食品全氮的測定方法

1、食品全氮的測定方法（一）一、原理（微量凱氏定氮法）：蛋白質是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化 劑一同加熱消化， 使蛋白質分解， 其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出， 而樣 品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合生成硫酸銨。 然后堿化蒸餾使氨游離， 用硼酸 吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定。 根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)即為蛋白質 含量。其中濃硫酸在消化反應中起著強氧化劑的作用； 硫酸鉀與硫酸銅則可加速 蛋白質分解，縮短反應時間硫酸鉀能提高反應液溫度， 硫酸銅起催化劑作用還 可指示消化終點的到達以及下一步蒸餾時作為堿性反應的指示劑。二、試劑（所有試劑均用不含氨的蒸餾水配制）1. 硫酸銅2. 硫酸鉀3.

2、硫酸4.2%硼酸溶液5. 混合指示液： 1份 0.1%甲基紅乙醇溶液與 5份 0.1%溴甲酚綠乙醇溶液； 也可用 2份0.1%甲基紅乙醇溶液與 1份0.1%次甲基藍乙醇溶液； 以上指示 劑臨用時混合。6. 40% 氫氧化鈉溶液7 .0.05N 硫酸標準溶液或 0.05N 鹽酸標準溶液。三、操作方法：1. 樣品處理：精密稱取 0.2-2.0g 固體樣品或 2-5g 半固體樣品或吸 10-20ml 液體樣品（約相當?shù)?30-40mg） ,移入干燥的 100ml 定氮瓶中，加入 0.2g 硫酸銅，6g硫酸鉀及20ml硫酸（酵母類硫酸鉀4.85g,硫酸銅0.15g ）, 稍搖勻后于瓶口放一小漏斗， 將

3、瓶以 45度角斜支于三角支架上。 小心加 熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止后，加強火力，并保持瓶內液體 微沸（消化時應不時轉動凱氏燒瓶以便使內容物消化更完全） ，至液體呈 藍綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱 0.5h 。取下放冷，小心加入 20ml 水， 放冷后，移入 100ml 容量瓶中，并用少量水多次沖洗定氮瓶，洗液并入 容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。同時做試劑空白試驗。2. 裝好定氮裝置蒸餾（注意檢查裝置是否漏氣） ：首先通入冷凝水（下口進水,上口出水），三角瓶中加10ml 2%的硼酸（硼酸吸收液溫度不應超過40°C否則會減弱氨的吸收）和2滴混合指示劑。打開電源開始加熱，同時

4、打開左下端的排液閥，先用樣液潤洗吸管，然后吸取10ml樣液于小燒杯 內,打開左上端的進液閥，加入樣液,用小量筒量取10ml 40%的NAOH倒 入加樣小燒杯中，慢慢加入到樣品閥內，用少量蒸餾水沖洗小燒杯（不超 過10ml）倒入樣品閥，關閉樣品閥、關閉排液閥。加少許水密封樣品閥， 將右下端的滴管插入三角瓶液面以下，待三角瓶中溶液變綠開始計時，5 分鐘后用蒸餾水沖洗滴管頭，將滴管頭拿出液面但仍在三角瓶內再蒸餾1分鐘（為了接下來方便清洗，可在沖洗滴管頭時關閉電源）。3. 清洗蒸餾液：打開左下端的排液閥，用吸耳球吹滴管，將廢液排出；取三 角瓶加120-150ml蒸餾水,將滴管頭浸入蒸餾水中（接觸瓶底）

5、；關閉兩閥, 待溫度降下來后，由于負壓作用將三角瓶中水倒吸入儀器，快吸完時要及 時將滴管拿出三角瓶，以免液體回流至三角瓶，打開排液閥，清洗完成。4. 滴定:取下蒸餾瓶，以0.5N硫酸或0.1N鹽酸標準溶液滴定至灰色或粉紫 色為終點。一、計算：x=（V1V2）c °014 100m 91式中：X樣品中全氮含量，%V 1樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，mlV 2試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準溶液體積，ml0.014 1N硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度M 樣品的質量，gC鹽酸標準液的濃度，mol/L五、注意事項:1. 一定要先通冷凝水再加熱，等待產(chǎn)生負壓時要關閉兩個閥門。2. 加樣液時一定要同時

6、打開廢液閥。3. 加完樣后需迅速關閉樣品閥和廢液閥并接上吸收三角瓶。4滴定終點判斷需參照吸收前加指示劑后的顏色，切忌滴定過量。若為甲 基紅一溴甲酚綠混合液滴定至灰色為終點；若為甲基紅一次甲基監(jiān)終點 為粉紫色。5. 若需蛋白質含量還需用上述的全氮含量乘以蛋白質系數(shù)（6.25 ）。6混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。7. 蒸餾前若加堿量不足，消化液呈藍色不生成氫氧化銅沉淀，此時需再增加氫氧化鈉用量。8. 蒸餾前給水蒸氣發(fā)生器內裝水至 2/3 容積處，加甲基橙或甲基紅指示劑 數(shù)滴及硫酸數(shù)毫升以使其始終保持酸性，這樣可以避免水中的氨被蒸出 而影響測定結果。9. 加堿

7、量要足量，操作要迅速；漏斗應采用水封措施，以免氨由此逸出損 失。10. 樣品稱取時避免沾在硝化瓶壁上，以免硝化不完全，影響結果。11. 注意硝化時間和溫度，由于硝化所用電爐溫度不均，為避免硝化程度不 均，盡量使硝化瓶位于火力較大處，也可消化過程中轉動硝化瓶，調換 位置，以獲得相同硝化條件。12. 用于幫助硝化的試劑加入的次序不能顛倒，一定將硫酸銅、硫酸鉀混勻 后加入，然后再加硫酸。13. 蒸餾裝置要保持良好的氣密性， 每次試驗前檢查氣密性 （尤其廢液閥處）。14. 硼酸接收液一定要沒住蒸餾管出口，防止氨氣逸出，影響測定結果。15. 向樣品室加樣品時，一定保證蒸餾裝置的溫度大于樣品室溫度，否則容

8、 易發(fā)生倒吸，將樣品擠出樣品室外，影響測定結果。16. 定氮儀內每添加三次水就要加一次硫酸，每次加 5ml 硫酸，并加 5滴甲 基橙指示劑。參照： GB5009.5 食品全氮測定方法（二）使用儀器：HYP-10 系列消化裝置自動定氮儀 KDN-103F 蒸餾裝置一、 操作方法 :消化前準備a. 將抽氣泵的螺口同水咀的內螺紋聯(lián)接牢，然后把毒氣罩的膠管接在抽氣泵 的橫出口處。抽氣泵一端膠管通至下水道（出水膠管長度不得超出30cm并不準彎曲），開足水咀，使抽氣泵有足夠的吸力。b. 接通消化爐上電源插座，開電源開頭，按需要設定溫度。消化操作a. 樣品處理：精密稱取 0.2-2.0g 固體樣品或 2-5

9、g 半固體樣品或吸 10-20ml 液體樣品（約相當?shù)?30-40mg）, 移入干燥的消化管中，加入 0.2g 硫酸銅， 6g 硫酸鉀及 20ml 硫酸（酵母類硫酸鉀 4.85g, 硫酸銅 0.15g ）。b. 將裝有試樣的消化管放在消化爐支架上，套上毒氣罩，壓下毒氣罩鎖住上 面拉鉤。c. 把支架連同裝有試樣的消化管儀器移到電熱爐上保證消化管在電爐中心， 設定溫度在420C -500 C保持消化管中液體連續(xù)沸騰，沸酸在瓶頸部下冷凝回流。 待溶液消煮至無微小碳粒、呈藍綠色時繼續(xù)消煮 30-40min 。d. 消化結束，戴上手套，將毒氣罩及消化爐支架連同消化管一同移回消化爐 支架托座上，冷卻至室溫

10、。冷卻過程中，毒氣罩必須保持吸氣狀態(tài)，防止廢氣溢 出。蒸餾蒸餾前準備a. 接通進水口、排水口，注意排水膠管出水口不得高于儀器底平面，同時關閉排水閥門。b. 接通電源，電源線內必須有良好的接地線，同時必須保持同儀器相同。c. 進液膠管分別插入蒸餾水筒和40%NAO液筒。蒸餾操作a. 開水龍頭，使自來水經(jīng)過給水口進入冷凝管。 注意水流量以保證冷凝管起到冷卻作用為止。b. 開總電源開關，待紅色水位指示燈亮，按下蒸汽按鈕待蒸汽導出管放出蒸汽，再按蒸汽按鈕停止加熱。c. 在蒸餾導出管托架上，放上三角瓶中加 10ml 2%勺硼酸（硼酸吸收液溫度不應超過40C否則會減弱氨的吸收）和2滴混合指示劑的錐形瓶。抬

11、起 錐形瓶托架使蒸餾導出管的末端浸入接收液內。d. 在消化完全冷卻后的消化管內，逐個加 10ml左右蒸餾水稀釋樣品，如微量蒸餾，需將冷卻后的消化液移至定容瓶內定容，然后按需移液至消化 管內。e. 向下壓左側手柄，將消化管套在防濺管密封圈上，稍加旋轉使保持接口密封，拉下防護罩。f. 加堿：按下堿按鈕，NAO溶液量必須至蒸餾液堿性顏色變黑為止。（堿液量調節(jié)，時間為秒，先按設置按鈕，待加堿時間顯示窗數(shù)字閃爍，設定 所需時間。從1秒至20秒，按所需量調節(jié)后在加堿時只要按下按鈕即可） 一般設定為2秒一次，每個樣品加堿4-5次。注意：如儀器連續(xù)數(shù)天停止使用，必須先吸空膠管和堿泵內的堿液，然 后用10%勺硼酸溶液過濾膠管和堿泵，再使用蒸餾水過濾一次即可。g. 按下汽按鈕，開始蒸餾，到時或到量時自動停止。用洗瓶將蒸餾水沖洗接收管。取下錐形瓶。（全量蒸餾接收液體體積約為150ml;微量蒸餾接 收液體體積約為100ml）。接收液量調節(jié)，時間為=分，先按設置按鈕， 再按蒸汽按鈕，待蒸汽時間顯示窗數(shù)字閃爍，設定所需時間從1分至20分，按所需量調節(jié)后再蒸餾時只要按一下即可。一般設定為7mi n。滴定吸收氨后的吸收液，用標定后的鹽酸溶液進行滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛易?色為終點?？瞻诇y定用0.1g