薄層色譜TLC的基本原理

1、精品薄層色譜（點(diǎn)板）的基本原理 薄層色譜，或稱(chēng)薄層層析（thin layer chromatography）,是以涂布于支持板上的支持物作為 固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分 離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。這是一種快速 分離諸如脂肪酸、類(lèi)固醇、氨基酸、核昔酸、生物堿 及其他多種物質(zhì)的特別有效的層析方法，從50年代發(fā) 展起來(lái)至今，仍被廣泛采用。（一）基本原理薄層層析是把支持物均勻涂布于支持板（常用玻璃板， 也可用滌綸布等）上形成薄層，然后用相應(yīng)的溶劑進(jìn)行 展開(kāi)。薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分 為薄層吸附層析（吸附劑）、薄層分配層析（纖維素）、薄 層離子交換層析（離子交

2、換劑）、薄層凝膠層析（分子篩 凝膠）等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相 的薄層吸附層析。吸附是表面的一個(gè)重要性質(zhì)。任何兩個(gè)相都可以形成 表面，吸附就是其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解于其中的溶 質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體 與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能 發(fā)生吸附現(xiàn)象。物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因?yàn)楣腆w表 面的分子（離子或原子）和固體內(nèi)部分子所受的吸引力 不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對(duì)稱(chēng) 的，其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的 力是不對(duì)稱(chēng)的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用 力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分 子在運(yùn)動(dòng)

3、中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響， 就會(huì)被吸引而停留下來(lái)。吸附過(guò)程是可逆的，被吸附 物在一定條件下可以解吸出來(lái)。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附 于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離 開(kāi)此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡，稱(chēng)為吸附平 衡。吸附層析過(guò)程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸 附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程。例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力 與分配系數(shù)的不同，使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著 吸附劑移動(dòng)時(shí)，帶著樣品中的各組分一起移動(dòng)，同時(shí) 發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各 組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對(duì)它們的吸 附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點(diǎn)。如 作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開(kāi)，則可以根 據(jù)這些已知化合物的Rf值（后面介紹Rf值）對(duì)各斑 點(diǎn)的組分進(jìn)行鑒定，同時(shí)也可以進(jìn)一步采用某些方法 加以定量。薄層層析有許多優(yōu)點(diǎn)：它保持了操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、 顯色容易等特點(diǎn)，同時(shí)展開(kāi)速率快，一般僅需15-20 分鐘；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高 10100倍，它既適用于只有001 g的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備 用，而且還可以使用如濃硫酸、濃