生物制品及其質(zhì)量管理

1、 生物制生物制 1主要內(nèi)容主要內(nèi)容 一、生物制品定義一、生物制品定義二、生物制品種類二、生物制品種類三、生物制品的基本屬性和特點三、生物制品的基本屬性和特點四、生物制品的管理四、生物制品的管理五、五、生物制品生物制品GMP現(xiàn)場檢查要點現(xiàn)場檢查要點2一、生物制品定義一、生物制品定義 生物制品生物制品( (Biological Products)是應用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備，用于疾病預防、治療和診斷的藥品。3二、生物制品分類二、生物制品分類 按生物制品的組成和性質(zhì)可分為按生物制品的組成和性質(zhì)可分為:

2、:疫苗（疫苗（VaccinesVaccines）抗毒素及免疫血清抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera)(Antitoxin and Antisera)血液制品（血液制品（Blood ProductsBlood Products）細胞因子和重組細胞因子和重組DNADNA產(chǎn)品（產(chǎn)品（Cytokines and Cytokines and Recombinant DNA ProductsRecombinant DNA Products）診斷制品診斷制品(Diagnostic Reagents)(Diagnostic Reagents)其他制品其他制品4細菌類疫苗細菌類疫苗

3、由細菌、螺旋體或其衍生物制備而成，包括：由細菌、螺旋體或其衍生物制備而成，包括： 減毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫減毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫疫苗等疫苗等 滅活疫苗：霍亂菌體疫苗、鉤端螺旋體疫苗滅活疫苗：霍亂菌體疫苗、鉤端螺旋體疫苗等等 亞單位疫苗：腦膜炎球菌多糖疫苗、傷寒亞單位疫苗：腦膜炎球菌多糖疫苗、傷寒ViVi多糖疫苗等多糖疫苗等 重組重組DNADNA疫苗：重組瘧疾疫苗、重組幽門螺疫苗：重組瘧疾疫苗、重組幽門螺桿菌疫苗等桿菌疫苗等5病毒類疫苗病毒類疫苗 由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制備由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制備而成，包括：而成，包括：減毒活疫苗：乙型腦炎

4、減毒疫苗、麻疹疫苗、減毒活疫苗：乙型腦炎減毒疫苗、麻疹疫苗、風疹疫苗、風疹疫苗、OPVOPV等等滅活疫苗：乙型腦炎滅活疫苗、出血熱疫苗、滅活疫苗：乙型腦炎滅活疫苗、出血熱疫苗、狂犬疫苗等狂犬疫苗等亞單位疫苗：重組乙肝疫苗等亞單位疫苗：重組乙肝疫苗等重組重組DNADNA疫苗：重組乙肝疫苗等疫苗：重組乙肝疫苗等6聯(lián)合疫苗聯(lián)合疫苗 由兩種或兩種以上疫苗抗原原液配制而成由兩種或兩種以上疫苗抗原原液配制而成的具有多種免疫原性的疫苗。的具有多種免疫原性的疫苗。 例如：例如： 吸附百白破聯(lián)合疫苗吸附百白破聯(lián)合疫苗 麻風腮三聯(lián)疫苗麻風腮三聯(lián)疫苗 7抗毒素及免疫血清抗毒素及免疫血清 由特定抗原免疫的動物血清而制

5、備由特定抗原免疫的動物血清而制備 主要產(chǎn)品：主要產(chǎn)品： 白喉抗毒素白喉抗毒素 破傷風抗毒素破傷風抗毒素 抗狂犬病血清等抗狂犬病血清等8血液制品血液制品 由健康人的血漿或特異免疫人血漿分由健康人的血漿或特異免疫人血漿分 離、提純或由重組技術(shù)制成的血漿蛋離、提純或由重組技術(shù)制成的血漿蛋 白組分或血細胞組分制品白組分或血細胞組分制品 。 主要產(chǎn)品：主要產(chǎn)品：人血白蛋白人血白蛋白 人免疫球蛋白人免疫球蛋白 人凝血因子等人凝血因子等 9細胞因子和重組細胞因子和重組DNADNA產(chǎn)品產(chǎn)品 由健康人血細胞增值、分離、提純或由健康人血細胞增值、分離、提純或 由重組技術(shù)制成的多肽類或蛋白類制由重組技術(shù)制成的多肽類

6、或蛋白類制 劑。劑。 主要產(chǎn)品：干擾素主要產(chǎn)品：干擾素(IFN)(IFN) 白細胞介素白細胞介素(IL)(IL) 集落刺激因子集落刺激因子(CSF) (CSF) 紅細胞生成素紅細胞生成素 (EPO) (EPO)等等 10診斷制品診斷制品 由特定抗原、抗體或有關(guān)生由特定抗原、抗體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的用于體外診斷疾病的試劑或試物物質(zhì)制成的用于體外診斷疾病的試劑或試劑盒，如傷寒、副傷寒等細菌的診斷菌液，劑盒，如傷寒、副傷寒等細菌的診斷菌液，沙門氏菌屬診斷血清，沙門氏菌屬診斷血清，HBsAgHBsAg診斷試劑盒等。診斷試劑盒等。 由抗原制成的用于體內(nèi)診斷由抗原制成的用于體內(nèi)診斷疾病的試劑，如卡介苗純蛋

7、白衍生物（疾病的試劑，如卡介苗純蛋白衍生物（BCG-BCG-PPDPPD）、錫克試劑毒素、標記的單克隆抗體等。）、錫克試劑毒素、標記的單克隆抗體等。 11其他制品其他制品 由有關(guān)生物材料或特定方法制成的，由有關(guān)生物材料或特定方法制成的，上述上述5 5類產(chǎn)品以外的生物制品，如變態(tài)類產(chǎn)品以外的生物制品，如變態(tài)反應原、微生態(tài)制劑、重組反應原、微生態(tài)制劑、重組DNADNA產(chǎn)品、產(chǎn)品、基因治療產(chǎn)品、單克隆抗體制劑、某基因治療產(chǎn)品、單克隆抗體制劑、某些細胞治療制劑等。些細胞治療制劑等。12生物制品按用途分類生物制品按用途分類 疫苗疫苗、類毒素、類毒素、被動免疫制劑被動免疫制劑 免疫學診斷試劑、基因診斷試劑

8、、免疫學診斷試劑、基因診斷試劑、 生化試劑生化試劑 血液制劑、細胞因子制劑、酶和激素、血液制劑、細胞因子制劑、酶和激素、 特異性抗體特異性抗體、非特異性免疫治療制劑、非特異性免疫治療制劑、 基因及細胞治療制品等基因及細胞治療制品等 13預防類生物制品預防類生物制品減毒活疫苗與滅活疫苗的比較減毒活疫苗與滅活疫苗的比較減毒活疫苗減毒活疫苗滅活疫苗滅活疫苗1.注射一次即可有效注射一次即可有效2.接種后似自然感染，接種后似自然感染，形成完整免疫形成完整免疫3.在一定范圍內(nèi)疫苗病在一定范圍內(nèi)疫苗病毒可排斥野毒毒可排斥野毒1.可多種抗原混合制成多價疫可多種抗原混合制成多價疫苗苗2.抗原性穩(wěn)定抗原性穩(wěn)定3.

9、經(jīng)過滅活處理不會污染其它經(jīng)過滅活處理不會污染其它病原病原4.可提純抗原，加入佐劑增加可提純抗原，加入佐劑增加免疫效果免疫效果1.抗原不穩(wěn)定，滅活即抗原不穩(wěn)定，滅活即失效失效2.易污染其它病原易污染其它病原1.一般需注射一般需注射23次才明顯有效次才明顯有效2.一般僅產(chǎn)生體液免疫一般僅產(chǎn)生體液免疫3.抗原要求量大，制造工藝較抗原要求量大，制造工藝較繁瑣繁瑣14三、生物制品的基本屬性和特點三、生物制品的基本屬性和特點（一）（一） 其起始材料均為生物活性物質(zhì)；生物制品生產(chǎn)加工全過程是生物學過程，是無菌操作過程；有些生物制品的生產(chǎn)過程是有毒或有菌的過程;生物制品多為蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)，分子量較大，并具

10、有復雜的分子結(jié)構(gòu), 較不穩(wěn)定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破壞。15三、生物制品的基本屬性和特點三、生物制品的基本屬性和特點（二）（二）其質(zhì)量控制和質(zhì)量檢定是采用生物學分析方法，其效價或生物活性檢定有其變異性；生物制品原材料、中間品、成品、運輸、貯存、甚至使用保持在“冷鏈”系統(tǒng)中；特別是預防制品使用對象不是病人，而是健康人群；生物制品的質(zhì)量控制實行生產(chǎn)全過程監(jiān)控; 生產(chǎn)現(xiàn)場檢查時要充分考慮這些特點16四、生物制品的管理生物制品國家管理生物制品國家管理6 6項基本職能項基本職能 1完整的疫苗和生物制品審批程序和審批標準的法規(guī)文件； 2審批結(jié)論要以實驗和臨床試驗數(shù)據(jù)為依據(jù)； 3國家質(zhì)控當局對疫

11、苗和生物制品出廠銷售實行國家批簽發(fā)制度； 4要有對疫苗和生物制品進行質(zhì)量評價的法定的實驗檢定機構(gòu)和實驗實施； 5對生物制品生產(chǎn)企業(yè)實施GMP定期檢查； 6對生物制品有效性和不良反應進行上市后檢測。17生物制品實行國家批簽發(fā)生物制品實行國家批簽發(fā) 藥品管理法實施辦法中規(guī)定，國家對所規(guī)定的生物制品實行國家批簽發(fā)制度。 國家批簽發(fā)國家藥品監(jiān)督管理部門授權(quán)國家藥品檢定機構(gòu)，對所規(guī)定的生物制品，在出廠前或進口時，按批進行審查和簽發(fā)，凡審查或檢定不合格的不允許銷售或者進口。18生物制品國家批簽發(fā)分為三種類型生物制品國家批簽發(fā)分為三種類型一、僅對某種制品每批的批記錄摘要進行審查，符合要求發(fā)給批簽發(fā)證；二、審

12、查批記錄摘要 對部分批次制品進行抽檢檢定、審查和檢定符合要求發(fā)給批簽發(fā)證；三、審查批記錄摘要 批批檢定，審查和批批檢定符合要求發(fā)給批簽發(fā)證。19菌種篩選#種子批的#建立及檢定菌種接種#原液合并半成品*配置殺 菌原液收獲#擴大培養(yǎng)原液保存分 裝*包 裝檢 定圖圖- 細菌疫苗工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖細菌疫苗工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖10 000 級100 000 級20毒種篩選#種子批的#建立及檢定毒種接種#培養(yǎng)細胞原液合并半成品*配置病毒滅活病毒的收獲過濾 #擴大細胞培養(yǎng)病毒原液保存分 裝*包 裝檢 定圖圖- 病毒疫苗工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖病毒疫苗工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖原代細胞

13、的制備或傳代細胞復蘇減毒活疫苗10 000 級100 000 級21細菌和病毒類疫苗質(zhì)控要點細菌和病毒類疫苗質(zhì)控要點 1所有原輔材料符合中國藥典或中國生物制品主要原輔料質(zhì)量標準； 2采用強毒菌株（鼠疫、霍亂、炭疽等）、芽胞菌和強毒病毒株，應有專用生產(chǎn)操作間，專用生產(chǎn)設備及隔離實施，操作人員應有安全防護設施； 3所用生產(chǎn)的菌株或病毒株，要建立原始種子批、主代種子批、生產(chǎn)種子批三級種子批系統(tǒng)；病毒疫苗生產(chǎn)用細胞也要建立上述三級細胞庫系統(tǒng)； 4菌苗及疫苗原液、中間品合并、分離、純化等每道加工工序后均要做無菌試驗和鑒別試驗；22細菌和病毒類疫苗質(zhì)控要點細菌和病毒類疫苗質(zhì)控要點 5細菌類及病毒類的滅活疫

14、苗，加入滅活劑后，必須要做活菌或活毒試驗，確保徹底滅活； 6原材料、半成品及成品，應按現(xiàn)行中國生物制品規(guī)程相關(guān)標準進行檢定； 7對制品的安全、效價或免疫力試驗等項目檢定所用實驗動物應符合清潔級； 8從起始材料直至使用，全過程，必須無菌操作，制品28保存； 9生物制品生產(chǎn)用水均為注射用水。23血漿合并病毒滅活精 洗滅菌除熱原低溫乙醇法超濾濃縮入 庫外包材血漿內(nèi)包材圖圖- 血液制品工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖血液制品工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖除菌過濾*分 裝*包 裝粗 洗10 000 級100 000 級24血液制品質(zhì)量控制要點血液制品質(zhì)量控制要點 1生產(chǎn)用具，經(jīng)過嚴格清洗、去熱原處理、滅菌處理

15、； 2原料血漿要經(jīng)過乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、ABO定型診斷試劑檢測合格，-20以下保存； 3生產(chǎn)工藝采用低溫乙醇法分部提取各組份；工藝中應有去除/滅活病毒工藝步驟； 4原液、半成品、成品符合現(xiàn)行中國生物制品規(guī)程相應標準； 5所用血源檢測和成品檢測的乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等檢測的試劑均為國家批批檢定試劑。25細胞復蘇擴大培養(yǎng)大罐培養(yǎng)粗純擴大培養(yǎng)發(fā)酵粗純接種滅菌除熱原精洗粗洗內(nèi)包材菌種細胞種子原液除菌過濾除菌過濾配制及除菌過濾分裝包裝入庫外包裝圖圖- 重組產(chǎn)品工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖重組產(chǎn)品工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖原核表達真核表達10 000 級100 000 級26重組重組DNADNA產(chǎn)

16、品質(zhì)量控制要點產(chǎn)品質(zhì)量控制要點 1生產(chǎn)用工程菌株或工程細胞株要建立原始種子批、主代種子批、生產(chǎn)種子批系統(tǒng)，定期進行質(zhì)粒穩(wěn)定性檢查； 2發(fā)酵用培養(yǎng)基應不含抗生素，生產(chǎn)用細胞培養(yǎng)液應不含血清和抗生素； 3發(fā)酵培養(yǎng)過程中應根據(jù)工藝要求控制其培養(yǎng)溫度、pH、溶氧、輔料及培養(yǎng)時間； 4根據(jù)其工藝要求，通過初步純化和高度純化達到規(guī)定質(zhì)量要求； 5重組產(chǎn)品的原液，應做：蛋白質(zhì)含量、比活性、純度、效價、SDS-PAGE法、高效液相色譜法、分子量、外源性DNA殘留含量、宿主蛋白殘留含量、等電點、紫外光譜肽圖（至少每年1次），N末端氨基酸序列（至少每年測一次）；27重組重組DNADNA產(chǎn)品質(zhì)量控制要點產(chǎn)品質(zhì)量控制

17、要點 6半成品及成品應按現(xiàn)行中國生物制品規(guī)程相關(guān)標準進行檢定； 7工程菌株應進行菌落形態(tài)、革蘭氏染色、抗生素的抗性、電鏡檢查、生化反應、表達量、質(zhì)粒酶切圖譜等檢查； 8工程細胞應進行外源因子（細菌、真菌、支原體、病毒）檢查、致病性實驗、細胞鑒別試驗、表達量測定等； 9重組DNA產(chǎn)品生產(chǎn)，必須按其生產(chǎn)所用工程菌株或工程細胞株、將原核細胞系與真核細胞系徹底分離分別進行生產(chǎn)。28菌種篩選#組裝圖圖-5 酶聯(lián)免疫診斷試劑工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖酶聯(lián)免疫診斷試劑工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖抗原包被微孔板酶標記抗體其它組分陽性對照*100 000 級隔離區(qū)29酶聯(lián)免疫診斷試劑質(zhì)控要點酶聯(lián)免疫診斷試劑質(zhì)

18、控要點 1所用抗原或抗體的純度、帶型、效價及穩(wěn)定性等符合現(xiàn)行國家標準，來源要固定； 2辣根過氧化物酶R2不應低于3.0； 3微孔板CV（%）不大于10%； 4選擇最佳濃度進行抗原或抗體包被，選擇最佳濃度進行酶標記 5酶標記后抗體加入有關(guān)保護劑，低溫保存； 6應有陽性血清處理、分裝的隔離操作間。30菌種篩選#組裝圖圖- PCR診斷試劑工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖診斷試劑工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖PCR組份PCR組份PCR組份陽性對照*100 000 級隔離區(qū)31PCRPCR診斷試劑質(zhì)控要點診斷試劑質(zhì)控要點 1應有陽性血清處理、分裝的隔離操作間； 2PCR試劑的生產(chǎn)區(qū)與檢定區(qū)嚴格分開； 3PCR

19、引物設計要合理，引物合成要有固定場所及專用設備；純度達到現(xiàn)行國家標準； 4DNA聚合酶活性及穩(wěn)定性達現(xiàn)行國家標準并有固定來源； 5PCR檢測方法要可靠，操作人員經(jīng)專門培訓。32五、生物制品五、生物制品GMPGMP檢查要點檢查要點保護環(huán)境和操作者防止交叉污染，嚴格分區(qū)，獨立空調(diào)局部負壓盡可能一個產(chǎn)品、一個車間徹底消毒和清場嚴格動物使用及動物管理環(huán)境溫度331強毒與弱毒“強毒”系指生物制品生產(chǎn)及檢定用細菌株及病毒株，其致病力強，傳染性強，感染的機率高，感染后癥狀較重，可危及生命健康，甚至引起傳染病爆發(fā)流行的細菌菌株及病毒株?！叭醵尽毕抵干镏破飞a(chǎn)及檢定用細菌株及病毒株，經(jīng)過天然或人工改造方法，去

20、除或封閉其毒力因子，使其致病力減弱，一般不引起感染或發(fā)病的細菌菌株及病毒株。強毒株與弱毒株，不允許混放在一起，其生產(chǎn)及檢定操作場所須嚴格分開，并有專用設備。生物制品生物制品GMPGMP認證檢查要點認證檢查要點342死毒與活毒“活毒”是制備滅活疫苗的第一階段或減毒活疫苗生產(chǎn)時，將生產(chǎn)用細菌或病毒株進行大規(guī)模培養(yǎng)制備，其生產(chǎn)過程和生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備、器材含有大量活的細菌或活的病毒生物體，稱之為“活毒”?！八蓝尽笔侵苽錅缁钜呙鐣r，第一階段生產(chǎn)出大量活細菌或或病毒后，到第二階段，對活生物體加入一定量甲醛或適宜滅活劑，將全部細菌或病毒殺死，稱之為“死毒”?！盎疃尽迸c“死毒”的生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備及器材，須

21、嚴格分開。353“脫毒前”與“脫毒后”“脫毒前”系指破傷風梭狀菌、白喉桿菌繁殖培養(yǎng)時，生產(chǎn)大量破傷風毒素及白喉毒素，對人體有致病性，這一階段為“脫毒前”?！懊摱竞蟆毕抵付舅刂屑尤胍欢考兹┗蜻m宜脫毒劑，將毒素去掉毒性，不再具有致病性，仍保留其抗原性和免疫原性，稱之為“脫毒后”?！懊摱厩啊迸c“脫毒后”的生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備及器材須嚴格分開。364血液制品、抗血清、人和動物組織制備的制品，其生產(chǎn)所用的原材料，為人血漿、動物免疫血清、人和動物器官、組織及組織液等，均含有大量的人和動物的異種蛋白質(zhì)或細胞活性物質(zhì)，具有較強的致敏原物質(zhì)，不經(jīng)過相應處理和加工，可致人體過敏反應或血清病。因此，血液制品、抗血清

22、、人和動物組織生產(chǎn)制備制品時，須有專用生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備及器材，不可與其他生物制品混用。375芽孢菌制品，系用炭疽桿菌、破傷風梭菌、肉毒梭菌等含有芽孢菌來生產(chǎn)制備的制品，芽孢菌是微生物對外周環(huán)境抵抗力最強的生命單位。芽孢菌在自然界可存活數(shù)十年及百年之久，100可耐受2小時以上，在70酒精中存活20年，低溫和干燥對其毫無作用。生產(chǎn)芽孢菌制品的生產(chǎn)場所、生產(chǎn)設備和器材須專用，與其他制品生產(chǎn)嚴格分開。386卡介苗與結(jié)核菌制品生產(chǎn)場所，必須嚴格分開，其生產(chǎn)設備、器材、生產(chǎn)用菌種必須專用，不能混用。1930年德國Lubeck地方，給251名嬰兒誤用結(jié)核菌液，而不是減毒的卡介苗，造成72名嬰兒死亡，病死率為28.68，有142名嬰兒感染結(jié)核，感染率為56.5，稱之為“Lubeck疫苗接種事故”。397衛(wèi)生部1985年衛(wèi)藥第11號文中國醫(yī)學微生物菌毒種保藏管理辦法，規(guī)定一類、二類菌種和毒種為“強毒微生物”。一類：鼠疫桿菌、霍亂弧菌、天花病毒（已消滅）、黃熱病毒、馬腦炎病毒、Lassa病毒、Mstburg病毒、Ebola病毒、猴皰疹病毒等。二類：布氏菌、炭疽桿菌、肉毒梭菌、麻風桿菌、結(jié)核分枝桿菌等?？袢《荆ń侄荆?、流行性出血熱病毒、登革熱病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病