老年人口腔細(xì)胞角蛋白與口腔扁平苔蘚關(guān)系的臨床研究

1、老年人口腔細(xì)胞角蛋白與口腔扁平苔蘇關(guān)系的臨床研究老年人口腔細(xì)胞角蛋白與口腔扁平苔辭關(guān)系的臨床研究摘要目的探討老年患者口腔ck與olp的相關(guān)性，為臨床 的疾病診斷和制定治療方案提供依據(jù)。方法32例病例樣本來(lái)源于 我院口腔科經(jīng)病理學(xué)檢驗(yàn)確診的olp患者頰部病變組織，為研究組; 另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜組織30例，為對(duì)照組；進(jìn)行樣 本制備和垂直電泳處理，觀察兩組樣本的ck陽(yáng)性情況。結(jié)果研究 組患者ck2、ck4和ck5陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組，而研究組ck10、ck13 和ck14的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組(p0. 05)o結(jié)論口腔細(xì)胞角 蛋白與口腔扁平苔蘇的發(fā)病有一定相關(guān)性，ck2、ck4、c

2、k5的淺表達(dá) 和ck10、ck13、ck14的過表達(dá)，影響上皮細(xì)胞組織的增殖、分裂、 角化等，進(jìn)而影響0lp的發(fā)病。關(guān)鍵詞老年患者；口腔細(xì)胞角蛋白；口腔扁平苔鰥；相關(guān)性中圖分類號(hào)r781.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼b 文章編號(hào)1673-9701 (2013) 25-0149-02老年人體質(zhì)差，易發(fā)生各類口腔感染?？谇槐馄教︺\(0lp)是 一種較為常見的口腔內(nèi)慢性非感染性病變，主要發(fā)病于口腔黏膜，表 現(xiàn)為上皮的過度角化，可累及口腔頰、牙齒、舌等其他部位的黏膜組 織，屬于免疫反應(yīng)性疾病的一類1。目前臨床對(duì)0lp的治療比較困 難，易反復(fù)且有惡性傾向，被世界衛(wèi)生組織(who)列入到癌前狀態(tài) 范疇中。研究表明，細(xì)胞

3、角蛋白(ck)與上皮角質(zhì)細(xì)胞的增殖具有相 關(guān)性2。ck屬于角質(zhì)細(xì)胞中的骨架性蛋白，多于上皮細(xì)胞中表達(dá), 具有組織分化的特異性和高度保守性3 o為探討老年患者口腔ck與 olp的相關(guān)性，給臨床的疾病診斷和制定治療方案提供依據(jù)，早期遏 制癌變，筆者選取我院自2011年612月間收集的olp標(biāo)本共32例， 現(xiàn)報(bào)道如下。1資料與方法1. 1臨床資料32例病例樣木來(lái)源于我院口腔科經(jīng)病理學(xué)檢驗(yàn)確診的olp患者 頰部病變組織，為研究組，其中男18例，女14例；年齡6082歲, 平均(694±53)歲；排除服用激素類藥物患者和有口腔黏膜病變 者。另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜組織30例為對(duì)照組，其

4、中 男15例，女15例，年齡6078歲，平均(662±48)歲。1.2方法1.2.1儀器與試劑采用北京天誠(chéng)活德牛:物技術(shù)有限公司提供的 dyy-12c型號(hào)電泳儀，由同廠提供的dycz-30型夾芯式垂直電泳槽。 紫外可見分光光度計(jì)由上海精密儀器儀表有限公司供應(yīng)，型號(hào) uv-3200pcglpo聚偏二氟乙烯(pvdf)膜由美國(guó)bio-rad伯樂公司生 產(chǎn)。鼠抗人廣譜細(xì)胞角蛋口 (p-ck)單克隆抗體由上海麗臣牛物科技 有限公司供應(yīng)，配有elisa試劑盒。辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠 igg由上海萬(wàn)安生物科技有限公司提供。dab染色試劑盒由北京賽馳 生物科技有限公司提供。1.2.2樣本制備取

5、兩組口腔黏膜標(biāo)本各分為2份，一份行病理 學(xué)iie染色驗(yàn)證確診，一份行樣本制備與檢測(cè)。將口腔黏膜標(biāo)本置入 濃度3 mmol/l的乙二胺四乙酸(edta)無(wú)鈣鎂磷鹽緩沖液中，置于 37°c環(huán)境下靜置2 h后取出，利用顯微外科組織鑲在10x4倍的觀察 視野下分離上皮組織。分離后的上皮組織置入碾缽中，加入液氮研磨 至粉末狀，再加入高鹽緩沖液lml,于4°c環(huán)境下勻漿1 h后，移入 離心管進(jìn)行離心處理10 min,轉(zhuǎn)速5 000 r/min,棄除上清液后，將 沉淀物重懸于低鹽緩沖液中，繼續(xù)混勻攪拌，于4°c環(huán)境下移入離心 管離心處理5 min,轉(zhuǎn)速5000 r/min,再次

6、棄除上清液，將沉淀物以 pbs洗滌5 min,笫3次離心，轉(zhuǎn)速5 000 r/min,棄除上清液，沉 淀物加入細(xì)胞角蛋口溶解液1 ml后于沸水浴中攪拌7 min,冷卻后 再行離心，離心后上清液用紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白定量，蛋白濃度 為 2. 5 u g/u lo1.2.3電泳 進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳，凝膠上的樣孔均勻 分為兩份，各放入5個(gè)樣本，兩份樣本一一對(duì)應(yīng)。兩份凝膠一份使用 考馬斯亮藍(lán)r250進(jìn)行染色處理后觀察色帶變化情況，另一份應(yīng)用 western雜交電泳處理，證實(shí)獲得蛋口條帶屬于角蛋口。各樣品槽內(nèi) 加樣，濃縮膠5%,分離膠12%。電泳后將凝膠切取一半移至pvdf膜 上，再使用封閉液

7、封閉好，于4°c環(huán)境下靜置過夜，次日加入抗ck 抗體，靜置于4°c環(huán)境下過度，再以pbst液洗滌pvdf膜，反復(fù)3次 后，加入辣根過氧化物酶，二抗標(biāo)記，置于37°c環(huán)境下行2h振蕩， 取出后用pbst洗滌pvdf膜，反復(fù)3次，參照dab染色試劑盒的相關(guān) 說明進(jìn)行顯色處理。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法獲得數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包spss15. 0中并建立數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行數(shù)據(jù) 分析，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，p<0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果分別對(duì)研究組和對(duì)照組檢驗(yàn)樣木中ck陽(yáng)性率進(jìn)行比較，兩組計(jì) 數(shù)資料ck2、ck4和ck5、ck10、ck13和ck14分別進(jìn)行卡方檢驗(yàn)， 見表1

8、,研究組患者ck2、ck4和ck5陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組，而研 究組ck10、ck13和ck14的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義(p<0. 05)o3討論0lp的病理改變與ck的變化密切相關(guān)。李寧等4研究指出，基 底層細(xì)胞凋亡過程中角質(zhì)形成細(xì)胞形成嗜伊紅小體，尤以olp基底膜 破壞區(qū)域、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域、上皮t細(xì)胞侵入?yún)^(qū)域等更為明顯。基 底細(xì)胞可通過將抗原提呈給細(xì)胞毒性t細(xì)胞促成角質(zhì)形成細(xì)胞形成 免疫損傷的靶細(xì)胞，從而降低黏膜上皮的自我修復(fù)能力，促進(jìn)olp的 形成及進(jìn)展。ck主要于上皮組織細(xì)胞表達(dá)，屬于細(xì)胞中間絲的主要 成分，研究認(rèn)為其具有高度的組織和細(xì)胞特異性5。ck2是二

9、型細(xì)胞角蛋口，簡(jiǎn)潔等6報(bào)道口腔黏膜中的角化上皮 和非角化上皮一般情況下較少出現(xiàn)在ck2的表達(dá)。presland等7研 究0lp中未發(fā)現(xiàn)ck2的表達(dá)。在本組研究中，研究組的ck2無(wú)表達(dá), 對(duì)照組的ck2表達(dá)陽(yáng)性率僅20%,與和關(guān)報(bào)道和符，提示在正?？谇?黏膜組織中可能存在不穩(wěn)定ck2,但0lp可能引起dk2的表達(dá)減少甚 至是消失。ck4屬于上皮分層和非角化標(biāo)志，一般和ck13形成角蛋 白對(duì)，于口腔上皮組織中呈現(xiàn)。ck5屬于基底層標(biāo)志，一般是與ck14 呈現(xiàn)角蛋白對(duì)，二者可形成彈性纖維網(wǎng)，從而適應(yīng)細(xì)胞分裂以及組織 形成變化，為細(xì)胞的形變提供環(huán)境。在本組研究中，ck4、ck5在研 究組中的表達(dá)均極少

10、，在對(duì)照組中表達(dá)相對(duì)多，與ck2的表達(dá)相似， 筆者認(rèn)為可能是olp的進(jìn)展引起ck4和ck5的減少或消失°ck2、ck4、 ck5在olp中表達(dá)不足可作為臨床研究的一種現(xiàn)象，但其消失過程及 誘因等仍需進(jìn)一步的臨床深入研究。<!endprint><!startprint>ck10、ck13 和 ck14 是目前對(duì) olp 研究中較為關(guān)注的兒種角蛋白，毛良軍8直接對(duì)該三種ck的顯微鏡下表現(xiàn)進(jìn) 行報(bào)道，并指出該三種ck表達(dá)的變化與olp病灶的角化、增殖和分 化有關(guān)。ck1o作為角化標(biāo)志，在角化復(fù)層的鱗狀上皮基底層中表達(dá)， 在細(xì)胞角化的過程中產(chǎn)生變化。ck1o過度表達(dá)可

11、能會(huì)致使上皮細(xì)胞 的角化和分化，在木組研究中研究組dk1o陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組， 提示ck1o在olp中存在過度表達(dá)，可能也是引發(fā)olp發(fā)病及進(jìn)展的 因素之一。ck13屬于細(xì)胞分層與分化的標(biāo)志，主要于頰黏膜上皮的 基底組織上層表達(dá)，臨床可通過ck13的表達(dá)了解上皮組織的分化與 成熟情況。在本組研究屮，研究組ck13陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，提 示ck13的表達(dá)過度可能影響olp上皮細(xì)胞的分化與分層。ck14屬于 基底層的標(biāo)志，主要集中表現(xiàn)在基底層細(xì)胞中，由于基底層細(xì)胞具有 較高的分裂與增殖能力，因而ck14的變化可表達(dá)細(xì)胞分裂增殖的能 力與程度。在本組中研究組ck14陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，提示ck

12、14 的過度表達(dá)可能影響到olp上皮細(xì)胞加強(qiáng)增殖與分裂，從而引發(fā)病變 或加重病情?？傄铱谇患?xì)胞角蛋口與口腔扁平苔薛的發(fā)病有一定相關(guān)性,ck2、 ck4、ck5的淺表達(dá)和ck1o、ck13、ck14的過表達(dá)，影響上皮細(xì)胞組 織的增殖、分裂、角化等，進(jìn)而影響olp的發(fā)病。當(dāng)然，ck與olp 相關(guān)性之間的病理因素仍需要進(jìn)一步研究獲得。參考文獻(xiàn)1田燕，劉瑋，吳延芳，等.細(xì)胞分化標(biāo)志分子在扁平苔蘇皮 損中異常表達(dá)的研究j臨床皮膚科雜志,2010, 31 (8)： 448-450.2汪群，諸煥穎，孫紅英.人口腔扁平苔蘇角質(zhì)形成細(xì)胞的體 外培養(yǎng)及生物學(xué)鑒定j復(fù)旦學(xué)報(bào)，2007, 34 (5)： 776-778.3毛良軍，古亞蘭，聶敏海，等.細(xì)胞角蛋口 10、13、14和19在olp中的表達(dá)研究j臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2007, 23 (12)： 710-712.4 李寧，翦新春.口腔扁平苔蘇屮細(xì)胞角蛋白19的表達(dá)及意義 j臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008, 24 (5)： 307-309.5 于世鳳.口腔組織病理學(xué)m第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：200-202.6 簡(jiǎn)潔，聶敏海，古亞蘭，等.細(xì)胞角蛋白在口腔扁平苔薛中 表達(dá)的電泳研究d瀘州醫(yī)學(xué)院，2008： 1-32.7 presland rb, dal