遺傳學(xué)實驗講義目錄

1、遺傳學(xué)實驗講義目錄一 減數(shù)分裂二 果蠅的飼養(yǎng)與形態(tài)觀察三 果蠅的單因子實驗四 果蠅的二對因子的自由組合五 果蠅的三點試驗六 果蠅的伴性遺傳七 果蠅唾腺染色體八 X染色質(zhì)的觀察九 小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察十 植物染色體標(biāo)本的制備（去壁低滲法）十一植物染色體GiemsaN帶技術(shù)十二植物染色體的核型分析實驗一減數(shù)分裂一實驗?zāi)康模和ㄟ^實驗熟練掌握減數(shù)分裂時期的主要特征，及染色體行為的動態(tài)變化，學(xué)習(xí)制片技術(shù)。二實驗原理：在高等生物中雌雄性細(xì)胞形成過程中，首先是由有性組織，如植物的花藥和胚珠、動物的精巢和卵巢中的某些細(xì)胞分化為性母細(xì)胞（2n），這些細(xì)胞再進(jìn)行連續(xù)兩次的細(xì)胞分離過程，最終形成個小孢

2、子或精細(xì)胞，或分別形成一個大孢子或卵細(xì)胞和三個退化的極體（1n）。減數(shù)分裂過程的主要特點是，連續(xù)兩次核分裂，而染色體僅復(fù)制一次，最后形成的四個子核，每個核僅含有單倍的染色體數(shù)目，即染色體數(shù)減少一半；其次，前期特別長，而且變化復(fù)雜，分為細(xì)線期、偶線期、雙線期、終變期等，其中包括同源染色體的配對、交換及分離等。在減數(shù)分裂過程中，通過對染色體形態(tài)和數(shù)量的動態(tài)變化的觀察，可為遺傳學(xué)研究中遠(yuǎn)緣雜種的分析，染色體工程中的異系鑒別，常規(guī)的染色體組型分析以及遺傳學(xué)的三個基本規(guī)律的論證，提供直接或間接的依據(jù)。三實驗用品： 材料：玉米雄花序，蝗蟲精巢等。 用品：鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、吸水紙等。 藥品：改良

3、苯酚品紅等。四實驗方法： 玉米花藥涂片：取合適大小玉米花蕾，放到載玻片上將玉米花冠剝開，使花藥顯露，去除其余部分，滴一滴改良苯酚品紅于載玻片上，使花藥浸在染液中，然后用解剖針輕壓花藥，使花粉母細(xì)胞擠出，用鑷子將花藥壁去除掉后，染色分鐘，加蓋玻片。在蓋玻片上復(fù)一層吸水紙，用手輕輕下壓，但勿使蓋片移動，即可鏡檢，從不同的壓片中觀察減數(shù)分裂不同時期及染色體動態(tài)?；认x精巢的壓片：用鑷子夾取很小一段管狀精巢于載玻片上，然后滴加一滴改良苯酚品紅染色分鐘，加蓋玻片，在酒精燈上過次火，在蓋玻片上復(fù)一層吸水紙，用手輕輕下壓，但勿使蓋片移動，再用鉛筆的膠皮頭輕輕敲打幾下，即可鏡檢，可以觀察減數(shù)分裂的各時期，以及精

4、子的形成過程。五作業(yè)：繪出你看到的前期分裂圖，并寫出這是什么時期的圖像。說明減數(shù)分裂的過程，它和有絲分裂有何不同？減數(shù)分裂在生物進(jìn)化中有什么意義？實驗二果蠅的飼養(yǎng)與形態(tài)觀察一 實驗?zāi)康模?. 觀察幾種常見品系的果蠅，熟練掌握雌雄果蠅的鑒別。2. 了解果蠅的生活史及飼養(yǎng)方法。二 實驗原理：1.果蠅的生活史： 果蠅屬于昆蟲綱、雙翅目，與家蠅是不同的種。果蠅具有繁殖率高、飼養(yǎng)簡單、生活史短的特點，它的生活史包括卵幼蟲蛹成蟲。果蠅的生活周期長短與溫度關(guān)系很密切，30以上的溫度能使果蠅不育和死亡，低溫則使它生活周期延長，同時生活力也減低，果蠅培養(yǎng)的最適合溫度2025。10152025卵幼蟲幼蟲成蟲57天

5、18天8天6.3天天4.2天 2.果蠅的雌雄區(qū)別與觀察：果蠅有雌雄之分，幼蟲期區(qū)別較難，成蟲區(qū)別容易。雄性的腹部環(huán)紋節(jié)，末端鈍而圓，顏色深。第一隊腳的跗節(jié)前端表面有黑色鬃毛流蘇，稱性梳。雌性腹部環(huán)紋節(jié)，末端尖，顏色淺，跗節(jié)前端無黑色鬃毛流蘇。雌雄方法觀察項目雌蠅雄蠅肉眼鑒別解下剖觀鏡察腹部較大較小膨大呈橢圓形，尾端較尖圓筒形，尾端較鈍腹背側(cè)有黑色橫紋57條，粗細(xì)均勻有黑色橫紋35條，末端一條特別粗，尾端呈黑色腹部6個腹片4個腹片性梳無第一對跗節(jié)有性梳 3.果蠅的飼養(yǎng)：果蠅在水果攤或果園?？梢姷?，但它并不是以水果為生，而是食生長在水果上的酵母菌，因此實驗室內(nèi)凡能發(fā)酵的基質(zhì)，均可作為果蠅的飼養(yǎng)物質(zhì)

6、。我們實驗室常用的是玉米粉飼養(yǎng)法。300ml 體系中需加的成分：A: 糖18.6g瓊脂1.86g 水108ml 。B: 玉米粉25.2g酵母粉2.10g水108ml。A和B混合加熱成糊狀后，加1.5ml丙酸，即可分裝到培養(yǎng)瓶中。三實驗材料及用品：材料：各種品系果蠅。2. 用具：麻醉管，解剖鏡等。3. 藥品：乙醚等。四實驗方法：把果蠅轉(zhuǎn)入麻醉瓶中，塞上滴有乙醚的棉塞，待果蠅全部昏迷后，倒在解剖鏡的白瓷板上進(jìn)行觀察。對不需再培養(yǎng)的果蠅（如只進(jìn)行性狀觀察的果蠅），可以深度麻醉，致死也無妨（果蠅翅膀外展45角，說明果蠅已死亡）。觀察果蠅的形狀特點，如：眼型、顏色、體色、翅形、性梳等形態(tài)特征。五作業(yè)：1

7、. 畫出雌、雄果蠅腹部和背面簡圖。2. 列表說明野生型與相應(yīng)突變型異同。實驗三 果蠅的單因子實驗一 實驗?zāi)康模?. 理解分離定律的原理。2. 掌握果蠅的雜交技術(shù)。3. 記錄交配結(jié)果和掌握統(tǒng)計處理方法。二實驗原理： 一對基因在雜合狀態(tài)中保持相對的獨立性，而在配子形成時，又按原樣分離到不同的配子中去。理論上配子分離比是1:1，子二代基因型分離比是1:2:1，若顯性完全，子二代表型分離比是3:1。這就是分離定律。三實驗材料及用品：1. 材料：長翅果蠅 +/+；殘翅果蠅 vg/vg。2. 用具：麻醉管，解剖鏡等。3. 藥品：乙醚等。四實驗方法：1. 選野生型和殘翅果蠅為親本，做正交和反交組合。雌蠅一定

8、要選處女蠅。處女蠅在實驗前23天陸續(xù)收集，數(shù)目多少根據(jù)需要而定。2. 把長翅果蠅和殘翅果蠅進(jìn)行雜交，正交與反交各一管。即：長翅（） 殘翅（）；長翅（） 殘翅（）。（1）首先把長翅處女蠅倒出麻醉，挑出56只移到雜交管中。（2）其次把殘翅果蠅倒出麻醉，在解剖鏡下，仔細(xì)挑出56只雄蠅，移到上述雜交瓶中。（3）貼好標(biāo)簽： （正交）P: +/+ vg/vg() ()月 日姓名 雜交管放到23溫箱中培養(yǎng)。 反交與正交方法一樣。3. 78天后，倒去親本果蠅。4. 再過45天，F(xiàn)1成蠅出現(xiàn)，觀察F1翅膀，連續(xù)檢查23天。5. 麻醉F1成蠅，移出56對果蠅，放到另一培養(yǎng)管內(nèi)。這里雌蠅無須處女蠅，在23溫箱中培養(yǎng)

9、（反交同樣做一管）。6.78天后，移去F1親本。7.再過45天，F(xiàn)2成蠅出現(xiàn)，開始觀察。連續(xù)統(tǒng)計78天。被統(tǒng)計過的果蠅放到死蠅盛留器中。五實驗結(jié)果：填寫下列表格 F1 觀察結(jié)果統(tǒng)計日期長翅殘翅殘翅長翅長翅數(shù)殘翅數(shù)長翅數(shù)殘翅數(shù)合計2 觀察結(jié)果統(tǒng)計日期長翅殘翅殘翅長翅長翅數(shù)殘翅數(shù)長翅數(shù)殘翅數(shù)合計2 測驗 長翅（）（正交、反交合并）殘翅（vg）（正交、反交合并）合 計實驗觀察數(shù)（O）預(yù)期數(shù)（：）（C）偏差（OC）（OC）2C自由度n2（OC）2C查2表實驗四 果蠅的二對因子的自由組合一 實驗?zāi)康模?. 了解兩對基因的雜交方法。2. 記錄交配結(jié)果和掌握統(tǒng)計處理方法。3. 正確認(rèn)識二對基因自由

10、組合的原理。二 實驗原理： 位于非同源染色體上的兩對基因，它們所決定的兩對相對性狀在雜種第二代是自由組合的。因為根據(jù)孟德爾第二定律，一對基因的分離與另一對（或另幾對）基因的分離是獨立的，所以一對基因所決定的性狀在雜種第二代是3:1之比，而兩對不相互連鎖的基因所決定的性狀，在雜種第二代就呈9:3:3:1之比。三 實驗材料及用品：1. 材料：黑檀體突變型，ebony（e）位于第三染色體;殘翅突變型，vestigial（vg）位于第二染色體。2. 用具：解剖鏡，麻醉管，解剖針等。3. 藥品：乙醚等。四實驗方法：1. 收集雌果蠅品系的處女蠅。2. 準(zhǔn)備好培養(yǎng)基，把已麻醉的殘翅、果蠅和黑檀體、果蠅，按正

11、、反交方式，分別放入不同培養(yǎng)管內(nèi)，進(jìn)行雜交，貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽形式如下： +ee × vgvg+ 日期姓名 vgvg+ × +ee 日期姓名367天后，見到有F1幼蟲出現(xiàn)，可除去親本（除干凈?。?再過34天，檢查F1成蠅的性狀，應(yīng)該是灰體、長翅（正、反交相同）。若性狀不符，表明實驗有差錯，不能再進(jìn)行下去。發(fā)生差錯的原因可能是親本雌果蠅不是處女蠅；F1幼蟲出現(xiàn)后親本未倒干凈；雜交時雄蠅選擇有誤；以及親本原種不純等等。5按原來的正、反交各選56對F1成蠅（、），放到新的培養(yǎng)管，繼續(xù)飼養(yǎng)（此時不需要處女蠅）。667天后，除去F1代親本。7再過34天，F(xiàn)2代成蠅出現(xiàn)，麻醉后（可以深度麻

12、醉）倒在白瓷板上，進(jìn)行統(tǒng)計，每隔兩天統(tǒng)計一次，連續(xù)統(tǒng)計67天（當(dāng)F3出現(xiàn)就失去意義了）。五 實驗結(jié)果：F2（正、反交合瓶統(tǒng)計）果蠅數(shù)目： 子代類型統(tǒng)計日期長灰長黑殘灰殘黑合計用2方法測驗觀察數(shù)與理論數(shù)符合程度（好適度）。2測驗長灰長黑殘灰殘黑合計實驗觀察數(shù)（O）理論數(shù)（9：3：）（C）偏差（OC）（OC）2C23= （OC）2C? 自由度413若P>0.05，說明實驗符合二對因子自由組合的假說。若P<0.05，說明這個實驗數(shù)據(jù)不能用二對因子的自由組合來解釋，也就否定了原來的假設(shè)，即不能認(rèn)為是自由組合。實驗五 果蠅的三點試驗一 實驗?zāi)康模?. 了解繪制遺傳學(xué)圖的原理和方法。2. 學(xué)習(xí)

13、實驗結(jié)果的數(shù)據(jù)處理。二 實驗原理： 基因圖距是通過重組值的測定而得到的。如果基因座位相距很近，重組率與交換率的值相等，可以根據(jù)重組率的大小作為有關(guān)基因間的相對距離，把基因順序地排列在染色體上，繪制出基因圖。可是如果基因間相距較遠(yuǎn)，二個基因間往往發(fā)生二次以上的交換，這時如簡單地把重組率看作交換率，那么交換率就要低估了，圖距自然也隨之縮小了。這時需要利用實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行校正，以便正確估計圖距。根據(jù)這個道理，可以確定一系列基因在染色體上的相對位置。例如a、b、c三個基因是連鎖的，要測定三個基因的相對位置可以用野生型果蠅（+，表示三個野生型基因）與三隱性果蠅（a、b、c三個突變隱性基因）雜交，制成三因子雜

14、種abc/+，再把雌性雜種與三隱性個體測交，由于基因間的交換，從而在下代中得到8種不同表型的果蠅，這樣經(jīng)過數(shù)據(jù)處理，一次實驗就可以測出三個連鎖基因的距離和順序，這種方法，叫做三點測交或三點實驗。三 實驗材料及用品：1. 材料：黑腹果蠅品系：野生型果蠅（+ + +）長翅、直剛毛、紅眼； 三隱性果蠅（m sn3 w）小翅、焦剛毛、白眼。2. 用具：解剖鏡、麻醉管等。3. 藥品：乙醚等。四 實驗方法：1. 收集三隱性個體的處女蠅，培養(yǎng)在培養(yǎng)管中，每管56只。2. 雜交：挑出野生型雄蠅放到處女蠅管中去雜交，每管56只。貼好標(biāo)簽，在25中培養(yǎng)。3. 78天后，出現(xiàn)蛹。倒出親本。4. 再45天后，蛹孵化出

15、子一代（F1）成蠅，可以觀察到F1雌蠅全部是野生型表型，雄蠅是三隱性。5. 從F1代中選2030對果蠅，放到新的培養(yǎng)管中繼續(xù)雜交。每管56對。6. 78天后，蛹出現(xiàn)，倒去親本。7. 再45天后，蛹孵化出子二代（F2）成蠅，開始觀察。8. 把F2果蠅倒出麻醉，放在白瓷板上，用實體顯微鏡檢查眼色、翅形、剛毛。各類果蠅分別記數(shù)。檢查過的果蠅倒掉。過兩天后再檢查第二批，連續(xù)檢查810天，即34次。在25下，自第一批果蠅孵化出10天內(nèi)是可靠的，再遲時F3代就可能出現(xiàn)了，要求至少統(tǒng)計250只果蠅。五 實驗結(jié)果：按下列順序填表和計算（所列數(shù)字系舉例說明）。1. 先寫出所得到的F2代八種表型，填上觀察數(shù)，計算

16、總數(shù)。三點測交實驗中觀察的記錄實例測交后代表型觀察數(shù)重組發(fā)生在m- sn3m-ww- sn3Sn3 W m+ + + W +sn3 + msn3 + + W m + + msn3 W +總計37228595974491521000-+151-+-+335-+-200重組值15.1%33.5%20.0%2. 填寫“基因是否重組一欄”。因為測交親本是三隱性，所以若基因間有交換，便可在表型上顯示出來。因而從測交后代的表型便可推知某二個基因是否重組。3. 計算基因間的重組值： msn3間的重組值=151/1000×100%=15.1%mw 間的重組值=335/1000×100%=3

17、3.5%wsn3間的重組值=200/1000×100%=20.0%4. 畫遺傳學(xué)圖： m 15.1 sn3 20.0 w 33.5 mw間重組值小于msn3間和sn3w間重組值之和，這是什么原因？5. 計算雙交換值：mw間重組值小于msn3與wsn3間重組值之和，這是因為兩個相距較遠(yuǎn)的基因發(fā)生了雙交換的結(jié)果。而這種發(fā)生了雙交換的果蠅在基因順序尚未揭曉時，也就是說，當(dāng)遺傳學(xué)圖還沒有畫出時，是難以確定的。遺傳學(xué)圖畫出以后，可以分析出mw間發(fā)生雙交換能產(chǎn)生兩種表型的果蠅。m+W(小翅、直剛毛、白眼)和sn3 +(長翅、卷剛毛、紅眼)。這兩種果蠅計有八只，在計算mW間重阻值時，這個值沒有被計

18、算進(jìn)去。二個相距較遠(yuǎn)的基因的重組值被低估了。低估的值是8/1000×100%=0.8% 因為是雙交換，所以再乘以2，得0.8%×2=1.6%。這就是校正值。畫出圖距。 m 15.1 sn3 20.0 w 33.5+1.6=35.1 6. 計算并發(fā)率和干涉：如果兩個基因間的單交換并不影響鄰近兩個基因的單交換，那么預(yù)期的雙交換頻率應(yīng)等于兩個單交換頻率的乘積。但實際上觀察到的雙交換頻率往往低于預(yù)期值。因為每發(fā)生一次單交換，它鄰近也發(fā)生一次交換的機會就減少一些，這叫做干涉。一般用并發(fā)率來表示干涉的大小。并發(fā)率觀察到的雙交換頻率/兩個單交換頻率的乘積干涉1并發(fā)率在上例中：并發(fā)率0.8

19、%/15.1%×20.0%=0.26干涉10.26=0.0.74實驗六 果蠅的伴性遺傳一 實驗?zāi)康模?.記錄交配結(jié)果和掌握統(tǒng)計處理方法。2.正確認(rèn)識伴性遺傳的正、反交的差別。二 實驗原理： 位于性染色體上的基因，其傳遞方式與位于常染色體上的基因不同，它的傳遞方式與雌雄性別有關(guān)，因此稱為伴性遺傳（sex-linked inheritance）。 果蠅的性染色體有X和Y兩種，雌蠅為XX，是同配性別；雄蠅為XY，是異配性別。1. 交配方式： A: +/ ×W B: W/W ×+ P: +/+×W W/W×+ F1: +/+;+/W×+ +/

20、W×W F2: +/+ +/W +/W W/W + W + W 若A為正交，F(xiàn)1代、都為野生型+，F(xiàn)1相互交配得F2代，則都是野生型+，性則野生型+和白眼W各占一半，比例為1:1。B是A的反交，F(xiàn)1代與A不同，為野生型+，而為白眼W，此現(xiàn)象又稱為絞花式遺傳（lriss-cross inheritance）。F1相互交配得F2代，的紅眼與白眼比例為1:1，的紅眼與白眼比例也是1:1。2. 注意：1） 常染色體性狀遺傳的正、反交所得子代、性狀相同，而伴性遺傳則不同。2） 在進(jìn)行伴性遺傳實驗時，也有例外個體產(chǎn)生，這是由于兩條X不分離造成的（B雜交組合），F(xiàn)1中出現(xiàn)了不應(yīng)該出現(xiàn)的性白眼，但這

21、種情況極為罕見，約幾千個個體中有一個。三 實驗材料及用品：1. 材料：黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）品系；野生型（紅眼），wild type（+）突變型（白眼），white eye（w），此基因在X染色體上。2.用具：解剖鏡，麻醉管，解剖針等。3.藥品：乙醚等。四 實驗方法：1.收集處女蠅：由于雌蠅生殖器官中有貯精囊，一次交配可保留大量精子，供多次排卵受精用，因此做雜交實驗前必須收集未交配過的處女蠅。由于孵化出的幼蠅在12小時內(nèi)（更可靠是8小時）不交配，因此必須在這段時間內(nèi)把雌、雄蠅分開培養(yǎng)，所得的雌蠅即為處女蠅。2.準(zhǔn)備好培養(yǎng)基，按正、反交組合，把已麻醉的紅眼、白

22、眼和紅眼、白眼分別放入不同管內(nèi)進(jìn)行雜交，貼上標(biāo)簽。標(biāo)簽形式如下：B組合ww +Y日期姓名 A組合+ wY日期姓名3.67天后，見到有F1幼蟲出現(xiàn)，即除去親本果蠅（一定要除干凈！）。4.再過34天，觀察F1成蠅的性狀。（正、反交有什么不同？眼色和性別的關(guān)系如何？5.所出現(xiàn)的F1雌、雄果蠅麻醉后，挑35對果蠅換入新的培養(yǎng)基繼續(xù)飼養(yǎng)（此處無需處女蠅，為什么？）。兩組合后代不能混合，應(yīng)分別培養(yǎng)。6.67天后又需除干凈F1代親本果蠅。7.再過34天，F(xiàn)2代成蠅出現(xiàn)，麻醉后倒在白瓷板上觀察眼色和性別，進(jìn)行統(tǒng)計。8.每隔12天統(tǒng)計一次，累積67天數(shù)據(jù)。五 實驗結(jié)果統(tǒng)計:A組合：（正交）wYF1 觀察結(jié)果統(tǒng)計

23、日期各類果蠅的數(shù)目紅眼紅眼B組合：（反交）wwYF1 觀察結(jié)果統(tǒng)計日期各類果蠅的數(shù)目紅眼白眼wA組合：F2 觀察結(jié)果統(tǒng)計日期各類果蠅的數(shù)目紅眼白眼w紅眼白眼w合計百分比B組合：F2 觀察結(jié)果統(tǒng)計日期各類果蠅的數(shù)目紅眼白眼w紅眼白眼合計百分比2 測驗： X2=(觀察值理論值)/理論值根據(jù)X2測定，查X2表，若P>5%,說明觀察值與理論值之間的偏差是沒有意義的，也就是說，可以認(rèn)為觀察值是符合假設(shè)的。具體對這個實驗來說，所得到的實驗結(jié)果應(yīng)該是符合伴性遺傳的假說，也就是說眼色的這對性狀是由于性染色體X上的一對等位基因控制的。實驗七果蠅唾腺染色體一 實驗?zāi)康模壕毩?xí)取出果蠅幼蟲唾腺組織，制作唾腺組織

24、染色體標(biāo)本。二 實驗原理：雙翅類昆蟲（搖蚊、果蠅等）幼蟲期的唾腺細(xì)胞很大，其中的染色體稱為唾腺染色體（salivary chromosome）。這種染色體比普通染色體大得多，寬約5m，長約400m，相當(dāng)于普通染色體的100200倍，因而又稱為巨大染色體。唾腺染色體經(jīng)過多次復(fù)制而并不分開，大約有10004000根染色體絲的拷貝，所以又稱多線染色體（polytene chromosome）。多線染色體經(jīng)染色后，出現(xiàn)深淺不同、密疏各別的橫紋，這些橫紋的數(shù)目和位置往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特性。如染色體有缺失、重復(fù)、倒位、易位等，很容易在唾腺染色體上認(rèn)別出來。三 實驗用品：1. 材料：果蠅的

25、三齡幼蟲。2. 用品：解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、吸水紙等。3. 藥品：改良苯酚品紅等。四 實驗方法：1. 把載玻片置于解剖鏡下。載玻片上滴水一滴，取三齡幼蟲放在其中，操作者兩手各握一枚解剖針，左手的解剖針壓住幼蟲后端/處，固定幼蟲。右手解剖針按住幼蟲頭部，用力向右拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨之而出，唾腺是一對透明的棒狀腺體（如圖）。2. 在載玻片上除去幼蟲其他組織部分，還要把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈，再滴上改良苯酚品紅染色。3. 固定染色510分鐘后，蓋上干凈的蓋玻片，用吸水紙覆蓋上，然后放在平的桌子上，用大拇指用力壓下住。4. 制成標(biāo)本進(jìn)行觀擦。五 作業(yè)：繪制果蠅唾腺染

26、色體圖。實驗八X染色質(zhì)的觀察一實驗?zāi)康模赫莆砧b別X染色質(zhì)的簡易方法，識別其形態(tài)特征及所在部位。二實驗原理：1.概念：人們已知的基因確實有不可逆轉(zhuǎn)的失活或丟失，受永久失活所調(diào)節(jié)的例子涉及到一個完整的染色體，即X染色質(zhì)，失活的染色質(zhì)叫巴氏小體。在雌性哺乳動物中，包括人類，女性口腔粘膜細(xì)胞中約30%-50%（男性0-2%）的細(xì)胞中，XX染色體其中一條就是失活的（但在性細(xì)胞中這個染色體則不失活，如果也是失活的，那大家可以想象會發(fā)生什么樣嚴(yán)重后果）,表現(xiàn)為濃固縮狀態(tài)。2.發(fā)生的時期：這種現(xiàn)象發(fā)生在胚胎早期，染色體失活是隨機的，某些細(xì)胞中是父性X染色體失活，而有些細(xì)胞則是母性X染色體失活，這些細(xì)胞能產(chǎn)生同

27、期相同X染色體失活的細(xì)胞，這樣一個正常女性就是具有兩種X染色體組織類型的嵌合體。巴氏小體在細(xì)胞周期中比有活性的X染色體復(fù)制要晚。3.形態(tài)表現(xiàn)：X染色質(zhì)的形態(tài)表現(xiàn)為，結(jié)構(gòu)致密濃染小體，輪廓清楚，常附著于核膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)，其形狀有：微凸形、三角形、卵形、短棒形及雙球形等。4.發(fā)現(xiàn)：MaryF.Lyon第一個發(fā)現(xiàn)巴氏小體是失活的X染色質(zhì)，所以在雌性哺乳動物中，一個X染色體隨機失活的想法叫Lyon假說。雌性哺乳動物的這種失活似乎是一種獲得劑量補償?shù)姆椒?，因為她們有兩倍于雄性哺乳動物的X連鎖等位基因，但現(xiàn)在還不清楚X染色質(zhì)是怎樣失活的。在某些時期的嵌合體細(xì)胞中，失活X染色質(zhì)的數(shù)量始終比總的X染色體數(shù)要

28、少.如一個特納氏（TurnerXO）綜合癥的雌性人沒有失活的X染色體。一個克蘭費爾特氏（Klinefelter XXY）綜合癥的雄性人每個細(xì)胞有一個失活的X染色體，而一個（XXX）的雌性人每個細(xì)胞中有兩個失活的X染色質(zhì)。因此用這一方法可檢測出一些遺傳疾病。三 實驗用品：1.材料：女性口腔頰部粘膜細(xì)胞。2.用品：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸水紙等。3.藥品：吉姆薩染液等。四 實驗方法：1.女性口腔頰部粘膜細(xì)胞的觀察：從女性口腔兩側(cè)頰部刮取上皮粘膜細(xì)胞，在原位刮取23次，可涂13片，干燥后，用Gimsa染色液染10分鐘，勿使干燥，用水沖洗后晾干鏡檢。2.毛發(fā)根部細(xì)胞的觀察：拔取一根帶有毛根的毛發(fā)，自

29、基部截取2cm左右置載玻片上，在毛根部加一滴地衣紅染液，片刻后再加一滴50醋酸（或只加50醋酸），低倍鏡下觀察，待毛根鞘軟化后，拔去毛干，重新加一滴染液，加蓋片，在酒精燈上輕微加熱后，靜置5分鐘，加吸水紙，用手指輕壓后鏡檢。3.X染色質(zhì)的辨認(rèn)：低倍鏡下檢出典型的可數(shù)細(xì)胞，其標(biāo)準(zhǔn)是：核質(zhì)是網(wǎng)狀或細(xì)顆粒狀分布。核膜清晰，核無缺損。染色適度。周圍無雜菌。選定后的細(xì)胞，在高倍鏡或油鏡下進(jìn)一步觀察。X染色質(zhì)的形態(tài)表現(xiàn)為一結(jié)構(gòu)致密濃染小體，輪廓清楚，常附著于核膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)。五作業(yè)：1.分別觀察50個男、女性可數(shù)的細(xì)胞并計算各自的巴氏小體細(xì)胞所占的百分比。2.在觀察中畫出45個典型細(xì)胞，標(biāo)明巴氏小體的部

30、位。實驗九骨髓細(xì)胞染色體的制備與觀察一. 實驗?zāi)康模撼醪秸莆招“资蠊请S細(xì)胞染色體的制備方法，計算骨髓細(xì)胞分裂中期的分裂相的染色體數(shù)目并觀察端著絲點的形態(tài)特點二. 實驗原理：骨髓細(xì)胞是分裂較旺盛的體細(xì)胞，可得到較多的細(xì)胞中期的分裂相三. 實驗用品：1. 材料：小白鼠（2n=42）2. 用品：顯微鏡、冰箱、恒溫箱、恒溫水浴鍋、離心機、注射器、解剖剪、 鑷子、移液器、載玻片、燒杯等。3. 藥品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)檸檬酸鈉溶液、0.07M氯化鉀溶液、 （或0.35%氯化鉀溶液）、蒸餾水、Giemsa原液，甲醇、乙酸等。四. 實驗方法：1. 取材及前處理：取健康小白鼠（約65-9

31、0天齡），腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，劑量為4ml/Kg動物體重。2. 取骨髓：將已用秋水仙素前處理的小白鼠，經(jīng)過2-3小時后，用損傷脊椎法處死小白鼠，立即取出兩側(cè)股骨，把肌肉刮凈，然后從骨股兩端關(guān)節(jié)處剪下，用2%檸蒙酸鈉溶液洗凈骨股上的血污及肌肉殘渣，剪去骨股兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，使其露出骨髓，然后用吸有3-5ml2%檸檬酸鈉溶液的注射器，從股骨的一端插入針頭，往骨髓內(nèi)沖洗多次，直至股骨斷面變成粉白色為止，可多剪幾個斷面反復(fù)沖洗，這樣制備了骨髓細(xì)胞懸浮液，也可用眼科鑷子小心地取出骨髓，置于有少量檸檬酸鈉溶液培養(yǎng)皿中搗碎，然后再加入2%檸檬酸鈉溶液適量，制成3-5ml骨髓細(xì)胞懸液。3.

32、 低滲處理：用吸管將骨髓細(xì)胞懸液移入帶刻度離心管內(nèi)，1000rpm離心10分鐘，吸去上清液。加入0.075M氯化鉀溶液5ml立即將細(xì)胞團(tuán)吹打均勻，置37水浴25-30分鐘。4. 預(yù)固定、固定：經(jīng)低滲處理后的細(xì)胞，加入卡諾氏固定液5-6滴攪拌均勻進(jìn)行預(yù)固定10分鐘，然后以1000rpm離心10分鐘，此為第一次固定然后以同法離心，棄上清液，僅留約0.2-0.3ml的細(xì)胞團(tuán)與部分上清液，吹均勻制成細(xì)胞懸浮液涂片觀察。如果細(xì)胞分散的不好，可再按上述方法再固定1-2次，使染色體進(jìn)一步分散。5. 氣干法制片：取預(yù)先冰凍的載玻片，滴2-3滴細(xì)胞懸浮液于其上，立即吹氣均勻打散、過火、置室溫中自然干燥。6. 染

33、色：用Giemsa染液,染色15-20分鐘，自來水沖洗，空氣干燥。7. 鏡檢：在低倍鏡下觀察中期分裂相細(xì)胞，選取一定數(shù)量的細(xì)胞（通常選100個細(xì)胞），染色體分散好的中期分裂相，分別計算染色體的數(shù)目，以確定其細(xì)胞2n的染色體數(shù)目。 油鏡觀察分散好、不重疊，染色體收縮適度、較平直的分裂相，注意小白鼠是端著絲點染色體的特征。認(rèn)別著絲點、染色體、染色單體。五.作業(yè)：繪制一個圖像清晰、形態(tài)典型的小白鼠染色體組形圖。 實驗十 植物染色體標(biāo)本的制備（去壁低滲法）一.實驗?zāi)康?1、 初步掌握植物染色體標(biāo)本制備的方法之一 去壁低滲法。2、 了解植物染色體標(biāo)本制備的原理。二.實驗原理：植物染色體標(biāo)本的制備，過去一

34、直是采用醋酸洋紅壓片法。近年來，有人將動物染色體制備的方法，運用到植物材料中來，已取得了進(jìn)展。我國科學(xué)家陳瑞陽教授等，在1979年以來利用對植物細(xì)胞去壁、低滲、火焰干燥的方法，作了大量的工作，實驗證明這種方法是可行的，也是很有前途的。植物細(xì)胞與動物細(xì)胞的不同在于它外面具有堅實的細(xì)胞壁，因此要想將制備動物細(xì)胞染色體的方法，應(yīng)用于植物中就必須將植物細(xì)胞壁去除，這樣使細(xì)胞的原生質(zhì)體裸露，然后采用動物染色體的制備技術(shù)低滲，使細(xì)胞膨脹染色體擴散。本實驗的方法基本上采用陳瑞陽教授的去壁低滲法（參照植物學(xué)報1979.21（3），同學(xué)們也可對此實驗進(jìn)行改進(jìn)。三 .實驗用品：1.材料：大麥根尖。2.用品：顯微鏡

35、、培養(yǎng)箱、蒸餾水重蒸設(shè)備，冰箱、載玻片單面刀片。眼科鑷子，吸管、燒杯（100ml）、酒精燈、玻璃板（20×20厘米以上）、牙簽，青霉素瓶。3.試劑：Giemsa母液、甲醇、冰醋酸、2.5混合酶液、0.2秋水仙素溶液。四.實驗步驟： 1.取 材：作為染色體制備材料部位必須準(zhǔn)確，如根尖、芽、節(jié)間等部位（即細(xì)胞正處在生長分裂旺盛時期）；材料必須少而精、忌多而雜；同時材料要新鮮。在本實驗中要將種子浸泡一天，然后擺種待根長出1厘米左右即可。2.預(yù)處理：將已長出根的種子浸泡在0.2秋水仙素溶液中在25中培養(yǎng)4小時。3.前低滲：切取根尖（1-2mm左右）30個放入蒸餾水中，動作要迅速，不要使根尖缺

36、水。在25左右條件下處理30分鐘。4.酶 解：吸干水、加入混合酶液剛好沒過材料即可，切忌過多，在25下酶解24小時，酶解時間還得憑經(jīng)驗多次掌握才行。5.低 滲：將酶液去除后，在酶解材料瓶中慢慢加入2530雙蒸水，輕輕沖洗23次，加入雙蒸水根據(jù)酶解消化程度，在雙蒸水中停留1040分鐘進(jìn)行復(fù)低滲處理。6.固 定：低滲后的材料，用31的甲醇冰醋酸固定30分鐘。7.涂片：將材料放在預(yù)先在蒸餾水中冷凍的清潔載片上，然后用鑷子尖迅速將材料敲碎涂布，再滴一滴固定液用嘴吹，使細(xì)胞均勻的散開在載片上，動作要迅速。8.干 燥：迅速將載片移到酒精燈上過火12次，然后將載片在空氣中干燥，才可進(jìn)行染色。9.染 色：將G

37、iemsa母液用蒸餾水1：20稀釋、進(jìn)行染色。染色方法是將玻璃板上牙簽的距離稍比載玻片長度短一些。使片架在兩牙簽上，有材料的面朝下，然后往載片與玻璃板之間的空隙加染液，染色1530分鐘即可。染色后將載片在自來水上沖一下，迅速甩掉附在載片上的水，在空氣中干燥后，即可觀察。附：1.Giemsa母液的配制： 0.5g Giemsa粉加33ml甘油于研缽內(nèi)，充分研磨1小時，然后56溫箱中保溫2小時，再加入33ml甲醇，混勻后裝入試劑瓶內(nèi)即可。2.混合酶液：（2.5）分別稱取纖維素酶和果膠酶各0.5克，加入20ml蒸餾水即可，在冰箱中保存。3.秋水仙素液：先配制0.002M8羥基奎林溶液，然后用這個溶液

38、配制成0.2的秋水仙素溶液即可。五.作業(yè)：繪制大麥染色體圖。實驗十一 植物染色體Giemsa N帶技術(shù)一.實驗?zāi)康模? 掌握Giemsa 分帶的技術(shù)和方法。2. 了解植物染色體分帶的意義。二.實驗原理： 染色體分帶的機理并不是十分清楚的，現(xiàn)在大多數(shù)人認(rèn)為DNA含量高的區(qū)域就是帶的區(qū)域，這個區(qū)域可抵抗酸、堿、酶等顯帶處理，不易變性。這樣重染色后仍然著色。 染色體分帶使染色體除形態(tài)特征（長度、著絲點位置、臂比，副縊痕隨體等）之外又增添了一個新的標(biāo)志，可作為鑒別染色體的重要依據(jù)，并在研究染色體成分、結(jié)構(gòu)、行為功能等方面有著十分重要的意義，并已應(yīng)用于醫(yī)療診斷，植物育種等方面。 N帶（核仁組成區(qū)帶）核仁組成區(qū)的異染色質(zhì)與其它部位的異染色質(zhì)有所區(qū)別。但現(xiàn)今在植物方面也常用這一技術(shù)顯示染色體的其它部位，如著絲粒，染色體臂上的某些特殊區(qū)帶等。三.實驗用品：1.材料：已制備好的植物標(biāo)本制片，空氣干燥37天。2.用品：溫度計，立式染色缸，臥式染缸，恒溫水浴鍋等。3.藥品：1MNaH2PO4（156.01克，溶于容量瓶中，加水至1000ml）等。四.實驗步驟：1.顯帶處理：將1MNaH2PO4溶液倒入立式染缸，放入恒溫水浴鍋中，然后將水浴鍋打開加熱，溶液中插一根溫度計，把標(biāo)本制片放在水浴鍋上預(yù)熱，切忌水浴鍋水已熱時再放入染缸，以防染缸破裂。當(dāng)溫度計指示在96時，將標(biāo)本