化學(xué)化學(xué)發(fā)光原理及應(yīng)用

1、化學(xué)發(fā)光原理及其應(yīng)用化學(xué)發(fā)光原理及其應(yīng)用主要內(nèi)容主要內(nèi)容 化學(xué)發(fā)光基本原理 化學(xué)發(fā)光的分類 化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用 化學(xué)發(fā)光免疫測定的特點Part I. 化學(xué)發(fā)光基本原理化學(xué)發(fā)光基本原理 某些物質(zhì)在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)過程中，由于吸收了反應(yīng)產(chǎn)生的化學(xué)能化學(xué)能而被激發(fā)，從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，發(fā)射出一定波長的光，這種吸收化學(xué)能使分子發(fā)光的過程稱為化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光(chemiluminescence) 。 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)存在于生物體(螢火蟲、海洋發(fā)光生物)中，稱生物發(fā)光生物發(fā)光(bioluminescence)。能量，通道，熒光物質(zhì)能量，通道，熒光物質(zhì)北京源德化學(xué)發(fā)光分析儀MAGLUMI 化學(xué)發(fā)光分析儀Part

2、.化學(xué)發(fā)光的分類化學(xué)發(fā)光的分類 按化學(xué)反應(yīng)類型可分為：酶促化學(xué)發(fā)光和非酶促化學(xué)發(fā)光兩類 按發(fā)光持續(xù)時間可分為：閃光和輝光兩類 甲狀腺功能的免疫分析 糖代謝紊亂的免疫分析 常見腫瘤標(biāo)志物及其免疫分析 常見傳染性疾病的免疫檢測病毒性肝炎HIV感染嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS)其他免疫檢測項目甲狀腺功能的免疫分析甲狀腺機能的常見評價指標(biāo)及其臨床意義 1.甲狀腺機能亢進(jìn) 2.甲狀腺功能減退 3.低T3和低T3、T4綜合征 一、甲狀腺機能亢進(jìn) 1972年提出T3型甲亢的診斷標(biāo)準(zhǔn)： 1.甲亢的癥狀和體征，常無突眼征，但心血管癥狀較明顯； 2.血清TT4、FT4值正常； 3.TT3、FT3值升高； T3型甲

3、亢在臨床上并非罕見，特別是缺碘地區(qū)患功能自主性腺瘤的部分患者，或用T3治療后出現(xiàn)的碘甲亢，目前認(rèn)為T3型甲亢不能算作一種獨立疾病，因為發(fā)現(xiàn)T3型甲亢病人中有一部分雖然TT3升高但FT3正?；虻陀谡＃虼烁姆Q高T3綜合征為妥。 T4型甲亢，即T4毒癥患者血清T3、FT3濃度正常；而T4、FT4濃度升高。TSH值為正常低值或低于正常，并伴甲亢臨床癥狀。二、甲狀腺功能減退 甲減為甲狀腺激素分泌不足引起的代謝性疾病。臨床上分為原發(fā)性甲減，又稱魏甲狀腺性甲減；以及繼發(fā)性甲減，又稱垂體-下丘腦甲減兩類。血循環(huán)中甲狀腺激素濃度的測定在診斷甲減方面，TSH和FT3、FT4是靈敏的診斷指標(biāo)，明顯優(yōu)于總甲狀腺激

4、素，如TT3、TT4等。其價值依次為TSH= FT4TT4FT3TT3.三、低T3和低T3、T4綜合征 低T3綜合征是一種由于非甲狀腺疾病 造成的甲狀腺激素異常，其發(fā)生與機體的代謝狀態(tài)，基礎(chǔ)疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及外來因素，如用藥等有關(guān)。代謝狀態(tài)差、基礎(chǔ)病情加重時其發(fā)生率隨之增高；當(dāng)病情好轉(zhuǎn)、機體健康狀況趨于正常時，低T3狀態(tài)可自行消失。四、其他與甲狀腺疾病有關(guān)的免疫學(xué)指標(biāo) 抗甲狀腺球蛋白抗體（TGAb） 多見于橋本氏甲狀腺炎、自身免疫性甲狀腺疾病、原發(fā)性甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢進(jìn)患者等。 抗甲狀腺微粒體抗體（TMAb） 多見于橋本氏甲狀腺炎、自身免疫性甲狀腺疾病、原發(fā)性甲狀腺功能亢進(jìn)、原

5、發(fā)性甲狀腺功能減退。小結(jié) 綜上所述，若對甲狀腺功能 指標(biāo)進(jìn)行全面評價，則上述各項指標(biāo)對甲亢的診斷價值依次為FT3FT4TT3TT4；各項指標(biāo)對甲減的診斷價值依次為FT4=TSHTT4FT3TT3二、糖尿病的免疫學(xué)檢測 以下是臨床上常見的有關(guān)糖代謝紊亂的免疫分析指標(biāo)： 1. C肽 2.胰島素 3.胰島素抗體 4.谷氨酸脫羧酶抗體（GAD-Ab） 5.胰高血糖素C肽 C肽測定用于了解II型糖尿病人是否需要胰島素治療，如果C肽水平較低，葡萄糖刺激反應(yīng)差，則表示表明立即或最終需要胰島素治療，也可用于評價糖尿病酮癥酸中毒病人的胰島功能。C肽的另一個重要的臨床用途是各種低血糖病因的鑒別。C肽水平升高科見于

6、輕型糖尿病患者，常見空腹血糖升高不多者C肽大多高于正常。胰島素瘤患者，如血中存在胰島素抗體，血清C肽大都增高。胰腺腫瘤患者行胰腺切除后，如血清C肽仍可測出，提示手術(shù)未能全部切除胰腺組織。如果手術(shù)后一度陰性，后又稱為陽性，提示腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。 在肝硬化時，血漿胰島素有升高趨勢，其原因在于肝臟攝取和降解胰島素減少；但空腹血糖正常。 胰島素 胰島素在糖尿病的分型和診斷中意義重大，其中 I型又稱胰島素依賴型糖尿?。↖DDM），空腹血漿胰島素較低，口服葡糖糖試驗（OGTT)或饅頭餐后上升及下降極緩慢，甚至無任何變化，說明其胰島細(xì)胞功能極差。II型又稱非胰島素依賴型糖尿?。∟IDDM），包括需胰島素治療和

7、不需胰島素治療兩類，其特點為空腹高胰島素血癥；OGTT后胰島素釋放延遲，高峰后移，但總釋放量不低，約12%的病人呈低反應(yīng)或延遲反應(yīng)說明II型糖尿病和I型糖尿病有本質(zhì)的區(qū)別。 另外胰島素對肝病、胰島素瘤、甲狀腺功能亢進(jìn)的診斷也有一定的意義。常見腫瘤標(biāo)志物及其檢測 胚胎性腫瘤標(biāo)志物 含糖物質(zhì)類標(biāo)志物 酶類標(biāo)志物 激素類標(biāo)志物胚胎性腫瘤標(biāo)志物 這一類腫瘤標(biāo)志物是指那些原本只能在胎盤期出現(xiàn)，但在機體發(fā)生腫瘤時，其基因表達(dá)被再度激活，從而重新再成年個體出現(xiàn)的蛋白，其常見的檢測標(biāo)志如下：CEA 原發(fā)性結(jié)腸癌，患者CEA升高者占45-90%. 胰腺癌、膽管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系腫瘤，陽性率5

8、0-70%。 結(jié)腸癌患者手術(shù)切除后1-3周內(nèi)血中CEA水平可降至正常水平。如術(shù)后CEA持續(xù)陽性，說明手術(shù)切除不完全或癌腫發(fā)生轉(zhuǎn)移，提示病人預(yù)后較差或者有復(fù)發(fā)的可能。 良性腫瘤、炎癥和退行性疾病，如結(jié)腸息肉、潰瘍性結(jié)腸炎、胰腺炎盒酒精性肝硬變病人CEA也有部分升高，但遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于惡性腫瘤，一般小于20g/L.所以測定CEA可作為良性與惡性腫瘤的鑒別診斷依據(jù)。 吸煙也可能導(dǎo)致CEA升高。AFP 原發(fā)性肝癌：AFP作為原發(fā)性肝癌重要指標(biāo)之一，特異性強，靈敏度高。因此AFP為十分有價值的臨床檢查及普查項目，陽性率達(dá)90%。血清含量大于400g/L作為原發(fā)性肝癌的診斷閾值。 孕婦血清AFP與胎兒狀態(tài) 當(dāng)胎兒

9、患低氧癥、宮內(nèi)死亡、遺傳缺陷、先天性神經(jīng)管畸形、無腦兒、脊柱裂等，母體血清AFP異常增高。 其他腫瘤 有報道指出，68%-92%卵黃囊腫瘤患者血清AFP上升含糖物質(zhì)類標(biāo)志物 CA125 是上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)志物 CA153 存在于多種腺癌內(nèi)，如乳腺癌、肺癌、肺胰癌及卵巢癌等，是檢測乳腺癌比較重要的抗原 CA199 通常作為胰腺癌和結(jié)、直腸癌的標(biāo)志物 CA50 是胰腺和結(jié)、直腸癌的標(biāo)志物 CA72-4 其檢測結(jié)果與CEA有互補作用，可用于檢測原發(fā)性乳癌、胃癌、直結(jié)腸癌以及卵巢癌患者殘余腫瘤細(xì)胞，可與CA-125聯(lián)合用于卵巢腫瘤的診斷及復(fù)發(fā)檢測，可與CA-199聯(lián)合應(yīng)用于胃癌的診斷以提高

10、陽性率，也可用于胃癌術(shù)后監(jiān)測早期復(fù)發(fā)。 CA242 可用于胃腸道惡性腫瘤病人的治療監(jiān)控和復(fù)發(fā)檢測。酶類標(biāo)志物 前列腺特異性抗原 PSA是前列腺癌的特異性標(biāo)志物，也是目前少數(shù)幾個器官特異性腫瘤標(biāo)志物之一。前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)的主要囊性腫瘤，血清PSA定量測定的陽性臨界值大于10g/L,此時前列腺癌的診斷特異性達(dá)90-97%。 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE） 對小細(xì)胞肺癌的診斷，鑒別診斷、病情判斷及療效的估計都有實際的意義。激素類標(biāo)志物 降鈣素 ：（1）甲狀腺髓樣癌 此種癌起源于甲狀腺濾泡旁細(xì)胞，可產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)，其中以降鈣素為主，患者血清降鈣素水平高于正常數(shù)十到數(shù)百倍。（2）肺小細(xì)胞癌

11、人絨毛膜促性腺激素（HCG） HCG測定對葡萄胎、絨癌的診斷和化療后的療效觀察，以及葡萄胎終止后的隨訪有重大意義，一般而言，良性葡萄胎、惡性葡萄胎、絨癌治療前HCG均增高，其升高順序為：絨癌惡性葡萄胎良性葡萄胎。常見傳染性疾病的免疫檢測 病毒性肝炎 HIV感染及艾滋?。ˋIDS） 嚴(yán)重急性呼吸綜合征病毒性肝炎 甲型病毒性肝炎 通過糞-口途徑傳播引起的急性傳染性肝炎，目前尚未發(fā)現(xiàn)有慢性病例。 乙型病毒性肝炎 是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝臟炎性損害，是我國當(dāng)前流行最廣泛、危害最嚴(yán)重的一種轉(zhuǎn)染病。乙肝常見免疫學(xué)指標(biāo)有：A、潛伏期,HBsAg陽性或伴有乙肝病毒脫氧核糖核酸聚合酶(HBVDNAP)

12、和HBsAg陽性。B、急性期， HBsAg，HBeAg,HBcAg,HBV-DNA, HBVDNAP，前S蛋白均可陽性。乙肝定量檢測的方法及其優(yōu)點 a. 檢測方法：目前有時間分辨，熒光定量PCR定量檢測，化學(xué)發(fā)光法。 由于乙肝病毒容易發(fā)生變異，再加上乙肝定性實驗的局限性，會出現(xiàn)假陰性結(jié)果，導(dǎo)致不能及時發(fā)現(xiàn)乙肝的感染，也就不能及時的得到治療，對醫(yī)護(hù)人員和其他的患者也存在被傳染的威脅。乙肝五項定量檢測目前最先進(jìn)的化學(xué)發(fā)光法，避免了假陰性和漏檢的問題，而且準(zhǔn)確，尤其對乙肝病人的療效觀察提供了依據(jù)，這是檢驗發(fā)展的趨勢。 乙肝五項定量檢測的獨特優(yōu)點： 一、對于乙肝患者而言： 1、通過定量檢測乙肝標(biāo)志物，

13、能直觀地顯示體內(nèi)五項指標(biāo)的具體情況，不再是簡單的“陰性”和“陽性”，有利于動態(tài)觀察病情，為選擇治療方案提供重要依據(jù)； 2、定量檢測方法更靈敏，能測出低水平復(fù)制的樣本，特別是“窗口期”的感染者，定量檢測法可以有效檢出，能減少漏診； 3、定量檢測的測定范圍更寬，定性檢測時候，高濃度的乙肝表面抗原樣本需要稀釋，否則會有假陰性出現(xiàn)，但是，定量檢測能有效檢出高濃度的乙肝表面抗原樣本。 二、對正常體檢者而言： 1、可反映HBV-抗體的濃度變化，有利于對機體免疫狀況進(jìn)行評估，對注射乙肝疫苗有指導(dǎo)意義。幾種常見的乙肝模式幾種少見模式病毒性肝炎 丙型病毒性肝炎 是由丙型肝炎即HCV感染所致。其傳播途徑與乙肝類似

14、，主要包括血液傳播、性接觸傳播、母嬰傳播、日常生活接觸等。其他檢測項目 臨床常見藥物的濃度檢測 1.抗心甙類：西地蘭、地高辛、洋地黃毒等； 2.抗癲癇藥：苯妥英、苯巴比妥、酰胺咪嗪、乙琥胺等； 3.三環(huán)類抗抑郁藥：丙咪嗪、去甲丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多慮平等； 4.茶堿：氨茶堿； 5.抗心律失常藥； 6.氨基甙類抗生素：鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素； 7.環(huán)孢素A。 腎上腺激素：兒茶酚胺類激素等 性激素測定：促黃體生成素、卵泡刺激素、垂體泌乳素、睪酮、孕酮、雌二醇。 內(nèi)分泌免疫分析：腺垂體激素、生長激素、促腎上腺皮質(zhì)激素等。 Part Part . .化學(xué)發(fā)光免疫檢測的特點化學(xué)

15、發(fā)光免疫檢測的特點 敏感度高，甚至超過RIA 精密度和準(zhǔn)確性均可與RIA相比 試劑穩(wěn)定，無毒害 測定耗時短 發(fā)展成自動化系統(tǒng) 有專家做過試驗，用化學(xué)發(fā)光法和放射免疫法同時測定60例甲胎蛋白（AFP）含量，結(jié)果表明，兩種方法的相關(guān)性良好（=0.995），但化學(xué)發(fā)光免疫法的精密度和準(zhǔn)確性均優(yōu)于放射免疫法。另外，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)具有發(fā)光檢測的高度敏感性，又具有免疫分析的高度特異性，化學(xué)發(fā)光試劑作為標(biāo)記物進(jìn)行定量檢測，其試劑具有穩(wěn)定性高和無毒性等優(yōu)點，可縮短測定時間，能滿足臨床的要求，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物已廣泛用于抗原、半抗原、抗體的檢測。 免疫學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展對精密度的要求越來越高，一般的酶免技術(shù)已逐漸無法適應(yīng)形勢需求。發(fā)光免疫技術(shù)70年以來得到快速發(fā)展，國際上已實現(xiàn)商品化，可以分為化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光等。謝謝！能量，通道，熒光物質(zhì)能量，通道，熒光物質(zhì)二、糖尿病的免疫學(xué)檢測 以下是臨床上常見的有關(guān)糖代謝紊亂的免疫分析指標(biāo)： 1. C肽 2.胰島素 3.胰島素抗體 4.谷氨酸脫羧酶抗體（GAD-Ab） 5.胰高血糖素常見傳染性疾病的免疫檢測 病毒性肝炎 HIV感染及艾滋?。ˋIDS） 嚴(yán)重急性呼吸綜合征幾種常見的乙