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1、實(shí)驗(yàn)原理酒精發(fā)酵是在厭氧條件下,己糖分解為乙醇并釋放出二氧化碳。酒精發(fā)酵的類型有3種:即通過(guò)EM%徑的酵母菌酒精發(fā)酵、通過(guò)HM磁徑的細(xì)菌酒精發(fā)酵 和通過(guò)ED途徑的細(xì)菌酒精發(fā)酵酵母菌通過(guò) EM%徑分解己糖生成丙酮酸,在厭 氧條件和微酸性下,丙酮酸則繼續(xù)分解為乙醇。淀粉類原料的酒精發(fā)酵主要有先糖化后發(fā)酵工藝和邊糖化變發(fā)酵工藝(即同步糖化發(fā)酵工藝)2 種,前者發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)、酒精濃度低;后者發(fā)酵時(shí)間短,酒精濃度高, 而且由于沒(méi)有終產(chǎn)物抑制,糖化酶用量也較少,因此該工藝是酒精發(fā)酵研究的重要方向之一。本實(shí)驗(yàn)即采用的是同步糖化發(fā)酵工藝。液化酶即a-淀粉酶,可將淀粉液化成糊精及少量麥芽糖和葡萄糖。糖化酶是一種淀
2、粉外切酶,能把淀粉從非還原性未端水解a-1.4 葡萄糖苷鍵產(chǎn)生葡萄糖,也能緩慢水解a-1.6 葡萄糖苷鍵,轉(zhuǎn)化為葡萄糖。同時(shí)也能水解糊精,糖原的非還原末端釋放 B-D-葡萄糖。實(shí)驗(yàn)步驟稱取過(guò)40目篩或80目篩干燥的木薯粉1453g,以料水比1: 2的比例加入 2906g60c的蒸儲(chǔ)水,按10U/g木薯粉的量加入40000U/ml液化酶400uL,攪拌 混勻后于60下保溫30min 并不停攪拌。轉(zhuǎn)入滅菌鍋中迅速升溫到95,保溫液化1h,期間不停攪拌,盡量不要讓木薯粉濃醪中的固體顆粒粘連于容器壁上。然后降溫至50-60,取10ml 全渣液備用測(cè)總糖,將液化后的全渣液過(guò)濾,制的濾液測(cè)總糖。根據(jù)測(cè)得濾
3、液的總糖濃度調(diào)濾液的總糖濃度至270g/L, 于 121下滅菌30min,然后冷卻至33c左右。按250U/g木薯粉的量加入100000U的糖 化酶。按接種量為10%接種釀酒酵母GGSF16至液化糖化后的醪液中,同時(shí)加 入 3g/L 尿素,分別取樣10mL 置于兩個(gè)三角瓶中用于測(cè)定初總糖和初還原糖。余下的分裝到10三角瓶,每瓶約300ml,分別接上發(fā)酵栓,并于33c發(fā)酵,轉(zhuǎn) 速為160r/min,搖床培養(yǎng)72h,期間每隔6h取樣分析。發(fā)酵結(jié)束后,測(cè)定細(xì)胞 數(shù)、OD值、總糖含量、還原糖含量、酒精度、葡萄糖含量。木薯粉酒精發(fā)酵工 藝流程圖如下糖化酶250u/mL尿素3g/L>270g/L121c 30min33 c圖4-1木薯粉酒精發(fā)酵工藝流程圖Fig.4-1 the process
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