HPLC法測量山豆根和開喉劍噴霧劑中氧化苦參堿含量

1、HPLC法測量山豆根和開喉劍噴霧劑中氧化苦 參堿含量HPLC法測量山豆根和開喉劍噴霧劑中氧化苦參堿含量(貴州師范大學化學與材料學院，貴州貴陽550001)摘要：以超聲提取法提取山豆根與開喉劍中的氧化苦參堿為研究對象，并采用高效液 相色譜測定其出鋒面積，通過標準曲線方程計算出山豆根和開喉劍中氧化苦參堿的含量。 甲醇-水(0.025%磷酸)(5:95)為流動相：檢測波長：220nm；流速：1. Oml/min：進樣 量：10U1:柱溫：40。結(jié)果表明：氧化苦參堿的HPLC進樣量在lOUg/ml-O. lUg/ml 范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關系(r=0.9995),標準偏差RSD=O. Oil

2、,平均回收率 為76. 43也 本方法簡便易行、精確度高、重復性好。適用于檢測山豆根和中成藥中氧化苦 參堿的含量。關鍵詞：高效液相色譜法；山豆根：開喉劍：苦參堿Determination of Oxymatrine in Vietnamese Sophora Root and open the larynx sword with high performance liquid chromatographyLinghu Changfa(Chemistry and materials science, Guizhou Normal University, 550001 Guizhou Guiyan

3、g) Abstract： Extracted by ultrasonic extraction tonkinensis with open throat Sword oxymatrine for the study, and using high-performance liquid chromatographic determination of its front area, calculated by the standard curve equation tonkinensis and open throat sword in oxidation flavescensthe conte

4、nt of a base. Methanol 一 water (0.025%phosphoric acid), (5:95) as mobile phase; detection wavelength: 220nm; flow rate： 1. Oml/min; injection volume: 10 P1; column temperature: 40 ° C.： Oxymatrine The HPLC injection volume in 10 U g/ml-0. 1 U g/ml within theintegral value of the peak area showe

5、d a good linear relationship (r = 0.9995), the standard deviation (RSD) = 0.Oil, the average recovery was 76. 43 %. This method is simple, high accuracy, good repeatability. Apply to detection oxymatrine tonkinensis and proprietary Chinese medicines in the content. Keywords： HPLC： Vietnamese Sophora

6、 Root； open the larynx sword oxymatrine引言： 山豆根(Vietnamese Sophora Root)為雙子葉植物綱豆科植物越南槐的干 燥根及根莖。植物形態(tài)為灌木，高12m。生于石灰?guī)r山地或巖石健中。主產(chǎn)廣西。秋季 采制挖根，除去地上莖葉，曬干。根莖呈不規(guī)則結(jié)節(jié)狀，頂端殘留莖基或莖痕，下面生根數(shù)條。根長圓柱形，略彎曲，長1035cm,直徑0.31.5cm；表面棕色至棕黑色，有縱 皺紋及橫長皮孔。質(zhì)堅硬，斷面皮部淡棕色，木部黃白色。微有豆腥氣，味極苦。功能主治：清火解毒，消腫止痛。用于咽 喉牙齦腫痛、肺熱咳嗽煩渴、黃疸、熱結(jié)便秘.化學成分分析根含總生物堿約

7、0. 93%,其 中苦參堿0.52蛤 氧化苦參堿0.35斬以及微量的臭豆堿和甲基金雀花堿：并含槐果堿。 黃酮類化合物有紫檀素和1-三葉豆高麗槐冢,后者經(jīng)醐水解得1-高麗槐素,均為紫檀素類 化合物，有抗癌作用，其作用式比4元強，右旋體比左旋體強。另含山豆根素、山豆根查 耳酮、山豆根色烯素、山豆根色烯查耳酮、山豆根色烯素、山豆根色烯查耳酮、山豆根色 滿素、山豆根苯并二氫映喃素、大豆素、2' ,4' , 7-三羥基-6, 8-雙（3-甲基-2-丁烯）二 氫黃酮、山豆根新色烯查耳酮、山豆根新色烯素及柒料木素；其所含酚性物質(zhì)，水解得咖 啡酸和長鏈醇其中以C26為主，占72. 4樂 此外，

8、尚含羽扇豆醇、B-谷笛翦:、維生素C和 維生素B1。有報道，中性多糖由D-半乳糖和D-葡萄糖組成，其分子比為1:1。開喉劍是 由貴州三力制藥有限公司生產(chǎn)的用于肺胃蘊熱所致的咽喉腫痛，口干口苦，牙齦腫痛以及 口腔潰瘍等疾病，氧化苦參堿其主要活性成分之一。本實驗目的：采用現(xiàn)代HPLC技術提 高氧化苦參堿的提取效率。1材料與方法1.1材料山豆根產(chǎn)于廣西桂林（新購），開喉劍產(chǎn)于貴州三力制藥有限責任公司，國藥準字Z20026493。1.2儀器與試劑儀器：超聲器名為超聲清洗機，上海躍進醫(yī)用光學器械廠，型號：CQTOOB-ST型：高 效液相色譜儀：LC2000D 編號 20219911 （色譜柱 LUNA-

9、5U-C18 （2）-100A 規(guī)格：150*4. 6mm 304930/27 00F/4252/E0 T2000P色譜工作站。）砂芯過濾器：FD/JH/JS飛達公司。微孔 濾膜 水相：規(guī)格f 50mm孔徑：0.45 Um有機相：規(guī)格6 50mm孔徑：0.45 Um。聚偏氟 乙烯微孔濾膜（F型）針頭過濾器：規(guī)格f 13mm孔徑：0. 45 M m上海興亞凈化材料廠。電 子天平：HZY-A200 規(guī)格：max二200g e=10 U g d=lmg試劑：甲醇：天津科密歐化學試劑有限公司（HPLC）三氯甲烷：成都市科龍化工試 劑廠。分析純（AR）濃氨水：重慶川東化工有限公司化學試劑廠分析純（AR）

10、磷酸：成 都市科龍化工試劑廠。分析純（AR） o 1.3檢測條件液相色譜條件1.8：甲醇-水（0.025%磷酸）（5:95）為流動相，檢測波長為 210nm3. 7,流速為1. Oml/min,柱溫20-30,進樣量10 H L,理論板數(shù)約為2300.色譜 柱 LUNA-5U-C18（2）-100A 規(guī)格：150*4. 6mm 304930/27 00F/4252/E0 和 T2000P 色譜工作 站。 1.4方法本實驗采用三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）浸泡，并運用超聲處理等手段進行 提取。再用高效液相色譜法對提取物質(zhì)的檢測。并采用科學的計算手段進行計算，從而得 出山豆根含有氧化苦

11、參堿的含量。2提取2. 1山豆根氧化苦參堿的提取精密稱定0.55-0. 60g山豆根五份2. 3,置于具塞錐形瓶中。精密加入50ml三氯甲 烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）密塞。稱定重量。放置60分鐘。超聲處理將上述五個錐 形瓶和試液放入超聲器中，設置功率為250W,頻率為90Hz,處理40min,再稱定重量。并 用三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）補足減少的重量。搖勻，并用快速濾紙過濾。提 取液處理精密量取上述濾液10ml,置于圓底燒瓶中。將圓底燒瓶置了40C溫水中回收溶 劑至浸膏狀，加入甲醇約5ml使其溶解。轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加甲醇至刻度線，搖勻， 用0.45 Um微孔濾膜

12、過濾，取濾液，即的樣品提取液，貼好標簽，密封待測。2.2中成 藥開喉劍中氧化苦參堿的提取精密稱定0.55-0. 60g開喉劍五份2. 3,置于具塞錐形瓶中。精密加入50ml三氯甲 烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）密塞。稱定重量。放置60分鐘。超聲處理將上述五個錐 形瓶和試液放入超聲器中，設置功率為250W,頻率為90Hz,處理40min,再稱定重量。并 用三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）補足減少的重量。搖勻，并用快速濾紙過濾。提 取液處理精密量取上述濾液10ml,置于圓底燒瓶中。將圓底燒瓶置于40C溫水中回收溶 劑至浸膏狀，加入甲醇約5ml使其溶解,轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加甲醇至

13、刻度線，搖勻， 用0.45 Um微孔濾膜過濾，取濾液，即的樣品提取液，貼好標簽，密封待測。2.3加樣回收2 3. 8精密稱定適量山豆根三份并加入200 Hl標準液2. 3,置于具塞錐形瓶中。精密加 入50ml三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）密塞。稱定重量。放置60分鐘。將上述五 個錐形瓶和試液放入超聲器中，設置功率為250W,頻率為90Hz,處理40min,再稱定重量。 并用三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）補足減少的重量。搖勻，并用快速濾紙過濾。 精密量取上述濾液10ml,置于圓底燒瓶中。將圓底燒瓶置F40C溫水中回收溶劑至浸膏 狀，加入甲醇約5ml使其溶解。轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加甲醇至刻度線，搖勻，用0.45 Um 微孔濾膜過濾，取濾液，即的樣品提取液，貼好標簽，密封待測。加樣回收情況如表 3 標準工作曲線精確稱取氧化苦參堿對照品適量，并用甲醇定容稀釋成1ml含1.5mg的稀釋液（此 步為老師完成）由于氧化苦參堿在10口/琥-0.1口8/101范圍呈線性關系1,2.9,故將此 溶液分別稀釋成濃度為 3. 0