醫(yī)學微生物學實驗

1、.襖羈蒆蝕蝿羀蕿蒃肈罿羋蠆羄羈莁蒁袀肈蒃蚇螆肇膂蒀螞肆芅蚅肁肅蕆薈羇肄蕿螃袃肅艿薆蝿肂莁螂蚅肂蒄薅羃膁膃螀衿膀芆薃螅腿莈螈螁膈薀蟻肀膇芀蒄羆膆莂蠆袂膆蒅蒂螈膅膄蚈蚄芄芆蒁羂芃荿蚆袈節(jié)薁葿襖芁芁螄螀芀莃薇聿芀蒅螃羅艿薈薅袁羋芇螁螇羄莀薄蚃羄蒂蝿羂羃膂薂羈羂莄袇襖羈蒆蝕蝿羀蕿蒃肈罿羋蠆羄羈莁蒁袀肈蒃蚇螆肇膂蒀螞肆芅蚅肁肅蕆薈羇肄蕿螃袃肅艿薆蝿肂莁螂蚅肂蒄薅羃膁膃螀衿膀芆薃螅腿莈螈螁膈薀蟻肀膇芀蒄羆膆莂蠆袂膆蒅蒂螈膅膄蚈蚄芄芆蒁羂芃荿蚆袈節(jié)薁葿襖芁芁螄螀芀莃薇聿芀蒅螃羅艿薈薅袁羋芇螁螇羄莀薄蚃羄蒂蝿羂羃膂薂羈羂莄袇襖羈蒆蝕蝿羀蕿蒃肈罿羋蠆羄羈莁蒁袀肈蒃蚇螆肇膂蒀螞肆芅蚅肁肅蕆薈羇肄蕿螃袃肅艿薆蝿肂莁

2、螂蚅肂蒄薅羃膁膃螀衿膀芆薃螅腿莈螈螁膈薀蟻肀膇芀蒄羆膆莂蠆袂膆蒅蒂螈膅膄蚈蚄芄芆蒁羂芃荿蚆袈節(jié)薁葿襖芁芁螄螀芀莃薇聿芀蒅螃羅艿薈薅袁羋芇螁螇羄莀薄蚃羄蒂蝿羂羃膂薂羈羂莄袇襖羈蒆蝕蝿羀蕿蒃肈罿羋蠆羄羈莁蒁袀肈蒃蚇螆肇膂蒀螞肆芅蚅肁肅蕆薈羇肄蕿螃袃肅艿薆蝿肂莁螂蚅肂蒄薅羃膁膃螀衿膀芆薃螅腿莈螈螁膈薀蟻肀膇芀蒄羆膆莂蠆袂膆蒅蒂螈膅膄蚈蚄芄芆蒁羂芃荿蚆袈節(jié)薁葿襖芁芁螄螀芀莃薇聿芀蒅螃羅艿薈薅袁羋芇螁螇羄莀 醫(yī)學微生物學實驗五教案課程名稱：醫(yī)學微生物學實驗實驗內(nèi)容：1. 其他微生物的形態(tài)觀察 (閱片) 自閱片：鉤 體 示教片：支原體菌落、梅毒螺旋體、 沙眼衣原體包涵體、恙蟲病立克次體2. 鉤體顯微凝集試

3、驗 (示教)3. 變形桿菌動力觀察 (自做)授課對象：本科臨床、口腔、麻醉、影像、急診、五官、腫瘤；船本臨床、麻醉等實驗方式：講授自做實驗教材：一、實驗目的與要求：1、熟悉鉤端螺旋體、支原體菌落、梅毒螺旋體、沙眼衣原體包涵體、恙蟲病立克次體形態(tài)與染色性；2、熟悉鉤體的顯微鏡凝集實驗原理及觀察方法。二、實驗內(nèi)容及時間分配（分鐘）：1講 授 30 min2其他微生物的形態(tài)觀察（閱片） 40 min 自閱片：鉤體 示教片：支原體菌落、梅毒螺旋體、沙眼衣原體包涵體、恙蟲病立克次體3鉤體顯微鏡凝集試驗（示教） 20 min4變形桿菌動力觀察 30 min5小結(jié) 10 min三、重點：鉤體顯微鏡凝集實驗原

4、理四、思考題1、支原體與細菌L型的鑒別要點有哪些？2、原體與始體的區(qū)別。五、作業(yè)： 繪示教圖醫(yī)學微生物學實驗五講稿一 、支原體：支原體(Mycoplasma)是一類沒有細胞壁，呈高度多形態(tài)性，能通過0.45um濾菌器,胞膜富含固醇，含DNA與RNA，呈二分裂繁殖的原核細胞型微生物；支原體是目前所知能在無生命培養(yǎng)基中繁殖的最小的原核細胞型微生物。支原體對營養(yǎng)物質(zhì)的要求高于一般細菌，除基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)外還需加入10%20%人或動物血清以提供膽固醇與其它長鏈脂肪酸。大部分支原體繁殖速度比細菌慢，在合適環(huán)境中孵育，約34h繁殖一代，在瓊脂含量較少的固體培養(yǎng)基上，27d長出直徑約10600m的典型的“荷包蛋

5、樣”菌落。低倍鏡下觀察菌落呈圓形，中心致密隆起，深入瓊脂，外周由一層薄的透明顆粒包繞。支原體菌落，Diense染色，×100支原體有許多特性與細菌L型相似，如無細胞壁、呈多形性、能通過濾菌器、對低滲敏感、“油煎蛋”樣菌落，但細菌L型在無抗生素等誘導因素作用下易返祖為原菌，支原體則在遺傳上與細菌無關(guān)。二、衣原體衣原體：嚴格真核細胞內(nèi)寄生(與螺旋體區(qū)分開來)，具有獨特發(fā)育周期(與立克次體區(qū)分開來)，并能通過細菌濾器(與細菌區(qū)分開來)。根據(jù)衣原體的抗原結(jié)構(gòu)和DNA同源性的特點，衣原體科(Chlamydiae)分為兩個屬：衣原體屬和嗜衣原體屬。衣原體屬又分為3個種，即沙眼衣原體(Chlamy

6、dia trachomatis)，鼠衣原體和豬衣原體；嗜衣原體屬又分為肺炎嗜衣原體(Chlamydophila pneumoniae)、鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophila psittaci)等多個種。衣原體種類雖多，僅少數(shù)能致病，引起人類疾病的衣原體主要為：沙眼衣原體 (C. trachomatis, Ct)，肺炎嗜衣原體(C. pneumoniae, Cpn)，鸚鵡熱嗜衣原體 (C. psittaci, Cps)。衣原體的獨特的發(fā)育周期在包涵體內(nèi)完成。沙眼衣原體包涵體發(fā)育示意圖沙眼衣原體包涵體 (眼結(jié)膜刮片，Giemsa染色，×1000)(眼結(jié)膜上皮細胞輪廓不清楚，眼結(jié)膜上

7、皮細胞核邊呈帽狀的為衣原體包涵體)三、立克次體立克次體(rickettsia)是一類大小介于病毒和細菌之間、以節(jié)肢動物為傳播媒介、嚴格細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物。立克次體是引起斑疹傷寒、恙蟲病等傳染病的病原體。對人類致病的立克次體主要包括3個屬，即立克次體科的立克次體屬（Rickettsia）和東方體屬(Orientia)以及無形體科的埃立克體屬(Ehrlichia)。大多數(shù)立克次體為專性細胞內(nèi)寄生，以二分裂方式繁殖，生長速度緩慢。培養(yǎng)立克次體常用的方法有動物接種、雞胚接種和細胞培養(yǎng)。雞胚卵黃囊常用于立克次體的傳代。恙蟲病東方體(O.tsutsugamushi)是恙蟲病的病原體。該病主要流行

8、于東南亞、西南太平洋島嶼、日本和我國的東南與西南地區(qū)。姬姆薩染色：在胞質(zhì)內(nèi)近核旁成堆排列。恙蟲病立克次體 (感染小鼠腹腔液，Giemsa染色，×1000)四、螺旋體是一群細長、柔軟、彎曲的呈螺旋狀、運動活潑的原核細胞型微生物，介于細菌和原蟲之間。與細菌相似，有細胞壁，二分裂繁殖。對人致病的有三個屬：疏螺旋體屬、密螺旋體屬、鉤端螺旋體屬。（1）梅毒螺旋體：為密螺旋體，菌體呈棕褐色，有814個致密而規(guī)則的螺旋，形似細密的彈簧。梅毒螺旋體 (肝組織切片，鍍銀染色，×1000)（2）鉤體：一端或兩端彎曲呈鉤狀。菌體呈C、 S 或8字等形狀。鍍銀染色法菌體呈棕黃色。鉤體 (純培養(yǎng)物，

9、鍍銀染色，×1000)五、鉤體顯微鏡凝集實驗暗視野顯微鏡：暗視野顯微鏡是在普通顯微鏡上安裝一個暗視野聚光器，此聚光器中央有一個黑色擋光板，光線不能直接進入鏡筒，從而使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個視野是黑暗的。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像，并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結(jié)構(gòu)?！驹?理】 用已知鉤體抗原檢測病人血清中的相應抗體，具有型特異性?？乖喊ó?shù)亓餍械闹饕?，或我國標準的鉤體菌株（活菌體）。實驗方法：是將病人的血清倍比稀釋，然后加入等量的鉤體抗原，37 溫育2小時

10、，然后制成壓滴，在暗視野顯微鏡下觀察，若血清中有適量抗體，則鉤體凝集成團如蜘蛛狀，如果抗體濃度過高，則凝集又會被溶解（其具體機制尚不明確）?！疽?義】1、臨床診斷2、確定鉤體的型別。鉤體有200多個血清型且各型間無交叉反應人工自動免疫要含當?shù)亓餍行蛣e的多價死疫苗。3、流行病學調(diào)查。六、細菌的動力觀察細菌動力的檢查方法：Ø 懸滴法Ø 壓滴法Ø 半固體培養(yǎng)基穿刺接種法暗視野顯微鏡法 肅膂莃羈羋蒁蒂蟻肁莇蒁螃芇芃蒀裊肀腿葿肈袂薇蒈螇膈蒃蒈袀羈荿蕆羂膆芅蒆螞罿膁薅螄膄蒀薄袆羇莆薃罿膃莂薃螈羅羋薂袁芁膄薁羃肄蒂薀蚃艿莈蕿螅肂芄蚈袇羋膀蚇罿肀葿蚇蠆袃蒅蚆袁聿莁蚅羄羈芇蚄蚃膇膃蚃螆羀蒂螞袈膅莈螁羀羈芄螁蝕膄膀螀螂羆薈蝿羅膂蒄螈肇肅莀螇螇芀芆莄衿肅膂莃羈羋蒁蒂蟻肁莇蒁螃芇芃蒀裊肀腿葿肈袂薇蒈螇膈蒃蒈袀羈荿蕆羂膆芅蒆螞罿膁薅螄膄蒀薄袆羇莆薃罿膃莂薃螈羅羋薂袁芁膄薁羃肄蒂薀蚃艿莈蕿螅肂芄蚈袇羋膀蚇罿肀葿蚇蠆袃蒅蚆袁聿莁蚅羄羈芇蚄蚃膇膃蚃螆羀蒂螞袈膅莈螁羀羈芄螁蝕膄膀螀螂羆薈蝿羅膂蒄螈肇肅莀螇螇芀芆莄衿肅膂莃羈羋蒁蒂蟻肁莇蒁螃芇芃蒀裊肀腿葿肈袂薇蒈螇膈蒃蒈袀羈荿蕆羂膆芅蒆螞罿膁薅螄膄蒀薄袆羇莆薃罿膃莂薃螈羅羋薂袁芁膄薁羃肄蒂薀蚃艿莈蕿螅肂芄蚈袇羋膀蚇