動物組織石蠟切片制作ppt課件

1、動物組織石蠟切片制造動物組織石蠟切片制造 科研儀器管理中心科研儀器管理中心實驗目的實驗目的 制造實驗動物的組織切片并染色，掌握動制造實驗動物的組織切片并染色，掌握動物組織制片技術(shù)物組織制片技術(shù) 實驗用品1 1動物的組織。動物的組織。2 2器材和儀器：切片機、展片儀、毛筆、載器材和儀器：切片機、展片儀、毛筆、載玻片、蓋玻片、烤箱、顯微鏡。玻片、蓋玻片、烤箱、顯微鏡。3 3試劑：試劑：60%60%乙醇、乙醇、70%70%乙醇、乙醇、80%80%乙醇、乙醇、90%90%乙醇、乙醇、95%95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、石蠟、乙醇、無水乙醇、二甲苯、石蠟、中性樹膠。中性樹膠。方案一方案一:病理石蠟切片的

2、制造病理石蠟切片的制造一石蠟組織塊制造一石蠟組織塊制造1 1取材。取材。2 2固定。固定。3 3脫水、透明及浸蠟詳細步驟見表。脫水、透明及浸蠟詳細步驟見表。4 4包埋包埋步步 驟驟 操作項目操作項目 小小 鼠鼠 大大 鼠鼠 家家 兔兔（1 1）60%60%乙醇乙醇15min15min20min20min30min30min（2 2）70%70%乙醇乙醇15min15min20min20min30min30min（3 3）80%80%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（4 4）90%90%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（5

3、5）95%95%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（6 6）95%95%乙醇乙醇20min20min20min20min30min30min（7 7）無水乙醇無水乙醇20min20min30min30min40min40min（8 8）無水乙醇無水乙醇20min20min30min30min40min40min（9 9） 二甲苯二甲苯 5min5min 8min8min10min10min（1010） 二甲苯二甲苯 3min3min 5min5min 5min5min（1111） 石蠟石蠟10min10min15min15min20min20min（1212）

4、 石蠟石蠟20min20min25min25min30min30min（1313） 石蠟石蠟30min30min30min30min40min40min本卷須知普通本質(zhì)性臟器的組織及腫瘤組織應把最大切面朝下包埋；食管、胃、普通本質(zhì)性臟器的組織及腫瘤組織應把最大切面朝下包埋；食管、胃、腸等組織須將管壁橫斷面朝下包埋，假設(shè)在同一蠟塊中包埋數(shù)塊管壁腸等組織須將管壁橫斷面朝下包埋，假設(shè)在同一蠟塊中包埋數(shù)塊管壁組織時，應平行橫埋且黏膜面內(nèi)膜的方向應一致，以便切片及察組織時，應平行橫埋且黏膜面內(nèi)膜的方向應一致，以便切片及察看?？?。同一蠟塊包埋多個組織塊時，組織的性質(zhì)應一樣，方向要一致，不同一蠟塊包埋多個組

5、織塊時，組織的性質(zhì)應一樣，方向要一致，不能把大小、厚薄差別懸殊的組織包埋在一同，組織塊間的間隔不能太能把大小、厚薄差別懸殊的組織包埋在一同，組織塊間的間隔不能太大。大。皮膚、骨等難切組織及需求延續(xù)切片的組織都應單獨包埋。皮膚、骨等難切組織及需求延續(xù)切片的組織都應單獨包埋。神經(jīng)、脊髓及需求定向包埋的組織應留意組織塊的相互關(guān)系。神經(jīng)、脊髓及需求定向包埋的組織應留意組織塊的相互關(guān)系。包埋尤其在室溫較低的情況下操作應迅速，防止組織塊變涼、包埋尤其在室溫較低的情況下操作應迅速，防止組織塊變涼、蠟液凝結(jié)及出現(xiàn)氣泡，組織塊與蠟液不能很好凝固定在一同，導致組蠟液凝結(jié)及出現(xiàn)氣泡，組織塊與蠟液不能很好凝固定在一同

6、，導致組織與蠟分別?？椗c蠟分別。遇有管腔或空洞標本與小標本同埋一個蠟塊時，不能將小標本放入遇有管腔或空洞標本與小標本同埋一個蠟塊時，不能將小標本放入其他標本的管腔或空洞內(nèi)。其他標本的管腔或空洞內(nèi)。二石蠟切片制造 用切片機將石蠟包埋的組織塊蠟塊制成適宜厚度的切用切片機將石蠟包埋的組織塊蠟塊制成適宜厚度的切片，是目前在病理學科中最常用的一種制片方法。切片厚片，是目前在病理學科中最常用的一種制片方法。切片厚度為普通度為普通46m46m?！厩衅暗念A備】【切片前的預備】1 1、修切蠟塊、修切蠟塊 切片前應先修塊，即切去組織周圍過多的切片前應先修塊，即切去組織周圍過多的石蠟，普通留下約石蠟，普通留下約2

7、mm2mm寬度的蠟邊為宜。留意蠟塊不能留寬度的蠟邊為宜。留意蠟塊不能留得太窄，在切片時易損壞組織；蠟邊不能留得太多，否那得太窄，在切片時易損壞組織；蠟邊不能留得太多，否那么影響展片。室溫過高時，可將修好的蠟塊放到冰箱中冷么影響展片。室溫過高時，可將修好的蠟塊放到冰箱中冷卻一定時間。卻一定時間。2 2、切片用品預備、切片用品預備1 1切片刀：預先磨好切片刀備用或切片前改換新的一切片刀：預先磨好切片刀備用或切片前改換新的一次性切片。次性切片。2 2載物片：載物片經(jīng)清潔液、載物片：載物片經(jīng)清潔液、95%95%乙醇處置后備用。乙醇處置后備用。3 3展片儀：參與溫水，接通電源，調(diào)整溫度。展片儀：參與溫水

8、，接通電源，調(diào)整溫度。4 4其他用品：預備好毛筆、記號筆、鑷子、冰塊等。其他用品：預備好毛筆、記號筆、鑷子、冰塊等?！厩衅圃爝^程】【切片制造過程】以運用旋轉(zhuǎn)式切片機石蠟切片為例：以運用旋轉(zhuǎn)式切片機石蠟切片為例：1 1將切片刀裝在刀架上，后將蠟塊裝在切片機固定安裝上。調(diào)整蠟塊與刀至將切片刀裝在刀架上，后將蠟塊裝在切片機固定安裝上。調(diào)整蠟塊與刀至適宜位置刀刃與蠟塊切面呈適宜位置刀刃與蠟塊切面呈5 5夾角旋轉(zhuǎn)式切片機切取組織，是由下向上夾角旋轉(zhuǎn)式切片機切取組織，是由下向上切，為得到完好的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂痕，應將組織硬脆難切的部分切，為得到完好的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂痕，應將組織硬脆難切的

9、部分放在上端如皮膚組織，應將表皮部分向上。而胃腸等組織，應將漿膜面朝放在上端如皮膚組織，應將表皮部分向上。而胃腸等組織，應將漿膜面朝上。上。2 2左手執(zhí)手筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機旋轉(zhuǎn)輪。先粗切標本，直到暴顯露組織最大左手執(zhí)手筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機旋轉(zhuǎn)輪。先粗切標本，直到暴顯露組織最大切面但對小標本不要修切得太多，以免將整個組織塊修切掉。再延續(xù)旋切面但對小標本不要修切得太多，以免將整個組織塊修切掉。再延續(xù)旋轉(zhuǎn)切出蠟帶，左手持毛筆將蠟片帶下端悄然托起，右手用鑷子夾起蠟帶上端，轉(zhuǎn)切出蠟帶，左手持毛筆將蠟片帶下端悄然托起，右手用鑷子夾起蠟帶上端，正面向上放入展片儀水盒內(nèi)，展片溫度根據(jù)運用的石蠟熔點進展調(diào)整，普通

10、正面向上放入展片儀水盒內(nèi)，展片溫度根據(jù)運用的石蠟熔點進展調(diào)整，普通水溫為水溫為4545左右，待蠟片帶中的組織展平后，即可進展分片和撈片。對于展左右，待蠟片帶中的組織展平后，即可進展分片和撈片。對于展片困難的切片經(jīng)片困難的切片經(jīng)30%30%的乙醇初展后，再用載玻片撈起蠟帶放人展片儀水盒內(nèi)可的乙醇初展后，再用載玻片撈起蠟帶放人展片儀水盒內(nèi)可使切片更易展平。在夏季切片時可用冰塊冷卻切片刀和組織塊，減少切片刀使切片更易展平。在夏季切片時可用冰塊冷卻切片刀和組織塊，減少切片刀與組織塊在切片過程中產(chǎn)生的熱時，使石蠟堅持適宜的硬度以利于切片。與組織塊在切片過程中產(chǎn)生的熱時，使石蠟堅持適宜的硬度以利于切片。3

11、 3撈起切片后，寫上編號。撈片時留意切片的位置，普通切片的中心位于載撈起切片后，寫上編號。撈片時留意切片的位置，普通切片的中心位于載物片右側(cè)物片右側(cè)1/31/3與與2/32/3交界處為佳，并留意整齊美觀。交界處為佳，并留意整齊美觀。4 4烤箱烤箱6060左右烘烤切片左右烘烤切片30min30min，對血凝塊和皮膚組織應及時烤片，烤片溫，對血凝塊和皮膚組織應及時烤片，烤片溫度應稍低；腦組織切片撈出后直立晾干，再烤片，否那么產(chǎn)生氣泡。度應稍低；腦組織切片撈出后直立晾干，再烤片，否那么產(chǎn)生氣泡。 方案二 石蠟切片的制造1616微米。制造大批的或是延續(xù)的切片。長期保管。微米。制造大批的或是延續(xù)的切片。

12、長期保管。一、切片前的預備：一、切片前的預備：1 1、恒溫水浴鍋首先預熱至、恒溫水浴鍋首先預熱至35403540。2 2、蠟塊整修，暴露組織并修平，減少刀的磨。、蠟塊整修，暴露組織并修平，減少刀的磨。3 3載玻片應事先洗滌干凈，無油膩和不透明景象。涂粘片載玻片應事先洗滌干凈，無油膩和不透明景象。涂粘片劑。劑。4 4、將鋒利的刀片，調(diào)整角度和位置，以、將鋒利的刀片，調(diào)整角度和位置，以2020-30-30為佳。為佳。5 5、備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。、備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。方案二方案二 石蠟切片的制造石蠟切片的制造二、切片的步驟：1、將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內(nèi)，2、調(diào)整蠟塊

13、組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架3、根據(jù)需求調(diào)整切片厚度。4、修整切片，直到切出完好的最大組織切面后，再行切制。5、切下的切片帶，用毛筆從刀口向上挑起，拉下切片帶方案二方案二 石蠟切片的制造石蠟切片的制造三、切片的本卷須知三、切片的本卷須知1 1、切片質(zhì)量的好壞，與技術(shù)熟練程度和切片機、切片質(zhì)量的好壞，與技術(shù)熟練程度和切片機、切片刀的好壞有關(guān)外。切片刀的好壞有關(guān)外。2 2、切片機的各個零件和螺絲應旋緊，否那么將會、切片機的各個零件和螺絲應旋緊，否那么將會產(chǎn)生震動。產(chǎn)生震動。3 3、在搖動切片機時，用力要求均勻一致，不宜過、在搖動切片機時，用力要求均勻一致，不宜過重過猛，否那么呵斥切片厚薄不均。

14、或空洞景象。重過猛，否那么呵斥切片厚薄不均?；蚩斩淳跋蟆? 4、在夏秋季節(jié)進展切片時，應運用冰塊加強冷卻，、在夏秋季節(jié)進展切片時，應運用冰塊加強冷卻，可堅持石蠟的硬度，減少切片的褶皺。可堅持石蠟的硬度，減少切片的褶皺。 方案二方案二 石蠟切片的制造石蠟切片的制造四、貼片：四、貼片：1 1、將單張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，、將單張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，鋪于恒溫水中光亮的一面朝下立刻用毛筆悄鋪于恒溫水中光亮的一面朝下立刻用毛筆悄然拉展以切片無皺褶為最好。然拉展以切片無皺褶為最好。2 2、待切片在恒溫水內(nèi)充分攤開展平后，將載玻片、待切片在恒溫水內(nèi)充分攤開展平后，將載玻片垂直插入水

15、中輕靠切片，隨即將玻片直立提起，垂直插入水中輕靠切片，隨即將玻片直立提起，撥正切片位置。撥正切片位置。3 3、用鉛筆在玻片的毛玻璃上寫上標本編號，字要、用鉛筆在玻片的毛玻璃上寫上標本編號，字要寫得小而清楚、端正。寫得小而清楚、端正。4 4、貼好的切片置于、貼好的切片置于6060恒溫箱內(nèi)枯燥恒溫箱內(nèi)枯燥2 2小時，蛋小時，蛋白質(zhì)凝固后即可染色。白質(zhì)凝固后即可染色。實驗實驗1 1 石蠟切片的制做技術(shù)石蠟切片的制做技術(shù) 試劑與器材：甲醛，酒精，二甲苯，蘇木精，伊試劑與器材：甲醛，酒精，二甲苯，蘇木精，伊紅，中性樹膠，雙面刀片，蠟板，鑷子，濾紙，紅，中性樹膠，雙面刀片，蠟板，鑷子，濾紙，200ml20

16、0ml容量瓶廣口、玻璃標本缸，載玻片，蓋容量瓶廣口、玻璃標本缸，載玻片，蓋玻片，染色缸，毛筆，新穎雞蛋，甘油玻片，染色缸，毛筆，新穎雞蛋，甘油空閑時間：觀賞冰凍切片的制做空閑時間：觀賞冰凍切片的制做石蠟切片的制做程序詳細過程請查看講義石蠟切片的制做程序詳細過程請查看講義組織取材組織取材2 2毫米厚度，固定于福爾馬林毫米厚度，固定于福爾馬林2 2小時。小時。組織流水沖洗組織流水沖洗1 12 2小時。小時。實驗實驗1 1 石蠟切片的制做技術(shù)石蠟切片的制做技術(shù) 7070酒精酒精2 24 4小時。小時。8585酒精酒精2 24 4小時。小時。9595酒精酒精2 23 3小時。小時。9595酒精酒精1

17、12 2小時。小時。100100酒精酒精1 12 2小時。小時。100100酒精酒精0.50.51 1小時。小時。100100酒精：二甲苯酒精：二甲苯1 1：1 10.50.51 1小時。小時。二甲苯二甲苯20302030分鐘。分鐘。二甲苯二甲苯10201020分鐘。分鐘。浸蠟浸蠟4040分鐘。分鐘。浸蠟浸蠟4040分鐘。分鐘。組織包埋。組織包埋。蠟塊整修。切片。貼好的切片置于蠟塊整修。切片。貼好的切片置于6060恒溫箱內(nèi)恒溫箱內(nèi)枯燥枯燥2 2小時。小時。實驗實驗2 HE2 HE染色技術(shù)染色技術(shù) 二甲苯二甲苯脫蠟脫蠟 10 10分鐘。分鐘。二甲苯二甲苯脫蠟脫蠟 10 10分鐘。分鐘。100100酒精酒精225 5分鐘。分鐘。100100酒精酒精225 5分鐘。分鐘。9595酒精酒精1 12 2分鐘。分鐘。9090酒精酒精1 12 2分鐘。分鐘。8585酒精酒精1 12 2分鐘。分鐘。自來水洗自來水洗 片刻片刻蒸餾水蒸餾水 片刻片刻蘇木素蘇木素 1015 1015分鐘分鐘自來水洗自來水洗 12 12分鐘分鐘1%1%鹽酸酒精分化鹽酸酒精分化 0.51 0.51分