ABO血型鑒定操作規(guī)程

1、1.02.03.04.05.05.15.26.06.16.26.36.46.56.66.77.07.1ABO血型鑒定操作規(guī)程原理根據(jù)紅細(xì)胞上和血清或血漿中有無 A抗原和或B抗原及其抗體,將血型分為A型、B型、AB型及O型.可利用紅細(xì)胞凝集試驗,通過正、反定型鑒定ABO血型.正定型正定是指用抗-A、抗-B血清來檢測受檢紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原和或B抗原；反定型反定 是指用 A1型、B型紅細(xì)胞來檢測受檢血清或血漿中有無相 應(yīng)的抗-A和或抗-B.原始樣品要求5 mL靜脈全血.樣品容器和添加劑真空試管,EDTA.K2抗凝/普通試管,不抗凝.檢測環(huán)境要求溫度：18c27C,濕度：30%70%.所需材料和

2、設(shè)備設(shè)備 普通離心機(jī)、免疫血液學(xué)離心機(jī)、顯微鏡、恒溫水箱、定時器.材料抗-A、抗-B血清、ABO標(biāo)準(zhǔn)抗原紅細(xì)胞試劑、移液器、加樣吸頭、生理鹽水 NS、干凈空試管.檢測操作過程將受檢標(biāo)本以1000g離心5min,使標(biāo)本血漿/血清與紅細(xì)胞別離,吸取紅細(xì)胞,用 NS 洗滌三次后,配成 3%5%紅細(xì)胞懸液.取6支小試管,分別標(biāo)記 -'A"、-B'、自身"、“Ac'： "Bc'："O&在濃、-B'管中分別參加抗-A和抗-B血清各50 L ,其余管參加受檢血漿/血清各 100 L .在-'A"、-B&

3、#39;、自身管中參加受檢者 3%5%紅細(xì)胞懸液各 50L ,搖勻.在"Ac'： "Bc'："OCf中分另J參加 Ai、B、O紅細(xì)胞試劑各 50 L ,搖勻.1000g離心15sec,輕輕懸浮紅細(xì)胞,觀察結(jié)果并記錄.根據(jù)實驗需要,除室溫下觀察結(jié)果外,另可增加在4C、37c下觀察結(jié)果.結(jié)果判斷凝集強度判斷標(biāo)準(zhǔn)見表 1.表1凝集強度判斷標(biāo)準(zhǔn)表凝集強度判斷標(biāo)準(zhǔn)4+紅細(xì)胞凝集成一大塊,液體背景透明,無游離紅細(xì)胞3+數(shù)個大凝集塊,液體背景透明,無游離紅細(xì)胞2+有很多小凝集塊,液體背景透明,無游離紅細(xì)胞1+有許多很小的凝集塊,肉眼可見,液體背景不透明,有游離紅

4、細(xì)胞+微小的凝集塊,肉眼很難看清,需要用顯微鏡觀察.或0無凝集,無溶血,全是游離紅細(xì)胞MF混合凝集外觀,鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而大局部是游離紅細(xì)胞pH局部溶血H完全溶血7.2ABO血型結(jié)果判斷見表2：表2 2血型結(jié)果判斷表反定型定正定型AcBcOc自身對照血型抗-A血清血抗-B血清血十一一十一一A一 +一一一B +十一一O十十一一一一AB注：午表示凝集或溶血；“一表示不凝集.7.37.48.09.0正反定型不一致、ABO抗原減弱、抗-A或抗-B減弱、O細(xì)胞凝集時,排除人為操作 錯誤后,執(zhí)行?疑難血型鑒定操作規(guī)程?進(jìn)行最終確認(rèn).根據(jù)上述判斷標(biāo)準(zhǔn),作出結(jié)論并記錄在?免疫血液學(xué)檢查實驗記錄?.結(jié)果

5、報告根據(jù)實驗結(jié)果,打印?免疫血液學(xué)實驗報告?.報告的形式為：A型/B型/O型/AB型.實驗結(jié)果解釋實驗結(jié)果為 A型、B型、AB型,O型,說明受檢者 ABO血型分別屬于 A型、B型、 AB型,O型.紅細(xì)胞上分別有 A抗原、B抗原、皆有 A抗原和B抗原、皆無 A抗 原和B抗原；血漿中分別有抗-B、抗-A、抗-AB、皆無抗-A(B).10.0質(zhì)量限制當(dāng)受檢標(biāo)本與正、反定型試劑反響,凝集強度少于2+時,取標(biāo)準(zhǔn)抗-A、抗-B或A、B、O紅細(xì)胞與正、反定型試劑反響,以驗證試劑效能是否下降11.1 考前須知11.2 試管必須清潔、枯燥,預(yù)防溶血.11.3 加樣順序一般先加血清,再加紅細(xì)胞懸液,以便容易核實是

6、否漏加血清.11.4 分型血清效價太低,抗原抗體比例不適當(dāng),可使反響不明顯誤判為陰性反響.11.5 用立即試管法可能不能測出亞型如Ax,需延長作用時間.11.6 觀察結(jié)果時既要看有無凝集,更要注意凝集強度,此有助于亞型、類 B或cisAB的發(fā)現(xiàn).11.7 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解,容易誤判為不凝集；局部溶血時,可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體,也會造成不凝集.11.8 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點過少如亞型或抗原性減弱多見于白血病或惡性腫瘤以及類B或cisAB等,易被誤判為不凝集.11.9 ABO正反定型不一致常見原因11.9.1 分型血清效價太低,親和力不強.11.9.2 漏加、錯加試劑或標(biāo)本,試劑

7、被污染或失效.11.9.3 紅細(xì)胞懸液過濃或過淡,抗原抗體比例不適當(dāng),使反響不明顯誤判為陰性結(jié)果.11.9.4 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點過少如亞型或抗原性減弱多見于白血病或惡性腫瘤以及類B或cisAB等.11.9.5 受檢者血清蛋白紊亂高球蛋白血癥或?qū)嶒灉囟冗^高,常引起細(xì)胞呈緡錢狀排列.11.9.6 受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A或抗-B,如丙種球蛋白缺乏癥.11.9.7 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解,誤判為不凝集；局部溶血時,可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體.11.9.8 由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因.11.9.9 血清中有意外抗體,如抗-I等,常干擾定型.11.9.

8、10 患者近期曾輸過異型血,使其血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物,定型時顯示混合外觀凝集現(xiàn)象.11.9.11 嵌合體血型,體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞,定型時顯示混合外觀凝集現(xiàn)象.11.9.12 獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用,紅細(xì)胞可獲得類B的活性.11.9.13 藥物等因素的影響：藥物、右旋糖酊及靜脈注射某些造影劑聚集而類似凝集.11.9.14 老年人血清中抗體水平大幅度下降.11.9.15 新生兒尚未形成 ABO同種抗體,故三個月內(nèi)的新生兒只要求做正定型來確定血型.11.10 紅細(xì)胞在保存期內(nèi)會逐漸變?yōu)榘导t色,只要其未被細(xì)菌污染,抗原性不受任何影響.每次使用前,檢查試劑有無明顯溶血發(fā)生

9、,明顯溶血者棄掉.11.11 標(biāo)本保存不當(dāng)、試劑過期變質(zhì)、試劑被污染、不同批號的試劑混用、離心力或離心時間不符合要求、孵育時間不準(zhǔn)確、孵育溫度未達(dá)試劑實驗要求等均可出現(xiàn)較大的變異.12.0相關(guān)文件單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑說明書ABO標(biāo)準(zhǔn)抗原紅細(xì)胞試劑說明書全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版臨床輸血技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中國輸血技術(shù)操作標(biāo)準(zhǔn)1997年版為什么ABO血型鑒定要正、反定型都做？原因如下：正定型屬于細(xì)胞抗原定型,反定型屬于血清抗體定型.ABO血型鑒定必須正、反定型都要做,有相互印證的作用.由于單做正定型來鑒定ABO血型,在某些情況下不可靠,易造成 ABO血型誤判.如：1 .抗-A、抗-B血清效價低時

10、試劑失效、被污染或被稀釋,可使正定型反響不明顯誤判為陰 性反響.那么 A、B、AB型會誤判為 O型.2 .受檢者紅細(xì)胞上抗原位點過少如亞型或抗原性減弱多見于白血病或惡性腫瘤,可使 正定型反響不明顯誤判為陰性反響.那么A、B、AB型會誤判為 O型.3 .各種原因引起的紅細(xì)胞溶解,誤判為不凝集；局部溶血時,可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體.可使正定型反響不明顯誤判為陰性反響.那么 A、B、AB型會誤判為 O型.4 .由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集.那么 A、B、O型會誤判為 AB型.5 .獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用,紅細(xì)胞可獲得 類B的活性.那么 A型 會誤判為AB型.ABO血型誤判,對于臨床輸血來說風(fēng)險極大,會造成 ABO血型異型輸血,易引起急性溶血 性輸血反響的發(fā)生,對患者的生命平安造成威脅.ABO血型鑒定要正、反定型都