畜禽血液和病料采集技術(shù)

1、第一章畜禽血液和病料采集技術(shù)第一節(jié)畜禽血液采集技術(shù)一、要求：1、所有采血用具均應(yīng)事先以消毒、干燥處理；2、采血部位要進(jìn)行剪毛、清拭并按常規(guī)進(jìn)行消毒（先碘酊后酒精。3、懷疑傳染病時，采血過程要防止到處流散，檢后的殘余血液及所用器皿要進(jìn) 行消毒處理。4、需抗凝的要加入抗凝劑。常用的抗凝劑有：雙草酸鹽抗凝劑：草酸鉀0.6克;草酸俊1.2克;蒸儲水加至10 0毫升；溶解后，吸取0.5毫升，加入 供采血用的試管或小瓶中，置干燥箱內(nèi)（溫度不能超過80c，烘干備用（實(shí)際含草酸 鹽1 0毫克，可供5毫升全血抗凝用枸檬酸鈉6mg可使1ml血液不凝固，或配成3.8%的溶液。適用于血鈣的測 定和血沉測定時的抗凝。乙

2、二胺四乙酸二鈉（EDTA二鈉每10毫克可使5毫升全血 抗凝;或配成10% 的溶液，每2滴可使5毫升全血抗凝。肝素對血中有機(jī)成分和無機(jī)成分測定均無 影響,多用于科研。常用肝素鈉配成1ml內(nèi)含1mg （0.1%的水溶液，取0.1ml分裝 于 小試管或小青霉素瓶中，在80c以下烤干后備用，可使51 0ml血液不凝固。5、需分離血清的血液（不抗凝試管要靜置、斜放，便于血清晰出。6、注意安全。、家禽血樣的采集（一雞翅內(nèi)側(cè)靜脈采血1、器械準(zhǔn)備：酒精棉球；小試管或細(xì)塑料管，試管架；銀子；配57的尖的一次性 注射器。2、保定:手提保定。助手一手抓住兩只雞腿，一手抓雞翅根部，以拇指按壓靜脈 管。3、部位確定：雞

3、翅內(nèi)側(cè)腋靜脈，肉眼可見。4、操作:助手抓住雞翅根部，以拇指按壓靜脈管，使之充盈。術(shù)者左手大拇指捏 住雞翅內(nèi)側(cè)，余四指捏住雞翅外側(cè)，展平雞翅，右手持針，沿血管方向，于血管傍先刺入 皮下，然后再斜刺向血 管，抽取血液（此法避免拔針后出血過多。也可直接刺向血 管，抽取血液（采用此法，拔針后要用干棉球按壓數(shù)分鐘止血?；?者將雞翅擺平，直接 先將靜脈用針刺破，待血液流出后，用細(xì)塑 料管利用虹吸的原理吸取血液，事畢，用火 將細(xì)塑料管一頭封閉。（二雞心臟采血方法1操作要點(diǎn)：雞左側(cè)向上橫臥保定，拔去胸上部部分羽毛，尋找由胸骨走向肩胛白皮下大靜脈，心臟約在該靜脈的分支下側(cè)，有時用食指可摸到 心臟跳動。用酒精消毒

4、后，以碘酊標(biāo)記部位。針頭（7#刺入時，如觸及胸骨可稍拔出， 使針頭稍向右偏，避開胸骨，再將針頭向里刺入，邊刺邊抽動活塞，若刺入心臟，便有血 液涌入注射器，術(shù)畢，局部消毒。方法2操作要點(diǎn)：雞仰臥保定，雞頭部朝向術(shù)者，拔去胸上部少許羽毛，用手指在胸骨上 方、嗦囊下方摸得一凹窩，右手持針（7#,自胸骨上方凹窩斜向前下方心臟方向（雞的左側(cè)、術(shù)者的右側(cè) 刺入，邊刺邊抽動活塞，若刺入心臟，便有血液涌入注射器，術(shù)畢，局 部消毒。注意:此法（含方法1、2采血后，多會引起雞只死亡，僅適用于淘汰雞的采血。（三雞頭部靜脈竇采血1、器械準(zhǔn)備：酒精或碘酊棉球；小試管試管架;銀子;配5 -7#S針尖的一次性注 射器。2、

5、保定:助手一手抓雞的兩只腿，一手抓雞的兩翅，使頭部向上。術(shù)者左手食指 和中指夾住雞喙，大拇指壓住頸上部，以此固定頭部。3、部位確定：雞頭后部，枕骨大孔為刺入點(diǎn)。4、操作:雞只如上述方法確切保定后，枕骨大孔部少許拔毛，消毒,術(shù)者右手持針 自枕骨大孔進(jìn)針，針頭對準(zhǔn)喙尖，約與頸椎縱軸成45角，刺入約0.50.8cm （B雞只大小，刺入靜脈 竇后，針頭感覺無阻力 抽取血液，術(shù)畢消毒。注意:此法采血后，亦會引起雞只死亡，故適用于淘汰雞的采血。苗雞采血亦可 用此法。第二節(jié)畜禽病料采集技術(shù)一、樣品采集的原則采集檢測樣品是診斷檢測工作的重要內(nèi)容。采樣的時機(jī)是否適宜，樣品是否具有代表性，樣品處理、保存、運(yùn)送是否

6、合適及時，與檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性關(guān) 系極大。采集樣品時，需要符合 以下規(guī)定：1、適時采樣。根據(jù)檢測要求及檢測對象和檢驗(yàn)項(xiàng)目的不同，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r機(jī)十分重要。樣品是有時間要求的，應(yīng)嚴(yán)格按規(guī) 定時間采樣，有臨床癥狀需要作病 原分離的，樣品必須在病初的 發(fā)熱期或癥狀典型時采樣，病死的動物，應(yīng)立即采樣。2、合理采樣。根據(jù)診斷檢測的要求，須嚴(yán)格按照規(guī)定采集各種 足夠數(shù)量的樣品 外，不同疫病的需檢樣品各異，應(yīng)按可能的疫病 側(cè)重采樣。對未能確定為何種疫病 的,應(yīng)全面采樣。3、典型采樣。選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品，如有并發(fā)癥，還應(yīng)兼顧采樣。4、無菌采樣。采集檢驗(yàn)樣品除供病理組織學(xué)檢驗(yàn)

7、外還供病原學(xué)及血清學(xué)檢驗(yàn),供病原學(xué)及血清學(xué)檢驗(yàn)的樣品，必須無菌操作采樣，采樣用具、容器均須無菌處理，尸體剖檢需采集樣品的，先采樣后檢查，以免 人為污染樣品。5、適量采樣。采集樣品的數(shù)量要滿足診斷檢測的需要 ，并留有 余地，以備必要 時復(fù)檢使用。6、樣品處理。采集的樣品應(yīng)一種樣品一個容器，立即密封，根據(jù)樣品的性狀檢 驗(yàn)要求的不同，作暫時的冷藏、冷凍或其它處理。 供病毒學(xué)檢驗(yàn)的樣品，數(shù)小時內(nèi) 要送到實(shí)驗(yàn)室，只作冷藏處理，超過數(shù)小時的要冷凍處理，（凍結(jié)方法：可將樣品放入- 30c冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后再裝入有大小冰塊或干冰的冷藏瓶 （箱內(nèi)運(yùn)送，亦可將裝入 樣品的容器放入隔熱保溫瓶內(nèi)，再放入冰塊，然后按10

8、0g冰塊加入食鹽約35克，立 即將隔熱保溫瓶瓶口塞緊。瓶 內(nèi)溫度可達(dá)-21 C左右。供細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)或血清學(xué)檢驗(yàn) 的樣品，冷藏送實(shí)驗(yàn)室即可。 裝樣品的容器應(yīng)貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽要防止因凍 結(jié)而脫落， 標(biāo)簽標(biāo)明采集的時間、地點(diǎn)、號碼和樣品名稱，并附上發(fā)病、死亡等相關(guān)資料，盡快 送實(shí)驗(yàn)室。7、安全采樣。既要保護(hù)采樣人員，以要防止病原外泄，還要防止樣品受到污 染。8、樣品包裝。主要是密閉，防止樣品損壞、污染和外泄等意外 發(fā)生迅速送檢。應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，延誤送檢時間，會影響到檢測質(zhì)量和結(jié)果 的可靠性。二、血液樣品的采集1、病毒檢驗(yàn)用血液樣品。應(yīng)在動物發(fā)病初體溫升高期采集。血液樣品必須是脫纖血或是抗凝血?？?/p>

9、凝劑可選用肝素或 EDTA ,枸緣酸鈉對病毒有輕微毒性，一般 不宜采用。采血前，在真空采 血管或其它容器內(nèi)按每毫升血液加入 0.1%肝素1ml或 EDTA20 mg。采集的血液立即與抗凝劑充分混合，防止凝固。采脫纖血時,先在容 器內(nèi)加入適量小玻璃珠，加入血液后，反復(fù)振蕩，以便脫去血液纖維。 采集的血液經(jīng) 密封后貼上標(biāo)簽，以冷藏狀態(tài)立 即送實(shí)驗(yàn)室。必要時，可在血液中按每毫升加入青 霉素和鏈霉素 各5001000IU以抑制血源性可采血中污染的細(xì)菌。2、細(xì)菌檢驗(yàn)樣品。采血應(yīng)在動物發(fā)病初體溫升高或發(fā)病期，未經(jīng)藥物治療期間 采集。血液應(yīng)脫纖或加肝素抗凝劑 （或EDTA或枸緣酸鈉，但不可加入抗生素。采 集

10、的血液經(jīng)密封后貼上標(biāo)簽，以冷藏狀態(tài)立即送實(shí)驗(yàn)室，否則須置4c冰箱內(nèi)暫時保 存，但時間不宜過久，以免溶血。3、血清學(xué)檢驗(yàn)樣品。用作血清學(xué)檢驗(yàn)的樣品不加抗凝劑或脫纖處理。為保障血清質(zhì)量，一般情況下，空腹采血較好。采集的血 液貼上標(biāo)簽，室溫靜置待凝固后送 實(shí)驗(yàn)室，并盡快將自然析出的 血清或經(jīng)離心分離出的血清吸出，按需要分裝，再貼上 標(biāo)簽冷藏保存?zhèn)錂z。較長時間才檢驗(yàn)的，應(yīng)凍結(jié)保存，但不能反復(fù)凍融，否則抗體效 價下降。作血清學(xué)檢驗(yàn)的血液，在采血、運(yùn)送、分離 血清過程中，應(yīng)避免溶血，以免影 響檢驗(yàn)結(jié)果。采集雙份血清檢 測比較抗體效價變化的，第一份血清采于發(fā)病的初期 并作凍結(jié)保存，第二份血清采于第一份血清后

11、 34周，雙份血清同時送實(shí) 驗(yàn)室。4、寄生蟲 檢驗(yàn)樣品。因不同的血液寄生蟲在血液中出現(xiàn) 的時機(jī)及部位各不相同，因此需要根 據(jù)各種血液寄生蟲病的特點(diǎn)，取相應(yīng)時機(jī)及部位的血液制成血涂片，送實(shí)驗(yàn)室。三、組織樣品的采集組織樣品一般由撲殺動物或病死尸體剖中采集。從尸體采樣時，先剝?nèi)游镄?腹部皮膚，以無菌器械將腹腔打開，根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康?和生前疫病的初步診斷，無菌采集 不同的組織。1、病毒檢驗(yàn)樣品。作病毒檢驗(yàn)的組織，必須以無菌技術(shù)采集，組織應(yīng)分別放入 滅菌的容器內(nèi)并立即密封，貼上標(biāo)簽，放入冷藏 容器立即送實(shí)驗(yàn)室。如果時間較長 可作凍結(jié)狀態(tài)運(yùn)送，也可將組織塊浸泡在PH7.4左右的乳漢液或磷酸緩沖肉湯保護(hù) 液內(nèi)

12、，并按每毫升保護(hù)液加入青霉素、鏈霉素各 1000IU，然后放入冷 藏容器內(nèi)送實(shí) 驗(yàn)室02、細(xì)菌檢驗(yàn)樣品。供細(xì)菌檢驗(yàn)的組織樣品，應(yīng)新鮮并以無菌技 術(shù)采集。如遇 尸體已經(jīng)腐敗，某些疫病的致病菌仍可采集于長骨 或肋骨,從骨髓中分離細(xì)菌。 采 集的所有組織分別放入滅菌的容 器內(nèi)并立即密封，貼上標(biāo)簽，放入冷藏容器立即送實(shí) 驗(yàn)室。四、糞便樣品的采集1、病毒檢驗(yàn)樣品。分離病毒的糞便必須新鮮。少量采集時 ，以滅菌的棉拭子從 直腸深處或泄殖腔粘膜上蘸取糞便，并立即投入 滅菌的試管內(nèi)密封，或在試管內(nèi)加入 少量PH7.4的保護(hù)液再密封。貼上標(biāo)簽冷藏送實(shí)驗(yàn)室。2、細(xì)菌檢驗(yàn)樣品。作細(xì)菌檢驗(yàn)的糞便，最好在動物使用抗菌藥物

13、之前，從直腸 或泄殖腔粘膜上采集，采樣方法與供病毒檢驗(yàn)的 相同?？赏度霟o菌緩沖鹽水或肉湯 的指形管內(nèi)，貼上標(biāo)簽冷藏送 實(shí)驗(yàn)室。3、寄生蟲檢驗(yàn)樣品。糞便樣品應(yīng)選取新排出的或直接從直腸內(nèi) 采得，以保持 蟲體或蟲體節(jié)片及蟲卵的固有形態(tài)，一般寄生蟲檢驗(yàn)的糞便用量較多。采得的糞便 以冷藏不凍結(jié)狀態(tài)送實(shí)驗(yàn)室。第三節(jié)幾種畜禽疫病的樣品采集一、禽流感的樣品采集、保存和運(yùn)輸病毒主要在呼吸道粘膜細(xì)胞內(nèi)增殖。（一病禽1、至少從5只瀕死禽采集樣品。樣品包括：泄殖腔拭子和氣管 拭子（置于緩沖 液中各5個（小珍禽可采集新鮮糞便；氣管和肺的混樣5個,腸管及內(nèi)容物的混樣5 個;肝、脾、腎和腦等組織 樣品（不能混樣各5個。采集

14、方法:1泄殖腔棉拭子：將棉拭子插入肛門并旋轉(zhuǎn)，使糞便沾在拭子上，后放 在運(yùn)輸緩沖液中。2氣管棉拭子：活雞采樣時，將棉拭子插入活雞的氣管內(nèi)，輕輕擦 拭氣管壁并放入緩沖液中。 死亡動物采氣管樣品時，可在肺和氣管離體情況下進(jìn)行 采集,應(yīng)將棉拭子插入較深部位用力擦拭，并按上述方法將棉拭子放在運(yùn)輸緩沖液中。3糞便樣品：可從活禽市場采取新鮮糞便，用棉拭子沾取糞便，并 將采好的樣品放在運(yùn)輸緩沖液中。2、分別采集至少10個病雞的血樣（急性發(fā)病期血清。采集10只病禽的血樣， 使用一次性采血器，心臟或翅靜脈采血，每只禽采血樣2ml 3ml,經(jīng)離心或自然析出 血清后，將血清移到指形 管中。封好口，貼好標(biāo)簽。不同禽只的血樣不能混合。（二病死禽無發(fā)病禽時，可從死亡不久的病禽采樣，采樣要求同病禽。棉拭子單獨(dú)放入容器 容器中盛放含有抗菌素的PH值為7.07. 4的PBS液?？股氐倪x擇視當(dāng)?shù)厍闆r而 定，組織和氣管拭子 懸液中加入青霉素（20001U/mL、鏈霉素（2 mg /mL、慶大霉 素（50 口 g/mL制霉菌素（100001U/mL。但糞便和泄殖腔拭 子所用的