農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法介紹

1、農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法介紹 目前關(guān)于農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)辦法主要有如下幾種：色譜法、光譜法、酶抑制法、免疫分析法和生物傳感器檢測(cè)法等。 3.1.1色譜法 色譜法也叫色層法或?qū)游龇?，它是利用物質(zhì)各組分在兩相間分配系數(shù)的不同，實(shí)現(xiàn)各組分分別的目的，并將待測(cè)濃度轉(zhuǎn)化為電信號(hào)記錄下來的辦法。目前色譜法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法、超臨界流體色譜法。 1氣相色譜(gc)法 隨著現(xiàn)代儀器分析辦法的進(jìn)展，氣相色譜法已成為目前典型的，應(yīng)用最廣泛的儀器分析辦法之一。在農(nóng)藥測(cè)定方面的應(yīng)用主要是從20世紀(jì)60年月開頭的，可以這樣認(rèn)為，因?yàn)闅庀嗌V的應(yīng)用，特殊是高敏捷度的挑選性檢測(cè)儀器的應(yīng)用，農(nóng)藥殘留量的測(cè)定水

2、平提高到了一個(gè)新的臺(tái)階。就在各種新的檢測(cè)辦法不斷浮現(xiàn)的今日，氣相色譜法仍占肯定的優(yōu)勢(shì)，就是由過去的以填充柱為主改變?yōu)槟壳暗囊悦?xì)管柱為主。因?yàn)槭⒚?xì)管柱的浮現(xiàn)和進(jìn)樣系統(tǒng)的不斷改進(jìn)，大大提高了氣相色譜法的分析精度、精確度和敏捷度，但氣相色譜法對(duì)于揮發(fā)性差、極性和熱不穩(wěn)定性的農(nóng)藥分析較困難。aoac對(duì)大部分有機(jī)磷農(nóng)藥，如、，在80年月就建立了氣相色譜檢測(cè)辦法。我國(guó)食品理化檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)辦法也采納了氣相色譜檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥，檢測(cè)限為1 ng。該辦法是利用經(jīng)提取、純化、濃縮后的有機(jī)磷農(nóng)藥注入氣相色譜柱，程序化升溫汽化后，不同的有機(jī)磷農(nóng)藥在固相中分別，經(jīng)不同的檢測(cè)器檢測(cè)掃描繪出氣相色譜圖，通過保留時(shí)光來定

3、性，通過峰或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比來定量。一次可同時(shí)測(cè)定多組分，簡(jiǎn)便快捷，敏捷度高，精確性也好，目前，是檢測(cè)有機(jī)磷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)辦法。 2高效液相色譜(hplc)法 高效液相色譜法形成于20世紀(jì)70年月，是在液相色譜柱層析的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜理論并加以改進(jìn)而進(jìn)展起來的色譜分析辦法，其是一種以流體為流淌相的高效、迅速的分別技術(shù)，常用于測(cè)定高沸點(diǎn)和熱不穩(wěn)定的大分子量農(nóng)藥殘留，具有分別速度快、效率高、敏捷度高等優(yōu)點(diǎn)，但是高效液相色譜法要配備昂貴的檢測(cè)儀器，試劑消耗也比較大，主要用于檢測(cè)一些不適于氣相色譜上檢測(cè)的少數(shù)農(nóng)藥aoac中有近半數(shù)的有機(jī)磷農(nóng)藥都建立了高效液相色譜法，討論報(bào)道也無數(shù)。 3薄層色譜(t

4、lc)法 薄層色譜法原理是被檢測(cè)物經(jīng)顯色后同標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)照來定性，然后用薄層掃描儀來定量的檢測(cè)辦法。它可以同時(shí)分析多個(gè)樣品，主要用于復(fù)雜混合物的分別及篩選。特點(diǎn)是成本低、可現(xiàn)場(chǎng)操作，與熒光顯色技術(shù)結(jié)合，對(duì)有機(jī)磷的檢測(cè)限為0.01ug，與酶抑制技術(shù)結(jié)合，檢測(cè)限可達(dá)0.001pg。但本身精確度不高且預(yù)處理繁瑣，適用范圍較窄。 4超臨界流體色譜(sfc)法 超臨界流體色譜法是產(chǎn)生于20世紀(jì)80年月的技術(shù)，以超臨界流體為流淌相，綜合了氣相色譜與其他一些色譜的優(yōu)點(diǎn)，超臨界流體具有氣、液雙重性質(zhì)，有黏度小、傳質(zhì)阻力小、蔓延速度快等特點(diǎn)。此外，它還能與氣相和液相的檢測(cè)器相匹配，與其他檢測(cè)手段聯(lián)用，是一種

5、強(qiáng)有力的分別和檢測(cè)手段。 3.1.2光譜法 光譜法是按照農(nóng)藥中的某些官能團(tuán)或水解、還原產(chǎn)物與特別的顯色劑在特定的環(huán)境下發(fā)生氧化、磺酸化、脂化、絡(luò)合等化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的色彩反應(yīng)來舉行定性或定量測(cè)定，也可以按照含氫基團(tuán)在近紅外光譜區(qū)的汲取來舉行測(cè)定。目前，在農(nóng)藥殘留檢測(cè)討論中應(yīng)用的主要有以下3種： 1.熒光分析法 這是一種按照氨基甲酸酯類農(nóng)藥在紫外光照耀下能夠產(chǎn)生熒光的機(jī)理而設(shè)計(jì)的一種用于檢測(cè)氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的熒光系統(tǒng)。該系統(tǒng)采納單光源、雙光路結(jié)構(gòu)，能夠?qū)y(cè)量信號(hào)和參考信號(hào)同時(shí)舉行處理。采納所設(shè)計(jì)的筒式光纖探頭激發(fā)并探測(cè)熒光，設(shè)計(jì)了相應(yīng)的信號(hào)處理電路，實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)管理。該法具有敏捷度高、

6、操作簡(jiǎn)便、速度快等優(yōu)點(diǎn)。 2紅外光譜法 應(yīng)用紅外光譜法可以挺直對(duì)蔬菜上的農(nóng)藥殘留舉行檢測(cè)，通過農(nóng)藥在水中的汲取建立的模型來模擬其在蔬菜體內(nèi)的汲取，這為實(shí)現(xiàn)對(duì)蔬菜上的農(nóng)藥殘留舉行迅速檢測(cè)提供了一條可能的途徑。由于在中紅外光農(nóng)藥特征汲取區(qū)域，蔬菜中的各種色素對(duì)農(nóng)藥的特征汲取基本沒有干擾，農(nóng)藥在蔬菜汁溶液中與在標(biāo)準(zhǔn)試劑溶劑中反映出基本相同的汲取特性。目前這種辦法還有待進(jìn)一步討論，但是這一辦法假如研發(fā)勝利，將為農(nóng)藥殘留檢測(cè)帶來極大的便利，不用對(duì)農(nóng)藥舉行提取就可對(duì)其舉行檢測(cè)，還可以提高精確度，應(yīng)用前景十分廣泛。 3拉曼光譜法。 近幾年將拉曼光譜用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)。拉曼光譜是借助分子的振動(dòng)譜來識(shí)別物質(zhì)的，不

7、同農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)不同，其振動(dòng)譜也會(huì)不同，因而可將其作為“分子指紋”來識(shí)別不同的農(nóng)藥。利用拉曼光譜識(shí)別農(nóng)藥時(shí)必需首先獲得各種樣品的拉曼數(shù)據(jù)，然后分離測(cè)量各種農(nóng)藥的拉曼光譜，分離形成數(shù)據(jù)庫和評(píng)判模型，最后輸入待測(cè)樣本光譜舉行識(shí)別。 3.1.3酶抑制法 有機(jī)磷、類農(nóng)藥進(jìn)入機(jī)體以后，與膽堿酯酶結(jié)合，形成了不易水解的磷?；憠A酯酶，喪失了水解乙酰膽堿的活力，假如大多數(shù)都改變?yōu)橄喈?dāng)穩(wěn)定難以水解的磷?；憠A酯酶，就在體內(nèi)大量蓄積，產(chǎn)生遲發(fā)性神經(jīng)毒性使中樞神經(jīng)、交感神經(jīng)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)和一些腺體首先高興而活動(dòng)增加，引起運(yùn)動(dòng)失調(diào)等，最后轉(zhuǎn)入抑制和衰竭、癱瘓，甚至中毒死亡。有機(jī)磷、類農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使其

8、分解乙酰膽堿的速度變慢或停止。酶抑制法的原理是利用這一反應(yīng)特性，用濾紙片或電極作為載體，將乙酰膽堿酯酶吸附在上面，加入顯色劑，假如酶的活性沒有被抑制，則生成的產(chǎn)物可以使顯色劑顯色，假如被測(cè)樣品中含有農(nóng)藥殘留，則酶活性被抑制不能生成水解產(chǎn)物，顯色劑不顯色，按照色彩的變幻或測(cè)定酶與某種特定化合物反應(yīng)的物理化學(xué)信號(hào)的變幻，可推斷是否存在有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥。酶抑制法最大的優(yōu)點(diǎn)是前處理容易、檢測(cè)時(shí)光短、不需昂貴的儀器、易于把握推廣，特殊適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)以及大批樣品的篩選。但是酶抑制法測(cè)定樣品和農(nóng)藥種類有限，目前只適用于蔬菜、水果中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留檢測(cè)，并且該辦法用法的酶、底物、顯色劑有一

9、定的特異性，需控制的條件比較多，易浮現(xiàn)假陽性或假陰性現(xiàn)象另外其敏捷度、重復(fù)性、回收率還有待提高。 3.1.4酶聯(lián)免疫法 農(nóng)藥殘留免疫分析辦法是以抗原與抗體的特異性結(jié)合為基礎(chǔ)，把抗體作為生物化學(xué)檢測(cè)器對(duì)化合物、酶或蛋白質(zhì)等物質(zhì)舉行定性和定量分析的一門技術(shù)。按標(biāo)志抗原或抗體標(biāo)志物的不同可區(qū)別為發(fā)射免疫分析(ria)法、酶免疫分析(eia)法、熒光免疫分析(fia)法等。因?yàn)楸４嫫陂L(zhǎng)、高敏感性、結(jié)果精確且可舉行光譜分析等優(yōu)點(diǎn)，使酶免疫分析法成為迄今為止農(nóng)藥殘留免疫檢測(cè)中應(yīng)用最廣泛的一種免疫分析辦法。 酶聯(lián)免疫(elisa)法是將免疫技術(shù)與現(xiàn)代測(cè)試手段相結(jié)合而建立的一種超微量的測(cè)定技術(shù)，20世紀(jì)80年

10、月開頭應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析，隨后得到不斷改進(jìn)和進(jìn)展。其原理是通過在合適的載體上，酶標(biāo)限定量抗原與未知抗原競(jìng)爭(zhēng)固相抗體結(jié)合位點(diǎn)或固相抗原與未知抗原競(jìng)爭(zhēng)限定量的標(biāo)志抗體結(jié)合位點(diǎn)，形成抗體復(fù)合物。在一定底物參加下，復(fù)合物上的酶催化底物，使其水解、氧化或還原成另一種帶色物質(zhì)。因?yàn)槊傅慕到獾孜锱c顯色成正比，通過肉眼觀看或分光光度計(jì)測(cè)定，從而確定是否存在未知抗原或含量。elisa法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)成本低、試劑保存時(shí)光較長(zhǎng)、專一性強(qiáng)、敏捷度高、平安性好、可舉行定性或定量檢測(cè)，并且不需要復(fù)雜昂貴的設(shè)備、自動(dòng)化程度高、對(duì)用法人員的專業(yè)技術(shù)要求也不高、簡(jiǎn)單普及推廣，尤其適合樣本量較大或?qū)χ付ㄞr(nóng)藥種類的現(xiàn)場(chǎng)篩查檢測(cè)。但目

11、前elisa法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中仍有其局限性，一種試劑盒只能檢測(cè)一種農(nóng)藥，不能同時(shí)分析多種成分，不能檢測(cè)農(nóng)藥殘留總量。另外由干制備抗體比較困難，抗體數(shù)量還較少，假如在不能絕對(duì)試樣中的農(nóng)藥品種的狀況下，檢測(cè)具有一定的盲目性，因此應(yīng)用范圍受到限制。雖然目前elisa法應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)比不上傳統(tǒng)的色譜分析技術(shù)廣泛，但隨著elisa法分析技術(shù)自身優(yōu)勢(shì)和在辦法上的不斷充實(shí)，尤其是親和力強(qiáng)、特異性高的標(biāo)準(zhǔn)化抗體生產(chǎn)技術(shù)的突破和免疫傳感器技術(shù)的日臻完美，elisa法檢測(cè)技術(shù)會(huì)成為農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留和平安質(zhì)量控制的有效迅速檢測(cè)手段。 3.1.5生物傳感器檢測(cè)法 20世紀(jì)80年月以來，國(guó)際上農(nóng)藥殘留分析新技術(shù)

12、的討論十分活躍，不斷有新的辦法、新的技術(shù)涌現(xiàn)，生物傳感器法就是其中日漸成熟的一種。生物傳感器是由一種生物敏感部件與轉(zhuǎn)換器緊密協(xié)作的分析裝置，這種生物敏感部件對(duì)特定化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有挑選性和可逆響應(yīng)，通過測(cè)定ph值、電導(dǎo)等物理化學(xué)信號(hào)的變幻，即可測(cè)得農(nóng)藥殘留量。傳感器的生物敏感層與復(fù)雜樣品中特定的目標(biāo)分析物之間(如酶與底物、抗體與抗原)的識(shí)別反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生物理化學(xué)信號(hào)(如光熱、聲音、色彩、電化學(xué))，轉(zhuǎn)換成電信號(hào)后可放大記錄。與傳統(tǒng)的分析辦法相比，生物傳感器法的特點(diǎn)是響應(yīng)速度快、敏捷度高、挑選性及專一性強(qiáng)、抗千擾能力強(qiáng)、可反復(fù)多次用法；樣品中被測(cè)組分的分別和檢測(cè)同時(shí)完成、可以實(shí)現(xiàn)延續(xù)在線監(jiān)測(cè)、簡(jiǎn)單實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化測(cè)量，甚至可以插入生物組織或細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)超微量迅速跟蹤分析；傳感器連同測(cè)定儀的成本遠(yuǎn)低于大型分析儀器，便于推廣普及。目前，生物傳感器尚存在一些技術(shù)難點(diǎn)，主要表現(xiàn)是結(jié)果的穩(wěn)定性、重臨性和用法壽命等問題。隨著逐步解決生物傳感器的穩(wěn)定性、精確度、用法壽命等問題后，將有望開發(fā)出小型化、有用化、商品化的農(nóng)藥殘留檢測(cè)系統(tǒng)。 3.1.6發(fā)光菌檢測(cè)法