2015版藥典沉降菌檢測(cè)操作規(guī)程

1、江蘇業(yè)邦中藥飲片有限公司第5頁(yè)共5頁(yè)題目：潔凈區(qū)（室）沉降菌監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編碼：頒發(fā)部門(mén)：質(zhì)量部起草：日期:2015年 月日修訂日期：年 月曰審核：日期:2015年 月日生效日期：2016年 月 日批準(zhǔn)：日期:2015年 月日發(fā)放份數(shù)：版次：第1版分發(fā)部門(mén)：質(zhì)量部、中心化驗(yàn)室1. 目的：闡述潔凈室空氣中沉降菌檢測(cè)操作規(guī)程，保證藥品質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境 對(duì)產(chǎn)品的污染。2. 范圍：適用丁本公司潔凈區(qū)（室）的沉降菌的監(jiān)測(cè)。3. 責(zé)任：沉降菌檢測(cè)員。4. 內(nèi)容：4.1基本概念：4.1.1菌落:細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡(jiǎn)稱(chēng)CFU. 通常用個(gè)數(shù)表示。4.1.2沉降菌：用GB/T

2、16292-2010提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子， 通過(guò)專(zhuān)門(mén)的培養(yǎng)基在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)。4.1.3沉降菌菌落數(shù)：規(guī)定時(shí)間內(nèi)每個(gè)平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目， 以個(gè)/也表示。4.2測(cè)試原理：本測(cè)試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生 物粒子丁培養(yǎng)基平也，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)， 以平板培養(yǎng)血中的菌落數(shù)來(lái)評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈區(qū)的潔凈度。4.3測(cè)試方法：4.3.1使用的儀器設(shè)備和培養(yǎng)基：高壓消蠹鍋：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。包溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。培養(yǎng)也:一般采用4 90m心15

3、mM®硅酸玻璃培養(yǎng)血。使用前將培養(yǎng)皿置丁121C濕熱滅菌20min。培養(yǎng)基:胰酪大豆豚瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約 45C在無(wú)菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)血，每 也約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入 32C包溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 小時(shí)若培養(yǎng)基平也上確無(wú)菌落生長(zhǎng)即可供采樣用,制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2-8 C 的壞境中存放。4.3.2測(cè)試時(shí)間：對(duì)單向流，如A級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn) 行不少丁 10分鐘后開(kāi)始。對(duì)非單向流，如B級(jí)、C級(jí)、D級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng) 正常運(yùn)行不少丁 30分鐘開(kāi)始。4.3.3采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置：最少

4、采樣點(diǎn)數(shù)目：沉降菌的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定。在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù) 的同時(shí)，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)表 2表1最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積（m）潔凈度等級(jí)A B級(jí)C級(jí)D級(jí)< 102-322> 10- < 20422> 20- < 40822>40-< 1001642> 100- < 20040103注：表中的面積，對(duì)丁單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積，對(duì)丁非單向流潔凈室, 指的是房間面積。表2最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度等級(jí)所需4 90m冊(cè)養(yǎng)血數(shù)（以沉降4h計(jì)）A14B2C2D2采樣點(diǎn)的布置：除受潔凈區(qū)的設(shè)備限制外，取樣點(diǎn)應(yīng)在整個(gè)潔凈區(qū)均勻布置在日常監(jiān)控時(shí)，那些與產(chǎn)品

5、相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣 及設(shè)備附近應(yīng)考慮增加取樣點(diǎn)和取樣次數(shù)（與產(chǎn)品非接觸區(qū)相比，這些區(qū)域應(yīng)視 為關(guān)鍵區(qū)）：人員活動(dòng)頻繁或人員較集中的區(qū)域也應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)，需加強(qiáng)監(jiān)控。取樣點(diǎn)一股布置在趾離地面0.8-1.0m之間或操作平臺(tái)的高度。取樣時(shí)，取樣沒(méi)備會(huì)對(duì)氣流產(chǎn)生干擾，取樣時(shí)應(yīng)避免可能對(duì)氣流組織的干擾。盡量避免在回風(fēng)口附近取樣（距離lm以上）,且測(cè)試人員應(yīng)在取樣口的下風(fēng) 側(cè)，并盡量少走動(dòng)。4.3.4測(cè)試步驟：4.3.4.1 采樣方法：用無(wú)菌容器（如不銹鋼儲(chǔ)槽）將預(yù)先培養(yǎng)的培養(yǎng)血（無(wú)菌平也）帶至待測(cè)區(qū)，將 培養(yǎng)也取出，放置在預(yù)先確定取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)，再

6、將培養(yǎng)皿蓋上，蓋后倒置。檢測(cè)時(shí)記下培養(yǎng)皿打開(kāi)的起始時(shí)間和結(jié)束時(shí) 問(wèn)。4.3.4.2 培養(yǎng)：全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)也倒置丁包溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。32C培養(yǎng)，時(shí)間為72小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染,可每批選定三個(gè)培養(yǎng) 皿做對(duì)照培養(yǎng)。4.3.4.3菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)也上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以 2個(gè)或2個(gè)以上計(jì)數(shù)。4.3.5注意事項(xiàng)：測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。由丁細(xì)菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光丁培養(yǎng)皿背面

7、或正面仔 細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)也邊緣生長(zhǎng)的菌落，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)也的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。測(cè)試狀態(tài):沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈區(qū)的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求， 靜壓差必須控制 在規(guī)定值內(nèi)。沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈區(qū)己經(jīng)過(guò)消蠹。測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，在空調(diào)系統(tǒng)驗(yàn)流時(shí)、長(zhǎng)期停產(chǎn)恢復(fù)生產(chǎn)前、設(shè) 施設(shè)備大修復(fù)產(chǎn)前進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試，在日常監(jiān)測(cè)時(shí)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。測(cè)試人員：測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多丁 2個(gè)人。結(jié)果計(jì)算：用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)也的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的汁算見(jiàn)下式：計(jì)算公式：2 MiM=n式中M為平均菌落數(shù)（CFUMi表示1, 2, 3,n號(hào)平血菌落數(shù)；n表示平也總數(shù)。6.標(biāo)準(zhǔn)：潔凈度級(jí)別沉降菌平均菌落數(shù)（CFU/M）以4h計(jì)A< 1B5C50D1007. 結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)， 則必須對(duì)此區(qū)域先行消蠹，然后重新測(cè) 試兩次，測(cè)試結(jié)果必須合格。8. 偏差糾正一旦發(fā)現(xiàn)空氣微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果超