基因工程試題A(5)

1、基因工程試題A(5)基因工程試題A一、名詞解釋(每題2分，共20分)1、轉(zhuǎn)染：2、質(zhì)粒不親和性：3、cDNA文庫：4、RACE:5 基因工程：6、RT-PCR7、插入失活：8、SD序列:9、穿梭質(zhì)粒載體：10、多克隆位點(diǎn)：二、選擇題(每題1分，共15分)1 ()基因工程操作的三大基本元件是：(I供體II受體III 載體IV抗體V 配體)A I + II + IIIB I + III + IVC II + III + IVD II + IV + VE III + IV + V2 ()基因工程的單元操作順序是A增，轉(zhuǎn)，檢，切，接B切，接，轉(zhuǎn)，增，檢C接，轉(zhuǎn)，增，檢，切D檢，切，接，增，轉(zhuǎn)E切，接，

2、增，轉(zhuǎn)，檢3 () 生物工程的上游技術(shù)是A基因工程及分離工程B基因工程及發(fā)酵工程C基因工程及酶工程D基因工程及細(xì)胞工程E基因工程及蛋白質(zhì)工程4() 下列對逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確的是：A依賴于RNA勺DNA5合酶或稱為RNA旨導(dǎo)的DNA5合酶B依賴于cDNA勺DNA5合酶或稱為cDNA旨導(dǎo)的DNA5合酶C依賴于DNA勺DNA5合酶或稱為DNA旨導(dǎo)的DNA5合酶D依賴于RNA勺RNA5合酶或稱為rNA指導(dǎo)的RNA5合酶5()下列對限制性內(nèi)切酶描述正確的是A限制性內(nèi)切酶可識別任一的 DNAff列B使用限制性內(nèi)切酶時，有時可出現(xiàn)星活性C限制性內(nèi)切酶可識別堿基數(shù)不超過 5個D限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生都是黏

3、性末端6 ( )T4 -DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是A 2' -OH 和 5' -PB 2' -OH 和 3' -PC 3' -OH 和 2' -PD 3' -OH 和 5' -PE 5' -OH 和 3' -P7 ()下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯誤的是A連接反應(yīng)的最佳溫度為12-16CB連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C連接反應(yīng)緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD連接酶通常應(yīng)過量2-5倍E DTT在反應(yīng)中可加也可不加8 ()下列哪種克隆載體對外源 DNA勺容載

4、量最大？A質(zhì)粒B黏粒C酵母人工染色體(YAC)D入噬菌體9 ()載體的功能是(I運(yùn)送外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞 II為外源基因提 供復(fù)制能力III為外源基因提供整合能力)A IB I + IIC I + IIID II + IIIE I + II + III10 () 考斯質(zhì)粒(cosmid)是一種A天然質(zhì)粒載體B由人-DNA的cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C能裂解受體細(xì)胞的烈性載體D具有溶原性質(zhì)的載體E能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體11() 下列有關(guān)基因的描述，錯誤的是A蛋白質(zhì)是基因表達(dá)唯一的產(chǎn)物B基因是DNA!上具有編碼功能的片段C基因也可以是RNAD基因突變不一定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)12

5、 ()關(guān)于cDNA勺最正確的提法是：A 同mRNA£補(bǔ)的單鏈 DNA B 同mRNAT補(bǔ)的雙鏈 DNAC以mRNAJ模板合成的雙鏈DNA D 以上都正確13 ()某一重組DNA ( 6.2 kb )的載體部分有兩個SmaI酶切位點(diǎn)。用SmaI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的 SmaI酶切位點(diǎn)共有個個個個5 4 3 2A B c D14 ()同一種質(zhì)粒DNA以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率 是：A OC DNA>SC DNP>LDNA B SC DNA>L DNA>OC DNA C L DNA&

6、gt;OC DNA>SC DNA D SC DNA>OC DNA>L DNA15（） cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是A成功率高B不含內(nèi)含子C操作簡便D表達(dá)產(chǎn)物可以分泌E能糾正密碼子的偏愛性三、簡答題（每題5分，共25分）1、什么是包涵體？2、PC阪應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過程是什么？3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？四、論述題（每題10分，共40分）1簡述載體構(gòu)建的一般過程2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么？3如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？ 4試述3' RAC豉

7、術(shù)原理和方法基因工程試題標(biāo)準(zhǔn)答案及評分標(biāo)準(zhǔn)A一、選擇題（每題1分，共15分）1、 A 2、A 3、A 4、 A 5、B 6、D 7、E 8、C 9、 E 10、B11、A 12、 C 13、D 14、B 15、 B二、名詞解釋（每題2分，共20分）1、轉(zhuǎn)染：專指感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞捕獲和表 達(dá)噬菌體DNA分子的生命過程。2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下， 兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn) 錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克 隆的集合。4、RACE :是一種通過PCR進(jìn)行cDNA末端快 速克隆的技術(shù)，是以 mRNA

8、為模板反轉(zhuǎn)錄成 cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個特異位 點(diǎn)到3或5端之間未知序列的方法。5、基因工程：在分子水平上的進(jìn)行的遺傳操作， 指將一種或多種微生物的基因或基因組提取出 來，或人工合成基因，按著人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán) 密的設(shè)計，經(jīng)過體外加工重組，轉(zhuǎn)移到另一種生 物體的細(xì)胞內(nèi)，使之能在受體細(xì)胞遺傳并獲得新 的遺傳性狀的技術(shù)。6、RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRNA,以寡 聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一 對引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、Insert inaction:即插入失活，基因工程載體上 的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制 性內(nèi)切酶的單一酶

9、切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限 制性內(nèi)切酶處理，并將外源 DNA片段插入該位 點(diǎn)，則插入的外源DNA片段將破壞原有基因的 讀碼框，往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無法翻譯 表達(dá)，或即使翻譯表達(dá)，形成的也是喪失了原有 生物活性的蛋白質(zhì)，這一現(xiàn)象稱為插入失活。 8、S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合 位點(diǎn)上，含有一個轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖 體RNA 3 '末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由 Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為 Shine Dalgarno序列，簡稱S-D序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩 種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同 宿主細(xì)胞中存活

10、和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS :指載體上人工合成的含有緊密排列 的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片段。三、簡答題（共25分，每題5分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時，常常以不溶性蛋白 聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵 體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達(dá)時的普 遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中 間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過程 是什么？PCR反應(yīng)體系所要求的條件：a、被分離的 目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的 DNA引 物（約20個堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶 如：TagDNA聚合酶。

11、c、dNTP。d、作為模板 的目的DNA序列，E無菌水，F(xiàn),緩沖液PCR反應(yīng)體系的基本反應(yīng)過程：預(yù)變性、 變性、退火、延伸、復(fù)延伸。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA樣品的純度。DNA的甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時間。DNA分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什 么？能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立和穩(wěn)定的自我 復(fù)制具有合適的限制內(nèi)切酶位點(diǎn)具有合適的選擇標(biāo)記基因5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)：證實了 DNA是遺傳物質(zhì)揭示了 DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半 保

12、留復(fù)制機(jī)理遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA切割DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問答題（每題10分，共40分）1簡述載體構(gòu)建的一般過程A目的基因分析（1） ORF分析（2）酶切位 點(diǎn)分析B載體選擇與分析（1）多克隆位點(diǎn)分析（2） 抗性標(biāo)記分析（3）啟動子與其他篩選標(biāo)記分析C連接體系與連接時間確定2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么？優(yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本 低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知 識清楚，對其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了 解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實踐，大腸桿菌

13、已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系，有多 種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進(jìn) 行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點(diǎn)：在通常情況下，細(xì)菌的 RNA聚合酶 不能識別真核的啟動子；許多真核基因的蛋白質(zhì) 產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊 和組裝，而細(xì)菌中通常并沒有這樣的修飾機(jī)制， 從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn) 物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達(dá) 的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識別， 并 被當(dāng)做“異已分子”降解掉。3如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？提高啟動子強(qiáng)度縮短啟動子同克隆基因間距離高效的翻譯起始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)提高質(zhì)粒拷貝數(shù)及穩(wěn)定性用以下方法提高翻譯水平：調(diào)整 SD序列與 AUG間的距離用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基增加mRNA的穩(wěn)定性的減輕細(xì)胞的代謝 負(fù)荷：誘導(dǎo)表達(dá)表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段 原核序列，表達(dá)融合蛋白采用某種突變菌株 表達(dá)分泌蛋白質(zhì)4試述3, RACE技術(shù)原理和方法PCR用于擴(kuò)增代表mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點(diǎn)與 其3'或5'末端之間區(qū)域的部分cDNA稱為快 速擴(kuò)增cDNA末端技術(shù)。如果已敲目的 mRNA 的一片段鏈內(nèi)短序列，據(jù)此或設(shè)計基因特異引 物，用原先存在的poly(A)尾(3末端)或附加 的同聚尾(5'末端)互補(bǔ)的序列做末端引物