： 填報(bào)日期： 聯(lián)系方式：注釋：1.凡是檢測(cè)的標(biāo)本不論結(jié)果是否陽性均應(yīng)填寫本表；表中每一項(xiàng)內(nèi)容均要填寫完整；2. 編號(hào)填寫：按照國家標(biāo)準(zhǔn)編碼：省

30、編碼+市編碼+縣編碼+病例序號(hào)；3. 如同一病例采集2份級(jí)以上標(biāo)本時(shí)，每一份標(biāo)本填寫一行，檢測(cè)結(jié)果為陰性的標(biāo)本也要位單告報(bào)告報(bào)情疫況情院住況情療治家居重癥病例情況醐麵當(dāng)病sr數(shù)新亡日死數(shù)當(dāng)增住增日新數(shù)當(dāng)院雜驗(yàn)5t治院日出數(shù)當(dāng)愈治院計(jì)出數(shù)累愈居療數(shù)日治増當(dāng)家新現(xiàn)居家治療數(shù)計(jì)家療&累居治費(fèi)sit¥當(dāng)日新增數(shù)現(xiàn)住院數(shù)門u門計(jì)合u附表6報(bào)告單位（公章）：甘肅省手足口病疫情相關(guān)信息日拫表注：1.本表累計(jì)數(shù)均為2008年1月1日至報(bào)告日的合計(jì)。2. 縣區(qū)匯總時(shí)報(bào)告單位為醫(yī)院或衛(wèi)生院；市州匯總時(shí)為縣區(qū)名稱。3. 以“疾病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理系統(tǒng)”中“截至昨日24時(shí)的累計(jì)統(tǒng)計(jì)報(bào)表”數(shù)據(jù)填報(bào)；、以

31、截止昨日24時(shí)現(xiàn)有數(shù)據(jù)填報(bào)出吋間:年 月 日吋分填表人:聯(lián)系電話:審核人:附件7正確的洗手方法正確的洗手方法是個(gè)人良好衛(wèi)生習(xí)慣重要內(nèi)容之一，能有效的防 止腸道病毒的傳播。在與患者接觸后，觸摸眼、口、鼻前，打噴嚏或 咳嗽后，如廁后，帶口罩前及摘口罩后，接觸公共設(shè)施如扶手、門柄、 電梯按鈕、公共電話后、從外面回家后等均應(yīng)及時(shí)洗手。推薦較合理 的五步洗手法：濕、搓、沖、捧、擦。一、濕在水龍頭下把手淋濕，擦上肥皂或洗手液。二、搓手心、手臂、指縫相對(duì)搓揉20秒：（一）掌心相對(duì)，手指并攏相互摩擦；（二）手心對(duì)手背沿指縫相互搓擦，交換進(jìn)行；（三）掌心相對(duì)，雙手交叉沿指縫相互摩擦；（四）一手握另一手大拇指旋轉(zhuǎn)

32、搓擦，交換進(jìn)行；（五）彎曲各手指關(guān)節(jié)，在另一手掌心旋轉(zhuǎn)搓擦，交換進(jìn)行；（六）搓洗手腕，交換進(jìn)行。三、沖用清水把手沖洗干凈。四、捧用清水將水龍頭沖洗干凈，再關(guān)閉水龍頭。五、擦用干凈的毛巾/紙巾擦干或烘干機(jī)烘干。一、環(huán)境消毒要點(diǎn)（一）不需要大規(guī)模噴灑消毒。（二）只需要對(duì)經(jīng)常接觸的物體表面（如門把手、課桌椅、餐桌、 嬰兒床欄桿、樓梯把手等）、玩具、游樂設(shè)施、寢具及書本等做重點(diǎn) 性消毒。（三）清潔完畢的物體可移至戶外，接受陽光照射，通過紫外線 殺滅病毒。二、消毒方法的適用（一）糞便：可用生石灰以1u的比例與其攪拌均勻消毒。（二）食、飲具：用250毫克/升有效氯含氯消毒劑溶液浸泡30分鐘。（三）生活用具

33、、玩具、校舍、書籍：用500毫克/升含氯消毒 劑溶液擦拭消毒，作用時(shí)間30分鐘，或用0.3%過氧乙酸作用60分 鐘，或用紫外線燈直接照射30分鐘。（四）患者衣、被單：陽光下暴曬或煮沸20分鐘或用500毫克 /升有效氯含氯消毒劑浸泡30分鐘。（五）盛放排瀉物的容器：用500毫克/升有效氯含氯消毒劑浸 泡120分鐘。（六）飲用水：用13毫克/升有效氯含氯消毒劑如漂白粉、優(yōu) 氯凈等作用30分鐘。（七）滅蠅：可用5%氯氰菊酯（奮斗吶）、2. 5%溴氰菊酯或其他 殺蟲劑，按說明書使用。（八）生活污水：用50毫克/升有效氯含氯消毒劑作用120分鐘。（九）垃圾：用1000毫克/升有效氯含氯消毒劑溶液噴霧作用

34、 120分鐘。附件9手足口病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）為規(guī)范手足口病的標(biāo)本采集、運(yùn)送及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)操作程序，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性， 從而為手足口病的明確診斷和相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供可靠的依據(jù)，特制定本方案。手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原則和程序手足口病的診斷一般是通過采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行病毒分離和病毒鑒 定，如果沒有采到合適的臨床標(biāo)本，或無法進(jìn)行病毒分離，也可以通過血清學(xué)檢 測(cè)（如中和實(shí)驗(yàn)）來檢測(cè)血清中的中和抗體，或直接從臨床標(biāo)本中檢測(cè)病毒的核 酸來診斷（見下圖：手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷流程圖）。一般是由省級(jí)病毒實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒的分離，爆發(fā)疫情范圍較大時(shí)，國家參比 實(shí)驗(yàn)室也可以提供技術(shù)支持。病毒分離成功后，送至國家參比實(shí)

35、驗(yàn)室進(jìn)行鑒定或 復(fù)核，同時(shí)對(duì)全國手足口病的病原進(jìn)行病毒學(xué)監(jiān)測(cè)。國家參比實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本后， 在30日內(nèi)將結(jié)果反饋給省級(jí)實(shí)驗(yàn)室。很多血清型的腸道病毒能引起手足口病，不同細(xì)胞系對(duì)不同病毒的敏感性是 有所不同的，而不同時(shí)期腸道病毒的流行株也不同。通常用于腸道病毒分離的細(xì) 胞系為rd細(xì)胞（對(duì)ca16和ev71敏感）、hep-2細(xì)胞（對(duì)某些柯薩奇b組病毒敏 感）等，聯(lián)合使用上述兩種或更多細(xì)胞（如vero細(xì)胞）有助于分離到更多的腸 道病毒。使用血清型特異性的中和抗血清進(jìn)行的中和實(shí)驗(yàn)是腸道病毒鑒定的基本方 法，如果使用了適當(dāng)?shù)目寡?，?shí)驗(yàn)結(jié)果是比較可靠的。因?yàn)槟c道病毒包括若干 個(gè)血清型，通常使用組合抗血清進(jìn)行

36、鑒定，有些組合抗血清已經(jīng)商品化。當(dāng)無法進(jìn)行病毒分離或得不到適用于病毒分離用的標(biāo)本時(shí)，血清學(xué)檢測(cè)可以 為腸道病毒的感染提供一個(gè)間接的證據(jù)。一般用急性期血清與恢復(fù)期血清的檢測(cè) 結(jié)果進(jìn)行比較，抗體滴度呈四倍或以上增高證明有急性感染。但是，無癥狀的腸 道病毒感染也是常見的，所以對(duì)檢測(cè)結(jié)果的解釋要慎重一些。為了提高檢測(cè)速度，也為了輔助中和實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行毒株鑒定，最近很多實(shí)驗(yàn)室 都使用分子生物學(xué)方法。目前，用分子生物學(xué)方法對(duì)腸道病毒進(jìn)行定型還沒有統(tǒng) 一的標(biāo)準(zhǔn)，而且要根據(jù)檢測(cè)目的選擇使用適用的方法。檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)如果從臨床標(biāo)本中分離到腸道病毒，尤其是分離自腦脊液、皰疹液，那么很 可能該病毒就是病因病原。當(dāng)無法進(jìn)

37、行病毒分離或未分離到病毒時(shí)，血清學(xué)診斷 方法可以作為病毒感染的間接證據(jù)。對(duì)于難以分離到的腸道病毒，分子生物學(xué)方 法如rt-pcr是很有用的。腸道病毒有時(shí)引起無癥狀感染，所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)際 意義應(yīng)結(jié)合臨床過程和流行病學(xué)資料進(jìn)行解釋。實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)手、足、口等部位典型皮疹即可作出hfmd臨床診斷，流行病學(xué)接觸史 有助于診斷，臨床診斷病例中符合下列之一，即為實(shí)驗(yàn)室診斷病例：1. 患者的糞便標(biāo)本、咽拭子標(biāo)本中病毒分離陽性率遠(yuǎn)高于對(duì)照人群；2. 腸道病毒型特異性中和抗體滴度彡1 : 256；或恢復(fù)期血清中腸道病毒型特 異性中和抗體較急性期有4倍或4倍以上增高；3. 在病變組織中如皰疹液或腦脊液中分離

38、到病毒；4. 自患者血清、皰疹液或腦脊液等標(biāo)本中檢測(cè)到病原體核酸。一、標(biāo)本采集對(duì)象標(biāo)本采集對(duì)象是暴發(fā)疫情出現(xiàn)時(shí)手足口病的臨床診斷病例和病例發(fā)病所在 社區(qū)（村）的臨近無病例的社區(qū)（村）或托幼機(jī)構(gòu)的5歲以下的兒童（作為健康 對(duì)照人群）。用于病毒分離的標(biāo)本包括糞便、咽拭子和皰疹液，如果患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥 狀，可以采集腦脊液標(biāo)本。對(duì)于血清學(xué)診斷，需要在急性期和恢復(fù)期采集雙份血 清標(biāo)本。臨床標(biāo)本在運(yùn)輸和貯存過程中要避免反復(fù)凍融，如果不能確保-20°c的 條件，應(yīng)該在0飛°c運(yùn)輸和保存。標(biāo)本應(yīng)冷凍運(yùn)輸，運(yùn)輸時(shí)要附有必要的信息， 如標(biāo)本編號(hào)、發(fā)病日期和標(biāo)本采集日期。二、標(biāo)本種類及采集、運(yùn)

39、送 （一）糞便標(biāo)本采集病人發(fā)病7日內(nèi)的糞便標(biāo)本，用于病原檢測(cè)。糞便標(biāo)本采集量58g/ 份，采集后立即放入無菌采便管內(nèi)，4°c暫存立即（12h內(nèi)）送迗實(shí)驗(yàn)室，一20°c 以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于一70°c冰箱。（二）咽拭子標(biāo)本采集病人發(fā)病3日內(nèi)的咽拭子標(biāo)本，用于病原檢測(cè)。用專用采樣棉簽，適 度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有 35ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端 處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。4°c暫存立即（12h內(nèi)）送迗實(shí)驗(yàn) 室，一20°c以下低溫冷凍

40、保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于一70°c冰箱。（三）血清標(biāo)本采集急性期（發(fā)病03d）和恢復(fù)期（發(fā)病1430d）雙份配對(duì)血清用于抗體 檢測(cè)。靜脈采集:t5ml全血，置于真空無菌采血管中，自凝后，分離血清，將血 清置于一2ctc以下冰箱中冷凍保存。（四）皰疹液在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液中分離到病毒具有很高的診斷價(jià)值， 可同時(shí)采集多個(gè)皰疹作為一份標(biāo)本。先用75%的酒精對(duì)皰疹周圍的皮膚進(jìn)行消 毒，然后用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內(nèi)裝有35ml 保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折 斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封。所采集標(biāo)本4°c暫

41、存立即（12h內(nèi)）送達(dá)實(shí)驗(yàn)室， 一20°c以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于一70°c冰箱。（五）腦脊液標(biāo)本出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的病例，要采集腦脊液標(biāo)本，進(jìn)行病原和抗體檢測(cè)，從腦 脊液中分離病毒也具有很高的診斷價(jià)值。采集時(shí)間為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后3天 內(nèi)，采集量為l.（t2.0ml。采集后立即裝入無菌帶墊圈的凍存管中，4°c暫存立 即（12h內(nèi)）送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，一20°c以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于一 70°c冰箱。（六）病例密切接觸者的標(biāo)本采集選擇典型病例所在的托幼機(jī)構(gòu)、或所在村，以新發(fā)病例密切接觸者為采樣 對(duì)象，采集單份糞便和血清標(biāo)本。

42、（七）健康對(duì)照的標(biāo)本采集選擇患兒發(fā)病所在社區(qū)（村）的臨近無病例的社區(qū)（村）或托幼機(jī)構(gòu)。采集 5歲以下的兒童單份糞便和血清標(biāo)本。三、標(biāo)本采集注意事項(xiàng)在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分離病毒具有很高的診 斷價(jià)值，但對(duì)于不同血清型的腸道病毒，腦脊液中的病毒分離率是大不相同的。 用于采集咽拭子的無菌拭子要放在適當(dāng)?shù)谋４嬉褐?，如維持液或生理鹽水，以 防干燥。用于分子生物學(xué)診斷的標(biāo)本采集與病毒分離標(biāo)本的采集方法一樣。為 了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性，標(biāo)本應(yīng)在病例發(fā)病后盡早采集，盡快檢測(cè)。 不能立即檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)冷凍保存。對(duì)于血清學(xué)診斷，急性期血清應(yīng)該在發(fā)病后 盡早采集，恢復(fù)期血清在發(fā)病兩周后采

43、集。四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)操作流程 （一）病毒分離1. 試劑配置（1）細(xì)胞的生長(zhǎng)液、維持液的配制見下表生長(zhǎng)液（gm）維持液（醒）eagle's 液（mem）86. 5ml92. 5mll-谷氨酰胺200mm1. 0ml1. 0ml胎牛血清10. 0ml2. 0ml7. 5%nahc03 溶液2. 5ml3. 5m 1p.s溶液*（青霉素及鏈霉素）1. 0ml1. oltll（2）糞便標(biāo)本的處理液完全pbs液中加入p. s溶液，終濃度為青霉素500單位/ml,鏈霉素為500ug/ mlo2. 病毒分離細(xì)胞系許多細(xì)胞系可支持人腸道病毒（如ev71、ca16）生長(zhǎng)。對(duì)于檢測(cè)手足口病的病原來說，建議所

44、有懷疑含ev71、ca16的標(biāo)本均需接種到以下兩種細(xì)胞系：> rd細(xì)胞，來源于人橫紋肌肉瘤細(xì)胞。> hep-2細(xì)胞，來源于人喉癌上皮細(xì)胞。3. 標(biāo)本的處理（1）糞便標(biāo)本的處理操作步驟:1.1在離心管上標(biāo)記標(biāo)本號(hào)；1.2每管中加入10ml pbs, lg玻璃珠、1ml氯仿；1. 3在生物安全柜中將每一份糞便標(biāo)本取大約2g加入標(biāo)記好的離心管中(確保離心管上的標(biāo)號(hào)與原始標(biāo)本的標(biāo)號(hào)一致)；1.4剩余的原始標(biāo)本最好留在原容器中，凍存于一20°c;1.5確保擰緊離心管，用機(jī)械震蕩器劇烈震蕩20min；1.6在確保離心機(jī)的蓋子蓋好和離心桶密封的情況下，用冷凍離心機(jī)在1500g條件下離心

45、20min；1.7在生物安全柜中將每一份標(biāo)本的上清液分別吸入2個(gè)有外螺旋蓋的 凍存管中(如果上清液不清澈，應(yīng)再用氯仿處理一次)；1.8 管糞便懸液凍存于一20°c作為備份，另一管存于48°(3以備接種。(2) 皰疹液標(biāo)本的處理皰疹液標(biāo)本通常直接用于病毒分離。(3) 腦脊液標(biāo)本的處理腦脊液標(biāo)本通常直接用于病毒分離。(4) 咽拭子標(biāo)本的處理咽拭子要在標(biāo)本運(yùn)輸(保存)液中充分?jǐn)噭?dòng)(至少40下)，以洗下拭子上粘 附的病毒及含有病毒的細(xì)胞等，然后在4°c條件下，10000 rpm離心20min，用 上清接種到細(xì)胞上，如果發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌污染，須用濾器過濾除菌。4. 接種和觀察(病

46、毒分離)(1) 顯微鏡下觀察單層細(xì)胞，以確保細(xì)胞是健康的。一個(gè)健康的單層細(xì)胞 會(huì)在傳代后3d左右形成；(2) 倒掉生長(zhǎng)液(gm)，換上11.2ml的維持液(麗)；(3) 每一份標(biāo)本需要同時(shí)接種2支rd細(xì)胞和2支hep-2細(xì)胞，正確標(biāo)記每 支細(xì)胞培養(yǎng)管(包括標(biāo)本的編號(hào)、日期、傳代數(shù))；(4) 每一種細(xì)胞至少標(biāo)記一管作為陰性對(duì)照；(5) 每支試管接種0.2ml的標(biāo)本懸液，培養(yǎng)溫度要求36°c (對(duì)于ahc標(biāo)本 的病毒分離，尤其是ev70的分離培養(yǎng)，強(qiáng)烈建議降低培養(yǎng)溫度，一般可為 34 35°c);(6) 使用倒置顯微鏡每天觀察細(xì)胞培養(yǎng)管，以觀察有特征性的腸道病毒致細(xì)胞病變效應(yīng)(

47、cpe)的出現(xiàn)(如細(xì)胞變圓，折光增強(qiáng)并脫離管壁等)；(7) 記錄接種管和對(duì)照管細(xì)胞所發(fā)生的變化至少一周，記錄cpe (1+4+)、 提示細(xì)胞受毒性反應(yīng)、老化或污染的影響而發(fā)生的變化(1+，25%； 2+, 25%50%; 3+, 50%75%; 4+， 75%100%);(8) 如果有特征性的腸道病毒cpe出現(xiàn)，要如實(shí)記錄，并觀察直到75%的 細(xì)胞發(fā)生變化(3+ cpe),然后儲(chǔ)藏在一20°c以備二次傳代。同一病例的二次傳 代的病毒分離物可以放到一起用于進(jìn)一步的鑒定；(9) 第1代培養(yǎng)見可疑細(xì)胞病變時(shí)繼續(xù)傳代，待細(xì)胞病變穩(wěn)定出現(xiàn)后一 20°c 或一70°c凍存；(

48、10) 代陽性分離物再傳二代，如果又有明顯的cpe出現(xiàn)，將病毒保存在 一20°c冰箱(二代病毒)。因二代病毒滴度高于用一代病毒，所以選用二代病毒 進(jìn)行鑒定。(11) 如果7d之后沒有cpe出現(xiàn)，那么盲傳1代繼續(xù)觀察7d。(注意：同 一病例標(biāo)本的細(xì)胞培養(yǎng)物不能混在一起再傳代，例如：不同細(xì)胞的培養(yǎng)物應(yīng)單獨(dú) 傳代)；(12) 盲傳2代后，仍然沒有出現(xiàn)cpe的，則判定為陰性；(13) 注意：如果接種后24h內(nèi)出現(xiàn)cpe，很可能是標(biāo)本中的非特異性成分 導(dǎo)致的毒性反應(yīng)。取100 ul陽性分離物傳二代，繼續(xù)觀察；或者在接種標(biāo)本吸 咐lh后用維持液清洗細(xì)胞層，可能會(huì)降低毒性反應(yīng)。(14) 幾個(gè)概念：

49、a：毒性反應(yīng)：如果在接種后廣2d內(nèi)細(xì)胞快速地調(diào)亡，這可能是由于 標(biāo)本中含有毒性物質(zhì)而導(dǎo)致的非特異性毒性反應(yīng)。這些已接種標(biāo)本的試管應(yīng)在一 20°c凍存，融化后取0.2ml接種到同一類型細(xì)胞中(此時(shí)是第二代)。如果又出 現(xiàn)了毒性反應(yīng)，那么應(yīng)該取原始標(biāo)本用pbs稀釋10倍，再次接種到同種細(xì)胞中。 這時(shí)應(yīng)被認(rèn)為是第一代。b：微生物污染：由于細(xì)菌污染而造成培養(yǎng)液混濁或細(xì)胞死亡經(jīng)常使病 毒造成的cpe無法確定或根本無法出現(xiàn)。重新取原始標(biāo)本，用氯仿處理，按上述 步驟重新接種到新鮮細(xì)胞上。c：盲傳：有時(shí)一周之后傳代細(xì)胞會(huì)老化，甚至細(xì)胞對(duì)照也出現(xiàn)了病變。 這時(shí)已接種標(biāo)本的試管應(yīng)在一20°c凍

50、存，融化后取0.2ml接種到同一類型的新鮮 單層細(xì)胞中，再觀察710d。如果盲傳兩代后仍然沒有產(chǎn)生cpe,那么認(rèn)為這個(gè) 標(biāo)本是陰性的。5. 病毒分離結(jié)果解釋：rd細(xì)胞支持hfmd的主要病原體ca16和ev71的復(fù)制，ca16和ev71均 能在kd細(xì)胞培養(yǎng)中引起特殊的腸道病毒致細(xì)胞病變效應(yīng)（cpe）,表現(xiàn)為細(xì)胞圓 縮、分散、胞漿內(nèi)顆粒增加，最后細(xì)胞自管壁脫落。但相同滴度的ca16和ev71 在rd細(xì)胞中生長(zhǎng)的速度不同，ev71的生長(zhǎng)速度要快于ca16,表現(xiàn)為ev71感染 rd細(xì)胞后出現(xiàn)cpe的時(shí)間比ca16早，ev71接種細(xì)胞后出現(xiàn)cpe很快，但ca16 一般要經(jīng)過2次以上傳代才出現(xiàn)明顯的cpe

51、。若在使用rd細(xì)胞分離的同時(shí)再增加hrp-2細(xì)胞，可提高腸道病毒的分離率 （分離出其它可能致hfmd的病原體，如一些柯薩奇b組病毒）。但ca16和ev71 在hep-2細(xì)胞中均不繁殖。從hfmd患兒的腦脊液、血液、皰疹液等臨床標(biāo)本中分離出病毒有診斷價(jià) 值，但單從咽拭子或糞便中分離到病毒不能確診。從有上述臨床癥狀群患者的咽 拭子或糞便中重復(fù)分離到同一型病毒，且從周圍患同樣疾病者中也檢出相同的病 毒，且病毒分離率遠(yuǎn)高于正常人群，則有診斷的參考價(jià)值。（二）測(cè)定人雙份血清標(biāo)本的中和抗體滴度比較患者急性期血清與恢復(fù)期血清中和抗體滴度，可作為腸道病毒感染的血 清學(xué)診斷方法，最常用的是中和實(shí)驗(yàn)，即用微量板法

52、測(cè)定抗體滴度，是目前人腸 道病毒抗體檢測(cè)的最常用方法，該方法精確且具有型特異性。作為腸道病毒感染的診斷方法之一，可以測(cè)定血清（或腦脊液）中腸道病毒 中和抗體的滴度，通常用急性期血清與恢復(fù)期血清滴度進(jìn)行比較，抗體滴度4倍 或4倍以上增高證明病毒感染。但是，不明顯的腸道病毒感染（隱性感染）也很 常見，所以在評(píng)估檢測(cè)結(jié)果時(shí)就要小心一些。在中和實(shí)驗(yàn)中，一般要用人腸道病 毒參考毒株（即原型株，ev71原型株為brcr株，ca16原型株為g-10株），有 時(shí)同時(shí)（或單獨(dú)）使用臨床分離株會(huì)有助于得到更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。使用對(duì)腸道病毒敏感的細(xì)胞，如rd細(xì)胞。用病毒（血清）稀釋液（下面液 體配制中的c液，可用維持

53、液代替）稀釋血清和制備病毒懸液，因?yàn)槭怯貌《緛?確定血清（csf）中抗體的滴度，所以要使用參考病毒（原型株），但有時(shí)使用 所分離到的毒株（臨床分離株）有助于得到更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，當(dāng)然，分離株的滴度（100 ccid5o/o. 05ml）要事先測(cè)定。中和實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)原理：病毒感染敏感靶細(xì)胞后，引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，出現(xiàn) 致細(xì)胞病變效應(yīng)（cpe），特異性中和抗體與病毒結(jié)合后，可使病毒顆粒失去感染 性，抑制cpe的出現(xiàn)。1.液體配制a液：血清處理液：（100ml中含下列液體）mem85ml3% l-谷氨酰胺lml7. 5%碳酸氫鈉2ml胎牛血清2nd青、鏈霉素（各 10000u/ml）10mlb液：細(xì)胞營養(yǎng)液：（按生長(zhǎng)液配方配制，100ml中含下列液體）mem85ml3% l-谷氨酰胺lml7. 5%碳酸氫鈉2mlhepeslml胎牛血清