AIDS免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)抗體配伍組合

1、 AIDS免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)抗體配伍組合PanelFITCPEPerCP/Cy5IgG1IgG1CD4 (陰性對(duì)照)IgG1IgG1CD8 (陰性對(duì)照)CD62LCD45RACD4HLA-DRCD38CD4CD28CD95CD4CD62LCD45RACD8HLA-DRCD38CD8CD28CD95CD8 CD4CD19CD8 (調(diào)節(jié)補(bǔ)償)如果使用IL-2治療，加入以檢測(cè)管：CD3CD16+56CD45如果要研究童真細(xì)胞，則加入以下檢測(cè)管：CD45ROCD45RACD8對(duì)于某些特異方案，可應(yīng)要求加入以下檢測(cè)管：CD3CD45ROCD4CD3CD38CD19CD4CD19CD8 (調(diào)節(jié)補(bǔ)償)基本原理Ig

2、G1/IgG1/CD4 or CD8 (陰性對(duì)照)：這些陰性對(duì)照包括有與檢測(cè)抗體一致的同型免疫球蛋白（如IgG），來(lái)去除CD4或CD8陽(yáng)性群體的非特異性結(jié)合。十字門(mén)的左下象限應(yīng)包含有98-99%的陰性群體。CD4/CD19/CD8 (調(diào)節(jié)補(bǔ)償)：在一些方案中，儀器的熒光補(bǔ)償可通過(guò)標(biāo)記沒(méi)有交叉抗原表達(dá)的兩群細(xì)胞進(jìn)行設(shè)置。CD62L/CD45RA/CD4：這個(gè)抗體組合應(yīng)設(shè)門(mén)檢測(cè)CD4+的細(xì)胞。此組合用于識(shí)別童真CD4細(xì)胞，而它是CD62L+/CD45RA+。識(shí)別此童真細(xì)胞亞群十分有用，當(dāng)HIV疾病處于進(jìn)展期時(shí)它的數(shù)量下降，而當(dāng)接受HAART后其數(shù)量又會(huì)增加。在后一種情況下，它有助于區(qū)分病人在經(jīng)HA

3、ART治療后CD4數(shù)量增加是由于外周血中現(xiàn)有淋巴細(xì)胞亞群擴(kuò)增而產(chǎn)生的童真細(xì)胞（胸腺增生和正直的免疫重建）。在檢測(cè)此管時(shí)十字門(mén)的位置往往與陰性對(duì)照不符，為了避免不正確地劃分細(xì)胞。建立一個(gè)與CD62L/CD45RA所分析細(xì)胞一致的單參數(shù)直方圖顯示CD45RA+的熒光峰，在此圖上可比較直觀地確定十字門(mén)垂直界線。理想情況下，雙參數(shù)點(diǎn)圖上的CD45RA%數(shù)量應(yīng)與CD45RA單參數(shù)直方圖的數(shù)量一致。在檢測(cè)CD62L/CD45RA/CD8抗體組合時(shí)可使用類(lèi)似的設(shè)門(mén)方法。CD4/CD45RO/CD3：這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門(mén)于CD3+陽(yáng)性的細(xì)胞群體。此組合用于識(shí)別CD4T細(xì)胞中的記憶型細(xì)胞亞群，它是CD45R

4、O+。當(dāng)HIV感染時(shí)此群細(xì)胞不成比例地增加。記憶型細(xì)胞可通過(guò)以上童真標(biāo)記組合來(lái)間接反應(yīng)出來(lái)，如記憶型細(xì)胞通常分布在象限I，III和IV中。十字門(mén)的位置有時(shí)需要調(diào)整來(lái)避免錯(cuò)誤劃分細(xì)胞群體。HLA-DR/CD38/CD4：這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門(mén)于CD8+陽(yáng)性的群體。此組合用于識(shí)別活化的CD8細(xì)胞，它是HLA-DR+/CD38+。這個(gè)CD8亞群細(xì)胞當(dāng)HIV感染時(shí)高度擴(kuò)增，對(duì)疾病的進(jìn)程有重要的預(yù)后意義。這個(gè)細(xì)胞亞群對(duì)于在HAART中的兒童的60個(gè)變量參數(shù)中是個(gè)強(qiáng)大的指示器，具有極重要的驅(qū)勢(shì)指示作用。HLA-DR/CD38/CD8 和 CD4的十字門(mén)必須在陰性對(duì)照的基礎(chǔ)上重新設(shè)置。CD19/CD38/

5、CD3：這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門(mén)于CD3陰性的細(xì)胞群體。此組合可用于識(shí)別活化的B細(xì)胞，它是CD38+。這個(gè)細(xì)胞群體在HIV感染后會(huì)擴(kuò)增。CD28/CD95/CD8：這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門(mén)于CD8+陽(yáng)性的細(xì)胞群體。CD28是介導(dǎo)T細(xì)胞-抗原活化的共刺激分子，CD95是FAS抗原與細(xì)胞凋亡有關(guān)。CD28亞群隨HIV病程發(fā)展時(shí)數(shù)量降低，而CD95+細(xì)胞群體數(shù)量增加。此抗體組合目的在于區(qū)分CD28+/CD95- 或 CD28-/CD95+的CD8細(xì)胞群體。十字門(mén)的橫軸應(yīng)置于散點(diǎn)圖右下CD28+/CD95-群體的頂端，此軸位置經(jīng)常會(huì)較同型對(duì)照明顯增高。如果CD28+/CD95-群體太窄而無(wú)法確認(rèn)坐標(biāo)軸

6、位置時(shí)，可將十字門(mén)橫軸置于CD28/95陽(yáng)性細(xì)胞的下方。分析同一門(mén)內(nèi)細(xì)胞的CD95單參數(shù)直方圖，結(jié)合另一包含所有CD28+細(xì)胞的門(mén)有時(shí)可用于指導(dǎo)劃分細(xì)胞。*見(jiàn)CD28/95雙參數(shù)點(diǎn)圖。在檢測(cè)CD28/CD95 / CD4時(shí)應(yīng)使用相同的十字門(mén)設(shè)置。CD3/CD 16+56/CD45：這個(gè)簡(jiǎn)單組合可用于識(shí)別NK細(xì)胞，它是CD3-/CD16+56+，使用CD45設(shè)門(mén)。因?yàn)镹K細(xì)胞直接對(duì)IL-2起反應(yīng)并在沒(méi)有其他刺激下發(fā)生擴(kuò)增，這個(gè)組合將在含有IL-2的免疫調(diào)節(jié)治療中有重要作用。CD45RO/CD45RA/CD8：這個(gè)抗體組合可識(shí)別童真CD8細(xì)胞和記憶型CD8細(xì)胞，使用CD8設(shè)門(mén)。研究發(fā)現(xiàn)青春期的HI

7、V+病人童真CD8細(xì)胞較兒童或成人送減少降低。因此，此抗體組合可能在監(jiān)測(cè)青少年免疫反應(yīng)時(shí)有用。注意：在這個(gè)組合中比較難設(shè)定十字門(mén)的位置，因?yàn)槿狈﹄p陽(yáng)性（RO+/RA+）CD8+NK和過(guò)渡T細(xì)胞。在使用此組合時(shí)，在發(fā)送實(shí)驗(yàn)室報(bào)告時(shí)需出示典型圖例和設(shè)門(mén)說(shuō)明。 PLOTS PEDIATRIC IQA PANELR1&R2&R4R1&R2 RRR2R2R1&R3&R5R1&R3&R5R1&R3請(qǐng)注意用于檢測(cè)CD4或CD8總數(shù)的抗體組合未在此處列明。以上3色抗體組合是CD3/CD4/CD45 和CD3/CD8/CD45基礎(chǔ)方案中的組成部分。

8、References1. Plaeger-Marshall, S., V. Isacescu, S. O'Rourke, J. Bertolli, Y.J. Bryson, and E.R. Stiehm. T cell activation in pediatric AIDS pathogenesis: three-color immunophenotyping. Clin. Immunol. Immunopathol. 71:19-26, 1994.2. Rabin, R.L., M. Roederer, Y. Maldonado, A. Petru, L.A. Herzenber

9、g and L A. Herzenberg. Altered representation of naïve and memory CD8 T cell subsets in HIV-infected children. J. Clin. Invest. 95: 2054-2060, 1995.3. Powderly, W.G., A. Landay and M.M. Lederman. Recovery of the immune system with antiretroviral therapy: the end of opportunism? JAMA 280:72-77,

10、1998.4. Liu, Z., W.G. Cumberland, L.E. Hultin, A.H. Kaplan, R. Detels and J.V. Giorgi. CD8+ T-lymphocyte activation in HIV-1 disease reflects an aspect of pathogenesis distinct from viral burden and immunodeficiency. J. Acquir. Defic. Syndr. Hum. Retrovirol. 18:332-340, 1998.5. Hyjek, E.M., J. Bartk

11、owiak , R. Drozdz, et al. Evidence for B cell-mediated activation of V delta 1+ T lymphocytes during progression of HIV infection. J. Immunol. 58: 464-474, 1997.6. Crow, M.E. Intravenous immune globulin for prevention of bacterial infections in pediatric AIDS patients. Am. J. Health-System Pharm. 52

12、: 803-811, 1995.7. Caruso, A., A. Cantalamessa, S. Licenziati, et al. Expression of CD28 on CD8+ and CD4+ lymphocytes during HIV infection. Scand. J. Immunol. 40: 485-490, 1994.8. McCloskey, T.W., N. Oyaizu, S. Bakshi, N. Kohn and S. Pahwa. CD95 expression and apoptosis during pediatric HIV infection: early upregulation of CD95 expression. Clin. Immunol. Immunopathol. 87: 33-41, 1998.Version 1.1