人脂聯(lián)素ADP酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒利用說(shuō)明書(shū)

1、人脂聯(lián)素(ADP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒利用說(shuō)明書(shū)本試劑僅供研究利用人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中脂聯(lián)素(ADP)的含量。 試劑盒性能：1 .樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為以上。2 .批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)別離小于9%和11%檢測(cè)范圍：請(qǐng)來(lái)電咨詢(xún)保留條件及有效期：1 .試劑盒保留：；2-8<>2 .有效期：6個(gè)月注意事項(xiàng)：1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中掏出應(yīng)在室溫平穩(wěn)15-30分鐘后方可利用，酶標(biāo)包被 板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保留。2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不阻礙 結(jié)果。3. 各步加樣均應(yīng)利用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以幸免實(shí)驗(yàn)誤差

2、。一次加樣時(shí)刻最好操縱在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦利用排槍加樣。4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量太高(樣 本0D值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的0D值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必然倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(XnX5)。5. 封板膜只限一次性利用，以幸免交義污染。6. 底物請(qǐng)避光保留。7. 嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必需以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8. 所有樣品，洗滌液和各類(lèi)廢棄物都應(yīng)按傳染物處置。9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人脂聯(lián)素(ADP)水平。

3、用純化的人脂 聯(lián)素(ADP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂聯(lián) 素(ADP),再與HRP標(biāo)記的脂聯(lián)素(ADP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合 物，通過(guò)完全洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在 酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂聯(lián)素(ADP)呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(0D值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人脂聯(lián) 素(ADP)濃度。樣本處置及要求：1 .血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右. (2000-3000轉(zhuǎn)/分)。 認(rèn)真搜集上清，保留進(jìn)程中如顯現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2 .血漿：應(yīng)

4、依照標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘 后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真搜集上清，保留進(jìn)程中如有 沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3 .尿液：用無(wú)菌管搜集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真搜集上清, 保留進(jìn)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參如實(shí)行。4 .細(xì)胞培育上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右 (2000-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真搜集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS稀釋細(xì)胞 懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出 細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分

5、)。認(rèn)真搜集上清。保留進(jìn) 程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5 .組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入必然量的PBS,。用液氮迅速冷凍 保留備用。標(biāo)本融化后仍然維持2-8的溫度。加入必然量的PBS,用手工或 勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真搜集上 清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。6 .標(biāo)本搜集后及早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 假設(shè)不能馬上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C保留，但應(yīng)幸免反復(fù)凍融.7 .不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書(shū)1份1份封

6、板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1X481X962-8保存標(biāo)準(zhǔn)品：2700ng/LXI瓶XI瓶2-8保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液XI瓶XI瓶2-8保存酶標(biāo)試劑3 mlXl 瓶6 ml X 1 瓶2-8保存樣品稀釋液3 ml XI 瓶6 ml X 1 瓶2-8保存顯色劑A液3 mlXl 瓶6 ml X 1 瓶2-8保存顯色劑B液3 ml XI 瓶6 ml X 1 瓶2-8保存終止液3ml X 1 瓶6ml X 1 瓶2-8保存濃縮洗滌液(20ml X 20) XI 瓶(20ml X 30 倍)X 1 瓶2-8保存操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一

7、、第二孔中別離加標(biāo)準(zhǔn)品100 U1,然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋 液50U1,混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 口1別離加到第三孔和第 四孔，再在第三、第四孔別離加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 ul,混勻；然后在第三孔 和第四孔中先各取50 ul棄掉，再各取50 ul別離加到第五、第六孔中，再 在第五、第六孔中別離加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻；混勻后從第五、第六孔 中各取50 ul別離加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中別離加標(biāo)準(zhǔn)品 稀釋液50U1,混勻后從第七、第八孔中別離取50 口1加到第九、第十孔中, 再在第九第十孔別離加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 ul,混勻后從第九第十孔中各取 50 P 1棄掉

8、。（稀釋后各孔加樣量都為50 P1,濃度別離為1800ng/L, 1200ng/L , 600ng/L, 300ng/L, 150ng/L）o2. 力口樣：別離設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 Ml,然后再加待測(cè)樣品10 P 1 （樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于 酶標(biāo)板孔底部，盡可能不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37c溫育30分鐘。4. 配液：將30 （48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水30 （48T的20倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：警惕揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50 口1,空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50U1,再加入顯色劑B50U1,輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50 口1,終止反映（現(xiàn)在藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（0D值）。測(cè) 定應(yīng)在加終止液后15分鐘之內(nèi)