SOCS1與cmyc在人肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系

1、SOCS1與c-myc在人肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系作者：潘忠清姜雨剛陳念平繆輝來【摘要】 目的：研究細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1（SOCS1）和原癌基因c-myc在肝細(xì)胞癌（HCC）組織中的表達(dá)及二者在HCC中的相互作用。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測SOCS1蛋白和c-myc蛋白在41例HCC癌組織、癌旁組織和11例正常肝組織中的表達(dá)；采用RT-PCR技術(shù)檢測上述組織中SOCS1 mRNA的表達(dá)水平；分析臨床、病理資料。結(jié)果：HCC癌組織中SOCS1蛋白陽性率和SOCS1 mRNA的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織和正常肝組織（P<0.01），SOCS1蛋白在低分化HCC癌組織中的

2、陽性率較高分化HCC癌組織明顯減低（P<0.01）。HCC轉(zhuǎn)移組SOCS1蛋白表達(dá)陽性率較未轉(zhuǎn)移組低（P<0.05）。HCC癌組織中c-myc蛋白明顯高于癌旁組織和正常肝組織；在HCC癌組織中SOCS1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與c-myc蛋白表達(dá)強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)（P<0.01）。結(jié)論：SOCS1在HCC癌組織中表達(dá)下調(diào)，可能通過一系列途徑造成c-myc的激活，從而造成腫瘤的發(fā)生。 【關(guān)鍵詞】 癌，肝細(xì)胞·細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抑制因子·原癌基因蛋白質(zhì)c-myc【ABSTRACT】 Objective: To study the expression

3、of suppressor of cytokine signaling 1（SOCS1）and cellular myelocytomatosis oncogene （c-myc）in hepatocellular carcinoma （HCC）, and to inves tigate the relation between the expression of SOCS1 and c-myc in HCC. Methods: The expressions of SOCS1 and c-myc protein of 41 HCC tissues and surrounding tissue

4、s, as well as the tissues of 11 normal cases, were detected by immunohistochemical （IHC） staining using SP method. The expression of SOCS1 mRNA was detected by RT-PCR. And the clinical and pathological data were analysed. Results: Compared with the para-carcinoma and normal liver tissue, the levels

5、of SOCS1 and SOCS1 mRNA in HCC tissues were significantly lower（P<0.01）. Expression of the SOCS1 protein was negatively correlated with pathological degree（P<0.01）. Expression of the SOCS1 protein was reduced in invasive and metastatic HCC tumor. Expression of SOCS1 was negatively corr

6、elated with expression of c-myc in HCC tissues（P<0.01）. Conclusion: The deactivation of SOCS1 gene may cause an activation of c-myc gene and eventually lead to hepatocarcinogenesis.2 / 16【KEY WORDS】 Hepotocellular, carcinoma·Suppressor of cytokine signaling Proteins·Proto-oncogene p

7、rotein c-myc研究認(rèn)為細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子（suppressor of cytokine signaling，SOCS）為一種腫瘤抑制基因，可以抑制腫瘤誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)1。已有研究發(fā)現(xiàn)在淋巴瘤、膀胱癌、胃腸道腫瘤中均有SOCS1的表達(dá)降低，認(rèn)為SOCS1的下調(diào)可以間接激活JAK/STAT途徑下游區(qū)的致癌基因產(chǎn)物，包括c-myc和c-fos等2-3。但是目前對(duì)于SOCS1對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展影響的機(jī)制還不是很清楚。本研究通過檢測SOCS1和c-myc在肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表達(dá)，探討SOCS1和c-myc與HCC的

8、臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系，期待為臨床提供一個(gè)治療HCC新的靶點(diǎn)，為HCC的防治提供理論依據(jù)。1資料與方法1.1一般資料收集2004年10月2006年4月廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的HCC患者41例，其中男31例，女10例；年齡2672歲，平均年齡49.6歲。發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移16例，25例未發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移；高分化（級(jí)級(jí)）18例，低分化（級(jí)級(jí)）23例。以同期因外傷行肝部分切除的11例非腫瘤患者的肝組織標(biāo)本作為對(duì)照。全部患者行手術(shù)切除后立即取材并放入液氮中冷凍，再轉(zhuǎn)入-70 冰箱中；同時(shí)一部分組織用10甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)4 m切片。1.2主要試劑c-myc一抗(MAB-0185)，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司

9、產(chǎn)品；SOCS1一抗（bs-0113R），北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；免疫組織化學(xué)染色試劑盒（SP-9002），抗體稀釋液（ZLI-9028），濃縮型DAB kit（ZLI-9032），以上均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。Trizol總RNA提取試劑，cDNA 第一鏈合成試劑盒，PCR擴(kuò)增試劑盒，美國英杰生命技術(shù)有限公司（Invitrogen CO，USA）。目的基因SOCS1擴(kuò)增的引物序列為：5-AGACCCCTTCTCACCTCTTG-3，5-CTGCACAGCAGAAAATAAAGC-3，擴(kuò)增片段202 bp。選擇GAPDH作為內(nèi)參照進(jìn)行擴(kuò)增，引物序列為：5-CTGCACCACC

10、AACTGCTTAG-3，5-TGAAGTCAGAGGAGACCACC-3，擴(kuò)增片段407 bp。以上引物均為上海生工合成。1.3實(shí)驗(yàn)方法免疫組織化學(xué)SP法檢測SOCS1和c-myc的表達(dá)。SOCS1定位于細(xì)胞質(zhì)，c-myc定位于細(xì)胞核，均呈淡黃至棕褐色顆粒樣分布。根據(jù)鏡下陽性染色的強(qiáng)弱和面積計(jì)分4：1）按陽性細(xì)胞所占百分比，陽性細(xì)胞5為0分，525為1分，2650為2分，5175為3分，75為4分；2）按染色強(qiáng)弱，無色記為0，淡黃色記為1，棕黃色記為2，棕褐色記為3。陽性細(xì)胞百分比與染色強(qiáng)度的乘積02為陰性（-）；38為，912為+，以+和+為陽性。采用RT-PCR技術(shù)檢測上述病例的癌組織及

11、癌旁組織和正常肝組織中SOCS1 mRNA的表達(dá)水平。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，兩樣本率的比較采用四格表2檢驗(yàn)；多個(gè)樣本率的比較采用行列表2檢驗(yàn)，樣本間兩兩比較用2分割法。c-myc和SOCS1蛋白的免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)以“”表示；SOCS1 mRNA檢測的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，方差齊時(shí)采用成組設(shè)計(jì)的方差分析（One-way ANOVA）；多個(gè)樣本均數(shù)間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1HCC癌組織、癌旁組織及正常肝組織中SOCS1 mRNA的表達(dá)情況SOCS1 mRNA在HCC癌組織、癌旁組織及正常肝組織中的表達(dá)水

12、平分別為0.388 1±0.112 3、0.697 7±0.060 3和0.839 1±0.078 5，3組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.001，圖1），癌組織SOCS1 mRNA表達(dá)水平較癌旁組織、正常組織降低（P<0.001）。2.2HCC癌組織、癌旁組織及正常肝組織中SOCS1蛋白的表達(dá)SOCS1蛋白在HCC癌組織、癌旁組織和正常肝組織中的表達(dá)陽性率分別為36.58%（15/41）、65.85% （27/41）和81.82%（9/11）。3組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；癌組織明顯低于癌旁組織和正常肝組織（

13、2=9.865，P=0.02，圖2）。2.3HCC癌組織中SOCS1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系免疫組織化學(xué)染色顯示轉(zhuǎn)移組SOCS1蛋白陽性表達(dá)率為12.5，未轉(zhuǎn)移組陽性率為52.0，轉(zhuǎn)移組SOCS1蛋白陽性表達(dá)率明顯低于未轉(zhuǎn)移組（P<0.05）。SOCS1蛋白在低分化肝癌組織中的陽性率(17.39)較高分化肝癌組織中的陽性率（61.11）明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SOCS1的表達(dá)與HCC患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分類、AFP是否陽性、HBsAg是否陽性等無顯著相關(guān)性（P>0.05，表1）。2.4HCC癌組織、癌旁組織及正常肝

14、組織中c-myc蛋白的表達(dá)c-myc蛋白在HCC癌組織、癌旁組織中的表達(dá)陽性率分別為65.85（27/41）、17.07(7/41)；正常肝組織無表達(dá)。3組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），癌組織明顯高于癌旁組織和正常肝組織（2=27.131，P<0.001，圖3）。2.5HCC癌組織中SOCS1蛋白與c-myc蛋白表達(dá)的關(guān)系41例HCC癌組織中，c-myc蛋白陽性27例，其中SOCS1蛋白陽性有7例；c-myc蛋白陰性14例，其中SOCS1蛋白陽性8例。采用Spearman相關(guān)分析，SOCS1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與c-myc蛋白表達(dá)強(qiáng)度在HCC癌組織中呈負(fù)相關(guān)（r=

15、-0.391，P<0.05，表2）。3討論SOCS1是JAK/STAT通路的重要負(fù)調(diào)控蛋白，可以利用JAK和STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來調(diào)節(jié)許多關(guān)鍵的生理和病理活動(dòng)，包括細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤形成1。Sutherland等5研究發(fā)現(xiàn)SOCS1對(duì)這個(gè)途徑的干擾將導(dǎo)致原癌基因c-myc及其相關(guān)目標(biāo)基因（p53、Bax等）的表達(dá)增加，而最終可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。本研究顯示HCC癌組織SOCS1蛋白陽性率較癌旁組織和正常肝組織明顯減低（P<0.01），這一結(jié)果說明在HCC中可能也存在上述機(jī)制，在HCC中SOCS1基因也出現(xiàn)了失活，從而上調(diào)JAK/STAT途徑，相關(guān)下游基因被激活導(dǎo)致細(xì)胞

16、周期失控，細(xì)胞發(fā)生惡性增殖造成HCC的發(fā)生。在本研究中發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移組SOCS1蛋白陽性表達(dá)率明顯低于未轉(zhuǎn)移組，SOCS1蛋白在低分化肝癌組織中的陽性率較高分化肝癌組織中的陽性率明顯減低（P<0.05）。提示SOCS1基因的失活可能會(huì)促進(jìn)HCC的侵襲轉(zhuǎn)移，而且SOCS1基因在HCC癌組織中的低表達(dá)預(yù)示了惡性程度的增高。與Hibi等6對(duì)結(jié)腸癌的研究相似。動(dòng)物模型的研究已經(jīng)證實(shí)c-myc基因的過度表達(dá)可誘導(dǎo)HCC的發(fā)生7，而c-myc反義核酸能抑制HCC細(xì)胞生長8，c-myc基因表達(dá)增強(qiáng)可能是HCC發(fā)生的原因之一。本研究結(jié)果顯示，HCC癌組織中存在c-myc蛋白高表達(dá)（陽性率為65.85%

17、），癌旁組織的表達(dá)陽性率（17.07%）較癌組織低，正常肝組織呈陰性表達(dá)。癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常肝組織（P<0.001）。證實(shí)了c-myc在HCC發(fā)生、發(fā)展中的作用。SOCS1的SH2區(qū)域可以結(jié)合JAK2的JH1區(qū)域并抑制其磷酸化，從而下調(diào)JAK/STAT途徑。而此途徑的激活可以造成c-myc基因的激活。有研究表明， SOCS1對(duì)STAT3的抑制可以消除IL-6介導(dǎo)的c-myc的轉(zhuǎn)錄9。Bromberg等10研究發(fā)現(xiàn)在STAT3穩(wěn)定表達(dá)的成纖維細(xì)胞系中c-myc mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，表明STAT3可以上調(diào)c-myc的表達(dá)。而SOCS1正是起到了抑制STAT3活性

18、的作用。本研究發(fā)現(xiàn)41例HCC癌組織中，SOCS1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與c-myc蛋白表達(dá)強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。因此筆者認(rèn)為在HCC中可能也存在這種機(jī)制，SOCS1基因的失活可以引起c-myc表達(dá)水平的增加，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期失控，發(fā)生惡性增殖，最終導(dǎo)致HCC的發(fā)生。SOCS1通過一系列途徑對(duì)c-myc的表達(dá)起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。綜上所述，本研究表明在HCC癌組織中SOCS1基因也出現(xiàn)了失活，而且SOCS1的低表達(dá)與HCC的惡性程度及侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，并發(fā)現(xiàn)在HCC癌組織中SOCS1的表達(dá)強(qiáng)度與c-myc的表達(dá)強(qiáng)度呈明顯負(fù)相關(guān)，表明HCC癌組織中SOCS1的失活可能促進(jìn)了c-myc基因的激活

19、，這些都提示著SOCS1可能通過對(duì)c-myc的調(diào)節(jié)作用而對(duì)腫瘤的分化、轉(zhuǎn)移及預(yù)后起到了間接的調(diào)控作用。因此本研究認(rèn)為SOCS1通過對(duì)c-myc基因的調(diào)節(jié)與HCC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可能成為治療HCC的新靶點(diǎn)。【參考文獻(xiàn)】 1 Tan JC, Rabkin R. Suppressors of cytokine signaling in health and diseaseJ. Pediatr Nephrol, 2005,20（5）:567-575.2 Yoshikawa H, Matsubara K, Qian GS, et al. SOCS-1, a negative regulator of t

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