人降鈣素基因相關肽CGRPELISA試劑盒使用方法

1、人降鈣素基因相關肽CGRPELISA試劑盒使用方法本試劑盒僅供研究使用.檢測范圍：96T2 ng/L -60 ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本降鈣素基因相關肽CGRP含量.實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人降鈣素基因相關肽CGRP水平.用純化的人降鈣素基因相關肽CGRP抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次參加 降鈣素基因相關肽CGRP,再與HRP標記的降鈣素基因相關肽 CGRP抗體結合,形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的降

2、鈣素基因相關肽 CGRP呈正相關.用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度OD值,通過標準曲線計算樣品 中人降鈣素基因相關肽CGRP濃度. 試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml X 1 瓶7終止液6ml x 1 瓶2酶標試劑6ml X 1 瓶8標準品(120 ng/L)0.5ml X 1 瓶3酶標包被板12孔X 8條9標準品稀釋液1.5ml X 1 瓶4樣品稀釋液6ml x 1 瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml x 1 瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml x 1/瓶12密封袋1個標本要求1 .標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗.假設不能馬上進行試驗,可將標本放于-

3、20 C保存,但應防止反復凍融2 .不能檢測含 NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的HRP活性.操作步驟1 .標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可根據(jù)以下圖表在小試管中進行稀釋.60 ng/L5號標準品150 d的原倍標準品參加150 M標準品稀釋液30 ng/L4號標準品150 d的5號標準品參加150 M標準品稀釋液15 ng/L3號標準品150 d的4號標準品參加150 M標準品稀釋液7.5 ng/L2號標準品150 d的3號標準品參加150 M標準品稀釋液3.75 ng/L1號標準品150 d的2號標準品參加150 M標準品稀釋液2 .加樣：分別設空白孔空白對照孔

4、不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同、標準孔、待測樣品孔.在酶標包被板上標準品準確加樣50小待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40 M,然后再加待測樣品10 d 樣品最終稀釋度為 5倍.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.3 .溫育：用封板膜封板后置 37 c溫育30分鐘.4 .配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸儲水 20倍稀釋后備用5 .洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此 重復5次,拍干.6 .加酶：每孔參加酶標試劑 50 4,空白孔除外.7 .溫育:操作同3.8 .洗滌：操作同5.9 . 顯色：每孔先參加顯色劑A50U,再參加顯色劑

5、B50M,輕輕震蕩混勻,37c避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液 50人 終止反響此時藍色立轉黃色.11 .測定：以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度 OD值.測定應在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進行.操作程序總結：準備試劑,樣品和標準品參加準備好的樣品和標準品,37匕反響30分鐘洗板5次,參加酶標試劑,37c反響30分鐘洗板5次,參加顯色液A, B, 37c顯色10分鐘4/參加終止液15分鐘之內(nèi)讀0D值計算計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線

6、回歸方程式, 將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度.考前須知1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘前方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.2 .濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果.3 .各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以防止試驗誤差.一次加樣時間最好 限制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.4 .請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔.如標本中待測物質(zhì)含量過高樣本OD值大于標準品孔第一孔的 OD值,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù) n倍后再測定,計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)XnX5o5 .封板膜只限一次性使用,以防止交叉污染.6 .底物請避光保存.7 .嚴格根據(jù)說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準8