微生物的實驗室培養(yǎng)教案新部編本.doc

1、精品教學(xué)教案設(shè)計| Excellent teaching plan教師學(xué)科教案20 -20學(xué)年度第一學(xué)期任教學(xué)科:任教年級:任教老師:xx市實驗學(xué)校精品教學(xué)教案設(shè)計| Excellent teaching plan課題 1 微生物的實驗室培養(yǎng) 課題目標(biāo)（一）知識與技能了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識； 掌握培養(yǎng)基的制備、 高壓蒸汽滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)（二）過程與方法分析實驗思路的確定和形成的原因，分析實驗流程，對比前面的實驗設(shè)計，歸納共性，分析差異，增加印象（三）情感、態(tài)度與價值觀形成勇于實踐、嚴(yán)謹(jǐn)求實的科學(xué)態(tài)度和科學(xué)精神 課題重點無菌技術(shù)的操作 課題難點無菌技術(shù)的操作 教學(xué)方法啟發(fā)式教學(xué)

2、教學(xué)工具多媒體課件 教學(xué)過程（一）引入新課在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用中， 都利用了微生物的發(fā)酵作用， 其中的微生物來自于制作過程中的自然感染。 而在工業(yè)化生產(chǎn)中， 為了提高發(fā)酵的質(zhì)量，需要獲得優(yōu)良菌種，并保持發(fā)酵菌種的純度。這就要涉及到微生物的培養(yǎng)、分離、 鑒別等基本技術(shù)?，F(xiàn)在我們開始學(xué)習(xí)微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用專題。（二）進(jìn)行新課1基礎(chǔ)知識1. 1培養(yǎng)基的種類包括 固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基等。R思考13瓊脂是從紅藻中提取的 多糖，在配制培養(yǎng)基中用作為 凝固劑【補充】培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用：標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離，鑒定，計數(shù):半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少菌種保存液體培

3、養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)1化學(xué)組成合成培養(yǎng)基r由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定1天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生，產(chǎn)降低成本目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基添加(或缺少)某種化學(xué)成分菌種的分離1. 2培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 水、無機(jī)鹽、碳源、氮源四類營養(yǎng)成分。R思考23從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？C、H、O、N、P、S是構(gòu)成細(xì)胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量的97%以上?！狙a充】碳源：如 CO2、糖類、脂肪酸等有機(jī)物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物， 并提供能量。氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽、

4、牛肉膏、蛋白月東等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮 代謝物等。含有 C、H、O、N的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。1. 3培養(yǎng)基除滿足微生物生長的pH 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 和氧氣等要求?！狙a充】生長因子：某些微生物正常生長代謝過程中必須從培養(yǎng)基中吸收的微量有機(jī)小 分子，如某些氨基酸、堿基、維生素等。R思考33牛肉膏和蛋白月東主要為微生物提供 旦、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。R思考43培養(yǎng)乳酸桿菌時需要添加維生素,培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)基 pH調(diào)節(jié)為_1此，培養(yǎng)細(xì)菌日需要將 pH調(diào)節(jié)為中性或微堿性 。活動2:閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：1. 4獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌

5、的入侵 。1. 5無菌技術(shù)包括：(1)對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒;(2)將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌：(3)為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近 旁進(jìn)行;(4)避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品 相接觸。1. 6比較消毒和滅菌(填表)比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽抱和抱子能否被消滅較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能R思皆篁無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是 防止感染實驗操作者 c1. 7消毒方法：(1)日常生活經(jīng)常用到的是煮沸 消毒法；(2)對一些不耐高溫的液體，則使用 巴氏消毒法(作簡要介紹)；(3)對接種室、接種箱或超凈工

6、作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強消毒效果，然后使用紫外線進(jìn)行物理消毒。(4)實驗操作者的雙手使用迺道 進(jìn)行消毒；(5)飲水水源用氧氣進(jìn)行消毒。1. 8滅菌方法：(1)接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒 滅菌法;(2)玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是 干熱滅菌箱;(3)培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽 滅菌法,所用器械是 高壓蒸汽滅菌鍋 。(4)表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是 紫外燈。R思考63對接種環(huán)滅菌時要用酒精燈的充分燃燒層火焰灼燒可能伸入試管或培養(yǎng)皿的部位。R思考73利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是避免妨礙熱空 氣流通。R思考83物品

7、裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是 有利于鍋內(nèi)溫度升高 ;隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至 100k Pa,溫度 為121c ,并維持1530 min；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至 零 時打 開鍋蓋，其目的是防止 容器中的液體暴沸 ?！狙a充】培養(yǎng)基的配制原則：目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比 4 ： 1時, 谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3 ： 1時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基 pH中性或偏堿

8、性，霉菌培31?呈酸性。2.實驗操作2. 1計算：根據(jù)配方比例，計算 100mL培養(yǎng)基各成分用量。2. 2稱量：準(zhǔn)確稱取各成分。稱取牛肉膏和蛋白月東時動作要迅速，目的是防止牛肉膏 吸收空氣中水分。2. 3溶化：加水加熱熔化牛肉膏；加入蛋白月東和氯化鈉繼續(xù)加熱；加入瓊脂； 用蒸儲水定容到 100mL。整個過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破 裂。2. 4調(diào)pH:用1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)pH至偏堿性。2. 5滅菌：將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加塞包扎后用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌； 所用培養(yǎng)皿用報紙包扎后用干熱滅菌箱滅菌。2. 6倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至 50c左右時在酒精燈火焰附近

9、操作進(jìn)行。其過程是：在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞；右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰；左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋。3. 平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。思考 管 錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是消滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培養(yǎng)基。思考2U倒平板的目的是防止培養(yǎng)基冷卻過程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面。R思考33若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？不能。空氣中雜菌會在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。R思考41配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染。R思考53試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種面積。2

10、. 7接種2. 7. 1微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法，另外還有穿刺接種和斜_面接種等。2. 7. 2平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌 種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。其操作步驟是：將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅。在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。將菌種試管口通過火焰達(dá)到消滅試管口雜菌的目的。將冷卻的接種環(huán)伸入到菌液中取出一環(huán)菌種。將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)伸入平板內(nèi)劃35條平行線,蓋上皿蓋，不要劃破J口喬9。灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)上述過程，完

11、成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線相連。將平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。R思考61取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物；除第一次劃線外,其 余劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種；取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷_卻后進(jìn)行，其目的是防止高溫殺死菌種；最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作最R思考73在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的目的是獲得由單個細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn) 菌落。2. 7. 3稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時，即可獲得單個細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。3. 7. 4系列稀

12、釋操作：取盛有9mL水的無菌試管 6支，編號101、102、103、104、105、106。用灼燒冷卻的移液管吸取 1mL菌液注入編號為101試管中，并吹打3次，使之混勻。從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得 102倍液。依此類推。R思考83操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm處。整個操作過程中使用了1支移液管。3.結(jié)果分析與評價3. 1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成,說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。3. 2在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。4. 3培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、 不同）。原因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落 數(shù)增多。R思考93在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了 3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌 感染等。R思考101頻繁使用的菌種利用臨時保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4c冰箱中，每36個月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點是保存時間較短，容易發(fā)生污染和變異； 后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在-20c冷凍箱中。（