F-7000熒光分光光度計(jì)操作規(guī)程和注意事項(xiàng)含原理圖

1、F-7000熒光分光光度計(jì)使用操作步驟1、開機(jī)：(1)開啟計(jì)算機(jī)。(2)開啟儀器主機(jī)電源。按下儀器主機(jī)左側(cè)面板下方的黑色按鈕( POWER)。同時(shí)，觀察主機(jī) 正面面板右側(cè)的 Xe LAMP和RUN指示燈依次亮起來，都顯示綠色。2、計(jì)算機(jī)進(jìn)入 Windows XP視窗后，打開運(yùn)行軟件。(1)雙擊桌面圖標(biāo)(FL Solution 2.1 for F-7000 )。主機(jī)自行初始化，掃描界面自動(dòng)進(jìn)入。(2)初始化結(jié)束后，須預(yù)熱 15-20分鐘，按界面提示選擇操作方式。3、測試模式的選擇：波長掃描( wavelength scan)(1)點(diǎn)擊掃描界面右側(cè)“ Method”。(2)在“General”選項(xiàng)

2、中的"Measurement"選擇"wavelength scan”測量模式。(3)在“Instrument”選項(xiàng)中設(shè)置儀器參數(shù)和掃描參數(shù)。主要參數(shù)選項(xiàng)包括：選擇掃描模式"Scan Mode”: Emission/Excitation/Synchronous (發(fā)射光譜、激發(fā)光譜和 同步熒光)。 選擇數(shù)據(jù)模式“ Data Mode"： Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(熒光測量、磷 光測量、化學(xué)發(fā)光)。設(shè)定波長掃描范圍。A、B、C、/終止波長(EX Start/End WL )/終止波長(EM

3、Start/End WL )掃描熒光激發(fā)光譜(Excitation)：需設(shè)定激發(fā)光的起始 和熒光發(fā)射波長(EM WL );掃描熒光發(fā)射光譜(Emission)：需設(shè)定發(fā)射光的起始 和熒光激發(fā)波長(EX WL );掃描同步熒光(Synchronous):需設(shè)定激發(fā)光的起始 /終止波長(EX Start/End WL ) 和熒光發(fā)射波長(EM WL )。選擇掃描速度"Scan Speed'(通常選240nm/min)。選擇?t發(fā)/發(fā)射狹縫(EX/EM Slit )。 選擇光電倍增管負(fù)高壓“ PMT Voltage”(一般選700V)。 選擇儀器響應(yīng)時(shí)間“Response'

4、(一般選Auto )。0.2nm)及輸出數(shù)據(jù) 選擇“ Report”設(shè)定輸出數(shù)據(jù)信息、儀器采集數(shù)據(jù)的步長(通常選 的起始和終止波長(Data Start/End)。(4)參數(shù)設(shè)置好后，點(diǎn)擊“確定” 4、設(shè)置文件存儲(chǔ)路徑(1)點(diǎn)擊掃描界面右側(cè)“Sample”。(2)樣品命名"Sample name”。(3)選中“口 Auto File"，打可以自動(dòng)保存原始文件和TXT格式文本文檔數(shù)據(jù)。(4)參數(shù)設(shè)置好后，點(diǎn)擊“OK”。5、掃描測試(1)打開蓋子，放入待測樣品后，蓋上蓋子。(請(qǐng)勿用力)。(2)點(diǎn)擊掃描界面右側(cè)“Measure"(或快捷鍵F4),窗口在線出現(xiàn)掃描譜圖。6

5、、數(shù)據(jù)處理(1)選中自動(dòng)彈出的數(shù)據(jù)窗口。(2)選擇“ Trace”，進(jìn)行讀數(shù)并尋峰等操作。(3)上傳數(shù)據(jù)。7、關(guān)機(jī)順序(逆開機(jī)順序?qū)嵤┎僮?：(1)關(guān)閉運(yùn)行軟件 FL Solution 2.1 for F-7000 ,彈出窗口，如圖 6。(2) 選中 “O Close the lamp, then close the monitor windows ?"，打。(3)點(diǎn)擊“ Yes”。窗口自動(dòng)關(guān)閉。同時(shí)，觀察主機(jī)正面面板右側(cè)的Xe LAMP指示燈暗下來,而RUN指示燈仍顯示綠色。(4)約十分鐘后，關(guān)閉儀器主機(jī)電源，即按下儀器主機(jī)左側(cè)面板下方的黑色按鈕(POWER)。(目的是僅讓風(fēng)扇工作

6、，使 Xe燈室散熱)。(5)關(guān)閉計(jì)算機(jī)。注意事項(xiàng)(1) 注意開機(jī)順序。步驟 1-(2)若是未先開主機(jī)，則程序會(huì)抓取不到主機(jī)訊號(hào)。(2) 注意關(guān)機(jī)順序。(3) 為延長儀器使用壽命，掃描速度、負(fù)高壓、狹縫的設(shè)置一般不宜選在高檔。(4) 關(guān)機(jī)后必須半小時(shí)(等氤燈溫度降下)方可重新開機(jī)。儀器原理熒光產(chǎn)生原理：熒光物質(zhì)分子吸收了特定頻率輻射后， 由基態(tài)躍遷至第一電子激發(fā)態(tài)（或更高激 發(fā)態(tài)）的任一振動(dòng)能級(jí)，在溶液中這種激 發(fā)態(tài)分子與溶劑分子發(fā)生碰撞，以熱的形 式損失部分能量后，而回到第一電子激發(fā) 態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)（無輻射躍遷）。然后 再以輻射形式去活化躍遷到電子基態(tài)的任 一振動(dòng)能級(jí)，便產(chǎn)生熒光。由于無輻射

7、躍 遷的幾率大，因此分子熒光波長常常比激 發(fā)光長。激發(fā)光源的波長通常是在紫外區(qū)， 熒光也可能在紫外區(qū)，但更多是在可見區(qū)。 相對(duì)于基態(tài)和激發(fā)態(tài)兩個(gè)最低振動(dòng)能級(jí)之 間的躍遷所產(chǎn)生的熒光稱為共振熒光，此 時(shí)吸收光譜與熒光光譜重疊。軸是 看為黃光秀先4蠢崇城-累間” I撲一林，一 一內(nèi)就尊分子單重態(tài)、三重態(tài)能級(jí)結(jié)構(gòu)及分子熒光、磷光產(chǎn)生示意圖熒光分光光度計(jì)示意圖（1）熒光光譜的形狀和激發(fā)光波長無 關(guān)，這是因?yàn)闊晒獾漠a(chǎn)生是由第一電子激 發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)開始的而和熒光物質(zhì) 分子原來被激發(fā)至哪一個(gè)能級(jí)無關(guān)；（2） 熒光光譜的形狀和吸收光譜的形狀十分相 似，且互為鏡像。因?yàn)槲展庾V反映的是 第一電子激發(fā)態(tài)的能級(jí)分布情況；而熒光 光譜反映的是基態(tài)能級(jí)的分布情況，而基 態(tài)中能級(jí)的分布和第一電子激發(fā)態(tài)中的能 級(jí)分布是相類似的，所以