DNA文庫(kù)的構(gòu)建和目的基因

1、1會(huì)計(jì)學(xué)DNA文庫(kù)的構(gòu)建和目的基因文庫(kù)的構(gòu)建和目的基因限制性限制性內(nèi)切酶內(nèi)切酶克隆、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、鑒定克隆、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、鑒定基因組基因組DNA基因文庫(kù)基因文庫(kù)基因組DNA文庫(kù)限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶基因組DNA基因重組轉(zhuǎn)化細(xì)菌體外包裝cDNA文庫(kù)的構(gòu)建：基因重組反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDNAcDNA1) 按大小對(duì)按大小對(duì)mRNA進(jìn)行分級(jí)分離進(jìn)行分級(jí)分離基因組基因組DNADNA文庫(kù)文庫(kù)cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)二、基因組DNA文庫(kù)與cDNA文庫(kù)的比較基因組基因組DNA文庫(kù)文庫(kù)c cDNA文庫(kù)文庫(kù)1 表型篩選法表型篩選法(1)(1)抗藥性篩選抗藥性篩選: :這是利用載體這是利用載體DNADN

2、A分子上分子上的抗藥性選擇標(biāo)記進(jìn)行的篩選方法。的抗藥性選擇標(biāo)記進(jìn)行的篩選方法。一、基因文庫(kù)的篩選抗藥性標(biāo)記選擇抗藥性標(biāo)記選擇( (插入失活法插入失活法) ) (3)(3)顯色反應(yīng)選擇法顯色反應(yīng)選擇法(-(-互補(bǔ)法互補(bǔ)法) ) 將含有將含有-半乳糖苷酶基因（半乳糖苷酶基因（LacZLacZ）的調(diào)控序）的調(diào)控序列和氨基端（列和氨基端（N N端）端）146146個(gè)氨基酸編碼序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)個(gè)氨基酸編碼序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至可編碼化至可編碼-半乳糖苷酶羧基端（半乳糖苷酶羧基端（C C端）部分序列端）部分序列的宿主細(xì)胞中，可使各自無(wú)活性的片段實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)，的宿主細(xì)胞中，可使各自無(wú)活性的片段實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)，融為一體，產(chǎn)生具有酶學(xué)活性的蛋白，從而使轉(zhuǎn)化融為一體，產(chǎn)生具有酶學(xué)活性的蛋白，從而使轉(zhuǎn)化的宿主菌在含有的宿主菌在含有IPTG/X-gal(IPTG/X-gal(異丙基異丙基-D-D-硫代半硫代半乳糖苷乳糖苷/5-/5-溴溴-4-4-氯氯-3-3-吲哚吲哚-D-D-硫代半乳糖苷硫代半乳糖苷) )的的培養(yǎng)基上產(chǎn)生藍(lán)色菌落，這種現(xiàn)象就稱為培養(yǎng)基上產(chǎn)生藍(lán)色菌落，這種現(xiàn)象就稱為-互補(bǔ)?；パa(bǔ)。 互互補(bǔ)補(bǔ)的的檢檢測(cè)測(cè)或或- -半半乳乳糖糖苷苷酶酶法法凝膠電泳檢測(cè)加加樣樣孔孔DNA Marker 空質(zhì)?？召|(zhì)粒 重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒 重組質(zhì)粒酶切重組