一個(gè)中國遺傳性血色病家系致病基因的突變分析-提交版

1、7一個(gè)中國遺傳性血色病家系致病基因的突變分析李元豐1,3,4，張紅星1,3,4，張海濤1,3,4，彭曉波2，白麗麗2，賀福初1,3,4，邱澤武2，周鋼橋1,3,41、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京蛋白質(zhì)組研究中心，蛋白質(zhì)組學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 1022062、中國人民解放軍第三七醫(yī)院中毒救治科，北京 1000713、蛋白質(zhì)藥物國家工程研究中心，北京 1022064、國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心（北京），北京 102206摘要: 遺傳性血色?。╤ereditary hemochromatosis，HHC）是一種罕見的常染色體隱性遺傳病。我們招募了一個(gè)HHC的近親婚配家系，包括一名

2、患HHC的先證者以及同一代的4名不患HHC的成員。通過對該HHC先證者進(jìn)行全外顯子組測序，在目前已知的與遺傳性血色病相關(guān)的5個(gè)基因（HAMP、HJV、TFR2、FPN和HFE）中，我們發(fā)現(xiàn)在鐵調(diào)素調(diào)節(jié)蛋白（hemojuvelin，HJV）的編碼基因HJV上存在兩個(gè)純合突變（c.G18C和c.GC962_963AA）。其中，前者能夠引起HJV蛋白發(fā)生p.Q6H的改變，但該突變的危害性較小，可能與血色病的發(fā)病無關(guān)；后者能夠引起HJV蛋白發(fā)生p.C321X的改變，從而翻譯出缺失糖基磷脂肌醇錨定結(jié)構(gòu)域的截短型HJV蛋白。除了HJV基因上的純合突變外，該先證者還攜帶了其它12個(gè)純合突變，但這些突變的危害

3、性均不強(qiáng)且其所在基因的功能與鐵代謝無關(guān)。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部測序數(shù)據(jù)顯示，在一般中國人群中不存在p.C321X突變，提示HJV基因上的p.C321X純合突變可能是該HHC患者的致病性突變。與此相一致的是，4名不患HHC的家系成員中該位點(diǎn)為野生型純合子或雜合子，均非p.C321X純合子。由此，我們首次報(bào)道了HJV p.C321X純合突變可導(dǎo)致HHC，該結(jié)果將有助于遺傳性血色病的基因診斷和產(chǎn)前咨詢。關(guān)鍵詞: 遺傳性血色??；HJV基因；p.Q6H；p.C321X；全外顯子組測序Mutation analysis of the pathogenic gene in a Chinese family with h

4、ereditary hemochromatosisYuanfeng Li1,3,4, Hongxing Zhang1,3,4, Haitao Zhang1,3,4, Xiaobo Peng2，Lili Bai2，F(xiàn)uchu He1,3,4，Zewu Qiu2，Gangqiao Zhou1,3,41. State Key Laboratory of Proteomics, Beijing Proteome Research Center, Beijing Institute of Radiation Medicine, Beijing 1022062. Poisoning Treatment D

5、epartment, No.307 Hospital of People's Liberation Army, Beijing 1000713. National Engineering Research Center for Protein Drugs, Beijing 1022064. National Center for Protein Sciences in Beijing, Beijing 102206Abstract: Hereditary hemochromatosis (HHC) is a rare autosomal recessive disorder. We r

6、ecruited a consanguineous Chinese family including the proband with HHC and other four members without HHC. Using whole exome sequencing, we identified two homozygous mutations (c.G18C p.Q6H and c.GC962_963AA p.C321X) in the hemojuvelin gene (HJV) in the proband with HHC. No mutation was found in ot

7、her four previously identified HHC related genes, HAMP, TFR2, FPN and HFE. The functional impact of p.Q6H mutation is weak whereas p.C321X, a premature termination mutation, results in a truncated HJV protein, which lacks the glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchor domain. In addition to the mutat

8、ions in HJV, other 12 homozygous mutations were identified in this patient. However, none of these mutations showed strong damaging impact and the mutated genes are not related to iron metabolism. Our in-house data further demonstrated that p.C321X is absent in general population of Chinese origin,

9、suggesting that homozygous mutation in HJV p.C321X is causative in the patient with HHC. Accordingly, all of the four members without HHC from the same family carried wild-type allele or heterozygous mutations in HJV p.C321X. Thus, we reported that homozygous mutations in HJV p.C321X can result in H

10、HC for the first time, which will help for genetic diagnosis and prenatal counseling for HHC.Keywords: hereditary hemochromatosis; HJV; p.Q6H; p.C321X; whole exome sequencing遺傳性血色?。╤ereditary hemochromatosis，HHC）是一種罕見的常染色體隱性遺傳病，最常見于北歐白種人群，發(fā)病率可達(dá)0.5%1。該病在中國人群中的發(fā)病率較低，但至今尚無確切的流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。HHC患者由于遺傳缺陷，導(dǎo)致過多的鐵

11、進(jìn)入血循環(huán)，進(jìn)而引起鐵逐漸在肝臟、胰腺 和心臟等多種器官中沉積，并最終損傷器官功能。HHC的臨床表現(xiàn)為皮膚色素沉著、肝硬化、糖尿病、心律失常、心功能衰竭、垂體損傷、睪丸萎縮和關(guān)節(jié)疾病等。目前已發(fā)現(xiàn)有5個(gè)基因的突變可能導(dǎo)致遺傳性血色病，分別是HAMP、HJV（HFE2）、TFR2、FPN和HFE2。根據(jù)不同的遺傳病因，可將HHC分為4種類型3。1型為HFE突變所致的血色病，故又被稱為HFE相關(guān)血色病，絕大多數(shù)遺傳性血色病屬于該類型；2型為HJV基因和HAMP基因突變所致的血色病，其中前者被進(jìn)一步劃分為2A型，后者被劃分為2B型；3型為TFR2基因突變所致的血色??；4型為FPN基因突變所致的血色病

12、。在本研究中，我們收集了我國安徽省的一個(gè)近親婚配家系，并使用全外顯子組測序技術(shù)檢測了先證者及其1個(gè)無癥狀堂（表）弟的外周血基因組DNA上的罕見突變，對該家系的致病基因進(jìn)行了定位。1 對象和方法1.1 血色病患者及所在家系的臨床和社會人口學(xué)資料 患者（先證者）來自安徽省渦陽縣，男性，漢族，29歲。2012年12月因“出現(xiàn)皮膚發(fā)黑、腹脹、胸悶、憋氣等癥狀”就診。實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)：鐵蛋白含量為1650 ng/mL、總膽紅素為46.6 µmol/L、直接膽紅素為20.6 µmol/L。臨床診斷為心肌病，全心功能不全I(xiàn)V級，房室傳導(dǎo)阻塞，疑為血色病。進(jìn)一步診治及既往史調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病人性

13、功能喪失已10年，脾臟腫大，患2型糖尿病，不排除肝硬化的可能性。上述臨床表現(xiàn)及檢查結(jié)果提示該病人患有血色病?；颊吒改笧楣帽斫H結(jié)婚（圖1），該家系的遺傳關(guān)系均得到確認(rèn)。家系中其他成員暫未出現(xiàn)明顯的血色病癥狀。本研究經(jīng)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)執(zhí)行，所有受試者均簽署了知情同意書。圖1 遺傳性血色病家系示意圖III-1為本研究的遺傳性血色病患者（先證者，29歲），III-2（27歲）、III-3（24歲）和III-5（22歲）的轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度正常且表型正常，III-4（23歲）的轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度正常，但出現(xiàn)精子不液化等異常表型。1.2 方法1.2.1 外周血基因組DNA的提

14、取抽取血色病患者（III-1）和其他4名家系成員（III-2、III-3、III-4和III-5）的外周靜脈全血，用常規(guī)得飽和酚、氯仿法抽提基因組DNA，乙醇沉淀保存待用。該家系的其余成員未提供外周血樣。1.2.2 HFE c.845G>A突變的檢測與分析為檢測先證者是否攜帶與血色病最為密切相關(guān)的HFE基因的常見致病c.845G>A（p.C282Y，該突變導(dǎo)致HFE蛋白第282位半胱氨酸C被酪氨酸Y取代【p.C282Y】），我們采用PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物純化和Sanger測序法對先證者的基因組DNA進(jìn)行了突變分析。PCR擴(kuò)增覆蓋突變所在的基因組區(qū)域，上游引物為：5-GGGTATTTCCT

15、TCCTCCAACC-3，下游引物為：5-AATTACCTCCTCAGGCACTCC-3。測序結(jié)果與野生型HFE基因的標(biāo)準(zhǔn)序列（GenBank：NC_000006.12）比對，以確定該病例是否攜帶HFE c.845G>A突變。1.2.3 全外顯子組測序我們對先證者（III-1）和家系成員III-4的基因組DNA進(jìn)行了外顯子區(qū)域的捕獲和高通量測序。外顯子區(qū)域捕獲使用的試劑盒為SureSelect人全外顯子V5 + UTR（Agilent公司），大約覆蓋人類基因組70Mb區(qū)域。使用高通量測序儀Hiseq 2000進(jìn)行雙端100bp的高通量測序（Illumina公司）。1.2.4 序列比對、變

16、異檢測和注釋使用Trimmomatic軟件（v0.32）去除低質(zhì)量的高通量測序數(shù)據(jù)，使用BWA軟件(v0.5.9)將高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)與參考基因組（hg19）進(jìn)行比對，使用GATK軟件（v2.8-1）檢測單堿基變異（SNV）和插入/缺失（Indel）。使用ANNOVAR對變異進(jìn)行注釋。保留目標(biāo)區(qū)域中能改變氨基酸的突變（包括錯(cuò)義突變、無義突變、基因編碼區(qū)內(nèi)微小的插入缺失和可變剪接區(qū)的突變），并去除數(shù)據(jù)庫中已知的單核苷酸多態(tài)性（single-nucleotide polymorphism，SNP），包括dbSNP135數(shù)據(jù)庫中的常見SNP、千人基因組計(jì)劃中亞洲人的SNP以及NHLBI外顯子組測序項(xiàng)目

17、中的常見SNP。通過以上分析、過濾和質(zhì)量控制，最終獲得個(gè)體中攜帶的具有潛在功能意義的罕見突變。1.2.5 突變危害性的預(yù)測使用SIFT（/www/SIFT_chr_coords_submit.html）和PolyPhen-2（/pph2/bgi.shtml）軟件，預(yù)測突變對蛋白質(zhì)功能的影響程度。僅當(dāng)兩種軟件均預(yù)測同一突變對蛋白質(zhì)的功能影響較大時(shí)，我們才認(rèn)定該突變具有較強(qiáng)的危害性。2 結(jié)果與分析2.1 病例中未檢測到HFE基因c.845G>A突變前人已有報(bào)道，HFE基因上的純合突變或復(fù)合雜合型

18、突變是導(dǎo)致遺傳性血色病的常見原因，在遺傳性血色病患者中，HFE基因c.845G>A純合突變發(fā)生頻率最高（該突變可導(dǎo)致HFE蛋白發(fā)生p.C282Y的改變），約占遺傳性血色病患者總數(shù)的80%-85%4。通過Sanger測序，我們發(fā)現(xiàn)血色病患者（III-1）并不攜帶p.C282Y突變，從而排除該患者所患疾病是由p.C282Y純合突變引起的，從而提示我們需要通過進(jìn)一步的檢測，以確定該血色病患者的其它致病突變。2.2 全外顯子組測序的深度及覆蓋度我們對先證者（III-1）及另一家系成員（III-4）的外周血基因組DNA進(jìn)行了全外顯子組測序。與參考基因組（hg19）比對后的結(jié)果顯示，血色病患者III

19、-1及家系成員III-4的平均測序深度分別達(dá)到101.2×和111.7×，目標(biāo)區(qū)域在10×以上的比例達(dá)到96%以上，說明全基因組范圍內(nèi)的編碼區(qū)和非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）基本被有效覆蓋（表1）。表1 測序深度統(tǒng)計(jì)樣本號III-1III-4測序深度（×）101.2111.7目標(biāo)區(qū)域覆蓋1×以上（%）99.799.7目標(biāo)區(qū)域覆蓋4×以上（%）98.998.8目標(biāo)區(qū)域覆蓋10×以上（%）96.396.0目標(biāo)區(qū)域覆蓋20×以上（%）89.989.52.3 在先證者中檢測到HJV（HFE2）基

20、因存在兩個(gè)純合突變通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，該血色病患者在多個(gè)基因上攜帶純合或雜合突變。在目前已知的與HHC相關(guān)的5個(gè)基因（HAMP、HJV、TFR2、FPN和HFE）中，HAMP、TFR2、FPN和HFE未發(fā)生基因突變。但是，在HJV基因上發(fā)生了兩個(gè)純合突變，分別為c.G18C和c.GC962_963AA，通過Sanger測序進(jìn)一步證實(shí)了這兩個(gè)純合突變（圖2a和2b）。其中, 第一個(gè)突變能夠引起HJV蛋白第6位谷氨酰胺被組氨酸取代（p.Q6H）。但是，通過生物信息學(xué)預(yù)測，我們發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)保守性差，突變引起的危害性?。⊿IFT和PolyPhen-2軟件預(yù)測均提示危害性較?。虼送茰y該突變不是致病

21、性突變。第二個(gè)突變?yōu)檫B續(xù)的兩個(gè)堿基突變，引起HJV蛋白的翻譯在第321位被提前終止（p.C321X），該突變造成HJV蛋白缺少尾部的糖基化磷脂酰肌醇（glycosilphosphatidylinositol，GPI）錨定結(jié)構(gòu)域，具有很強(qiáng)的危害性。此外，通過檢查本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的148個(gè)不患血色病的個(gè)體的高通量測序數(shù)據(jù)集，未能發(fā)現(xiàn)c.G18C和c.GC962_963AA這兩個(gè)突變。由此我們推測，HJV基因上的c.GC962_963AA（p.C321X）純合突變可能是血色病患者III-1的致病性突變。圖2 HJV基因的突變（a）該血色病家系第III代個(gè)體c.G18C和c.GC962_963AA突變情況

22、。其中III-2為野生型純合子；III-1為突變型純合子；其余個(gè)體均為雜合子。（b）HJV蛋白包含的結(jié)構(gòu)域。Signal Peptide為HJV蛋白的信號肽；vWF type D（vWF partial von Willebrand factor type D domain）表示血管性血友病因子D型結(jié)構(gòu)域；TM（transmembrane domain）表示跨膜結(jié)構(gòu)域。使用DOG2.0軟件5作圖。2.4 先證者的其它純合突變除目前已知的與遺傳性血色病相關(guān)的5個(gè)基因外，其它基因上的突變是否可能是血色病患者III-1的致病突變？為此，我們進(jìn)一步分析了該血色病患者攜帶的所有突變。考慮到該患者的父母為

23、近親結(jié)婚，我們推斷該患者更有可能是由相關(guān)基因上的純合突變引起的，而非復(fù)合雜合型突變，故以下僅關(guān)注純合突變。我們發(fā)現(xiàn)，除HJV基因上的2個(gè)純合突變外，該患者攜帶其它12個(gè)純合突變（表2）。通過生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)，這12個(gè)突變的危害性均不強(qiáng)（兩種預(yù)測軟件同時(shí)預(yù)測突變危害性強(qiáng)時(shí)才認(rèn)定該突變危害性強(qiáng)），且突變所在基因的功能與鐵代謝之間的關(guān)系未見報(bào)道。因此，該患者攜帶的其它突變引發(fā)血色病的可能性比較低。綜上，HJV基因上的純合突變c.GC962_963AA（p.C321X）很可能是血色病患者III-1的致病性突變。由此，從遺傳學(xué)上推測該患者所患疾病為2A型血色病。事實(shí)上，該患者的臨床表現(xiàn)為發(fā)病年齡低，性

24、功能喪失，全心功能不全，均符合2A型血色病的特點(diǎn)。表2 病例中攜帶的純合突變（除HJV基因突變外）染色體號基因組位置a參考序列突變序列基因SIFT預(yù)測結(jié)果PolyPhen-2預(yù)測結(jié)果編碼蛋白功能簡介141327445CTCITED4可接受可能存在危害轉(zhuǎn)錄輔助活化因子1111889537GAC1orf88可接受良性鞭毛解聚1151339213CTSELENBP1可接受良性硒結(jié)合蛋白1153789860GCGATAD2B可接受可能存在危害轉(zhuǎn)錄阻遏因子4187521157CTFAT1可接受很可能存在危害腫瘤抑制因子688776013TCSPACA1損害的（可信度低）良性精卵結(jié)合6152640138T

25、CSYNE1可接受良性維持細(xì)胞空間結(jié)構(gòu)7138429880TCATP6V0A4可接受良性介導(dǎo)胞內(nèi)隔室的酸化1688791464GAFAM38A可接受可能存在危害特定陽離子活化通路的主要成分1744060790GAMAPT可接受良性促進(jìn)微管形成和穩(wěn)定1748745284GAABCC3可接受很可能存在危害誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)運(yùn)子2218561520CTMAPK8IP2-良性調(diào)控信號轉(zhuǎn)導(dǎo)注：a基于hg19版本2.5 家系成員III-4的全外顯子組測序分析家系成員III-4（23歲）的轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度正常，但是該個(gè)體具有精子不液化等異常癥狀。為了嘗試從遺傳學(xué)上確定家系成員III-4是否患有遺傳性血色病，我們對該個(gè)體

26、也進(jìn)行了全外顯子組測序。III-4與血色病患者III-1的親緣關(guān)系非常近（圖1），如果該個(gè)體也患有遺傳性血色病，則一般情況下，該個(gè)體應(yīng)攜帶與血色病患者III-1一致的純合突變c.G18C和c.GC962_963AA（p.Q6H/p.C321X）。經(jīng)分析，發(fā)現(xiàn)該個(gè)體確實(shí)攜帶與血色病患者III-1一致的突變c.G18C和c.GC962_963AA，但均為雜合性突變（圖2）。此外，該個(gè)體在HJV基因上不存在其它突變。該個(gè)體在其它4個(gè)已知的與遺傳性血色病相關(guān)的基因上也不存在突變。因此，根據(jù)現(xiàn)有的遺傳學(xué)知識，我們無法確定家系成員III-4是否患有遺傳性血色病。2.6 其他家系成員的突變分析我們進(jìn)一步對該

27、家系第III代其余3名成員也進(jìn)行了c.G18C（p.Q6H）和c.GC962_963AA（p.C321X）突變的檢測。我們發(fā)現(xiàn)，家系成員III-2為野生型純合子，III-3和III-5為雜合子（圖2）。目前，家系成員III-3和III-5表現(xiàn)型均正常，但考慮到二者年齡較低（24歲和22歲），是否患有遺傳性血色病尚需要進(jìn)一步的觀察。此外，我們注意到該家系第III代的每一名成員均同時(shí)攜帶p.Q6H和p.C321X突變，或者既不攜帶p.Q6H也不攜帶p.C321X突變，提示p.Q6H與致病性的p.C321X突變呈連鎖不平衡狀態(tài)，處于同一等位基因上。3 討論遺傳性血色病是一種罕見的常染色體隱性遺傳病。

28、目前已發(fā)現(xiàn)5個(gè)鐵代謝相關(guān)基因（HAMP、HJV、TFR2、FPN和HFE）上的突變能夠?qū)е卵?。其中，HFE基因上的突變最早被報(bào)道6，且該基因上的突變是遺傳性血色病發(fā)病的主要原因7。遺傳性血色病患者在HFE蛋白上的突變主要為p.C282Y純合突變、p.C282Y/p.H63D復(fù)合雜合型突變和p.C282Y/p.S65C復(fù)合雜合型突變2。這些突變在高加索人群中比較常見，但在我國人群中非常罕見8，本研究中的血色病患者也不存在p.C282Y等突變。在本研究中，我們對同一家系的兩名個(gè)體（其中一例為血色病患者）進(jìn)行了全外顯子組深度測序。結(jié)果顯示，該家系中血色病患者的HJV基因攜帶純合突變p.C321X

29、，提示該患者所患疾病為2A型血色病，其臨床表型證實(shí)了該推測。HJV mRNA主要在肝臟、心臟和骨骼肌中表達(dá)。其中，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)HJV的表達(dá)對鐵調(diào)素（hepcindin）的分泌具有重要的調(diào)節(jié)功能，進(jìn)而維持機(jī)體內(nèi)鐵代謝的平衡9。HJV存在附著型（membrane form，m-HJV）和可溶性（soluble form，s-HJV）兩種形式，當(dāng)附著型HJV尾部的糖基磷脂肌醇（GPI）錨定結(jié)構(gòu)域被剪切掉后，可形成可溶性HJV。兩者對鐵調(diào)素的調(diào)節(jié)功能是反向的。其中附著型HJV作為骨形成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）的共受體，可通過BMP/SMAD通路上調(diào)鐵調(diào)素的表

30、達(dá)；而可溶性HJV可與附著型HJV競爭性結(jié)合BMP，導(dǎo)致鐵調(diào)素的表達(dá)下調(diào)。近年來，在血色病患者體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)多種不同的HJV突變10。其中多種HJV突變可顯著降低附著型HJV的表達(dá)水平。同時(shí)，研究還發(fā)現(xiàn)，攜帶HJV突變時(shí)，鐵調(diào)素的表達(dá)異常降低11，這進(jìn)一步提示了HJV突變在血色病發(fā)生中的作用。Huang等12曾報(bào)道過HJV突變p.C321X存在于一名中國年輕女性遺傳性血色病患者中。不同于本次研究的是，Huang等在患者中檢測到的突變p.C321X為雜合型，來源于其表型正常的母親。該突變型等位基因與來源于表型正常的父親的另一HJV突變型等位基因（p.I281T）形成復(fù)合雜合子，最終導(dǎo)致遺傳性血色病。

31、其中，p.I281T純合突變已被報(bào)道能導(dǎo)致血色病10。p.C321X突變與以往報(bào)道的p.R326X突變的功能類似，二者均可引起HJV蛋白缺失尾部的糖基磷脂肌醇（GPI）錨定結(jié)構(gòu)域，進(jìn)而形成可溶性HJV，最終引發(fā)鐵代謝異常13。最近，Li等14報(bào)道了一名中國中年男性血色病患者攜帶雜合型HJV突變型等位基因p.C321X，該突變型等位基因來源于其健康的母親。但是，該患者不攜帶其它的HJV基因突變，也不攜帶其它血色病相關(guān)基因（HAMP、TFR2、FPN和HFE）的突變，這一結(jié)論與以往血色病是隱性遺傳病的認(rèn)識相悖。Li等進(jìn)一步分析患者所在家系的其他成員，發(fā)現(xiàn)患者的一名姐姐和一名哥哥也從其母親處繼承了攜

32、帶p.C321X突變的等位基因。有意思的是，患者的這名哥哥疑似患有血色病，而其姐姐身體健康。因?yàn)橐酝鶑奈磮?bào)道過健康男性攜帶p.C321X這一突變型等位基因，由此Li等認(rèn)為基因和環(huán)境因素共同影響疾病的發(fā)生，攜帶一個(gè)異常HJV等位基因（p.C321X）的男性也有很大可能患血色病，但發(fā)病年齡可能比攜帶HJV基因純合突變或復(fù)合雜合性突變的患者要晚；而攜帶一個(gè)異常等位基因p.C321X的女性則基本不會發(fā)病。本研究中，血色病患者III-1攜帶HJV純合突變型等位基因p.C321X，同時(shí)我們排除了其它基因上的突變可能導(dǎo)致該病。由此，我們首次報(bào)道了純合HJV突變型等位基因p.C321X可引起血色病。進(jìn)一步對該

33、家系其他成員進(jìn)行突變檢測后發(fā)現(xiàn)，該家系第III代成員中的另外兩名男性個(gè)體III-3（24歲）和III-4（23歲）均攜帶p.C321X雜合突變。這兩名男性個(gè)體轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度正常，但是III-4具有精子不液化等異常表型，且III-3和III-4年齡均較小。鑒于Li等14曾發(fā)現(xiàn)兩名中國中年男性攜帶p.C321X雜合突變可導(dǎo)致血色病，因此不排除本研究中的兩名青年男性今后罹患血色病的可能性。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)，該家系第III代成員的一名女性個(gè)體III-5也攜帶p.C321X雜合突變。結(jié)合Huang等12和Li等14的研究，推測該女性個(gè)體血色病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較低，但不排除其男性后代罹患血色病的可能性，需要密切關(guān)注

34、。該家系第III代成員的另一名女性個(gè)體III-2是野生型純合子，故該個(gè)體罹患遺傳性血色病的風(fēng)險(xiǎn)較低。此外，由于血色病患者III-1及其妹妹（III-2）和弟弟（III-3）分別為p.C321X突變型純合子、野生型純合子和雜合子，因此，雖然其父母沒有提供外周血DNA用于本項(xiàng)研究，但是我們?nèi)匀荒軌蚋鶕?jù)孟德爾遺傳定律推斷其父母（II-1和II-2，表型正常）均攜帶一個(gè)p.C321X突變的等位基因。這一點(diǎn)若能得到實(shí)驗(yàn)證實(shí)，將首次提示存在一例健康老年男性攜帶p.C321X雜合突變，從而提示只攜帶一個(gè)p.C321X突變等位基因不一定使男性患血色病。綜上，本研究首次在來自一個(gè)中國近親結(jié)婚家系的血色病患者中檢

35、測到HJV p.C321X純合突變。結(jié)合Huang等12和Li等14的研究，目前共在三個(gè)中國血色病家系中發(fā)現(xiàn)了p.C321X突變，提示p.C321X這兩個(gè)突變在中國人群中存在，但其發(fā)生頻率較低。進(jìn)一步在中國人群中，特別是安徽和江蘇一帶的中國人群中篩查p.C321X突變，將有可能對中國血色病的致病機(jī)制和基因診斷研究發(fā)揮重要作用。第*期作者等: 標(biāo)題7參考文獻(xiàn)1Adams, P., Brissot, P. & Powell, L. W. EASL International Consensus Conference on Haemochromatosis. J Hepatol, 2000,

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