血型鑒定操作規(guī)程

1、血型鑒定操作規(guī)程一玻片法（僅適用于正定型）1 .原理：1。1根據(jù)紅細胞上有無A抗原或（和）B抗原，可以將紅細胞血型分為A型、B型、AB型和O型.根據(jù)抗-A和抗B抗體與對應紅細胞的凝集反應,可以鑒定ABO血型。1。2根據(jù)抗D抗體與對應紅細胞抗原的凝集反應，區(qū)分RhD陽性和RhD陽性。2 。標本采集：用EDTA抗凝管采集被檢對象靜脈血，充分混勻,確?？鼓浞?緊急情況下可以使用抗凝動脈血。嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者,如不進行反定型試驗可采集末梢血.3。 標本運送與儲存：采集好的標本與申請單同期盡快(一般2小時內(nèi)）送往輸血科。標本采集后和檢測后,應置于28環(huán)境下。檢測后的標本應至少保存7天，

2、以備結果查對。4 。儀器與材料：抗-A/B血型定型試劑（單克隆抗體）、RhD(IgM）血型定型試劑(單克隆抗體）、載玻片、試管架、一次性塑料滴管、記號筆.5。 操作步驟：5.1用標記筆在載玻片上劃分成A、B、D三個區(qū)域；5。2在標記好的玻片上分別加1滴抗A、抗B和抗D血型定型試劑；5.3再各加1滴10患者紅細胞懸液（該紅細胞懸液可以是鹽水懸液，也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細胞）；5。4用干凈的攪拌棒將紅細胞懸液和試劑充分混合，并把混合物均勻涂開，使其覆蓋大約直徑20mm的面積； 5.5緩慢連傾斜搖動玻片1-2min，觀察結果并記錄。 6。 結果判定：6。1凝集或發(fā)生溶血為陽性結果；6.2

3、細胞混勻2min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結果；6.3對結果有懷疑，應用試管法或微柱凝膠法重復實驗。二、紙板法1 。原理：1.1根據(jù)紅細胞上有無A抗原或（和）B抗原,可以將紅細胞血型分為A型、B型、AB型和O型。根據(jù)抗A和抗-B抗體與對應紅細胞的凝集反應，可以鑒定ABO血型正定型。A1細胞上含有A和A1抗原，B細胞上含有B抗原.用已知的A、B細胞檢測被檢者血清中有無相應的抗A或抗B抗體，即反定型。綜合正反定型結果確定受檢標本ABO血型.1。2根據(jù)抗-D抗體與對應紅細胞抗原的凝集反應，區(qū)分RhD陽性和RhD陽性。2 。標本采集:用EDTA抗凝管采集被檢對象靜脈血,充分混勻，確?？鼓浞?緊急情況下可

4、以使用抗凝動脈血。嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者,可采集末梢血。3. 標本運送與儲存:采集好的標本與申請單同期盡快（一般2小時內(nèi))送往輸血科.標本采集后和檢測后，應置于28環(huán)境下儲存。檢測后的標本應至少保存7天，以備結果查對.4 。儀器與材料：抗A/B血型定型試劑(單克隆抗體）、RhD（IgM)血型定型試劑（單克隆抗體)、血型鑒定專用紙板、試管架、一次性塑料滴管、記號筆.5。 操作步驟：5.1 取潔凈五孔血型鑒定專用紙板，做好姓名標記；5.2 按紙板標識向每孔中分別加入相應試劑抗A、抗B、抗D血清各1滴以及受檢者血清各2滴;5。3 各孔中分別加入受檢者紅細胞適量及相應所需3-5A型、B型試

5、劑紅細胞（自制或商品化試劑）并攪勻，使其覆蓋直徑1520mm的面積;5。4 輕輕旋轉(zhuǎn)搖晃混勻，直到形成均勻的細胞懸液或凝集塊，邊搖邊觀察;5。5 3min以上記錄結果。記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。6. 結果判定：6。1凝集或發(fā)生溶血為陽性結果;6。2細胞混勻2min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結果；6。3對結果有懷疑，應用試管法或微柱凝膠法重復實驗.三、試管法1 .原理：1.1根據(jù)紅細胞上有無A抗原或（和）B抗原,可以將紅細胞血型分為A型、B型、AB型和O型。根據(jù)抗A和抗-B抗體與對應紅細胞的凝集反應，可以鑒定ABO血型正定型。A1細胞上含有A和A1抗原，B細胞上含有B抗原。用已知的A、B細胞檢

6、測被檢者血清中有無相應的抗-A或抗-B抗體，即反定型。綜合正反定型結果確定受檢標本ABO血型.1.2根據(jù)抗D抗體與對應紅細胞抗原的凝集反應,區(qū)分RhD陽性和RhD陽性。2 。標本采集：用EDTA抗凝管采集被檢對象靜脈血，充分混勻,確?？鼓浞?。緊急情況下可以使用抗凝動脈血.嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者，如不進行反定型試驗可采集末梢血。3。 標本運送與儲存：采集好的標本與申請單同期盡快（一般2小時內(nèi)）送往輸血科。標本采集后和檢測后，應置于28環(huán)境下儲存。檢測后的標本應至少保存7天，以備結果查對.4 .儀器與材料：抗A/B血型定型試劑（單克隆抗體）、RhD（IgM)血型定型試劑（單克隆抗體）

7、、一次性試管、試管架、一次性塑料滴管、記號筆。5. 操作步驟：5。1 ABO血型正定型試驗5。1。1 取兩支潔凈試管，做好標記,按試管標記向試管中加入抗-A、抗B血清各1滴；5.1.2 向每管中各加入1滴3-5%被檢紅細胞鹽水（血清或血漿）懸液；5.1.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，1000g離心15s;5.1.4 結果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細胞扣，當細胞不再附著在試管上時，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細胞懸液或凝集塊；5.1。5 記錄結果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度.用ABO反定型實驗進一步驗證正定型結果。5。2 ABO血型反定型試驗5。2.1 取兩支潔凈試管,做好

8、標記，向每管中各加2滴被檢血清(或血漿）；5。2.2 按試管標記向試管中加入35A型、B型試劑紅細胞各1滴；5。2。3 輕輕混合試管內(nèi)容物, 1000g離心15s；5。2.4 結果判斷:將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細胞扣，當細胞不再附著在試管上時，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細胞懸液或凝集塊；5。2.5 記錄結果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度.與正定型結果進行相互驗證；5.2。6 如果反應較弱，可將試管于室溫（或4）放置510min，以促進弱抗體的反應，再離心觀察結果。如果反應還是很弱可以增加血清（或血漿）滴數(shù)，最多到6滴以加強反應。5.3 RhD血型鑒定試驗5。3.1 取一

9、支潔凈試管，做好標記，加入抗D血清1滴；5。3.2 向試管中加入1滴3-5被檢紅細胞鹽水（血清或血漿）懸液；5。3。3 輕輕混合試管內(nèi)容物，1000g離心15s；5。3。4 結果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細胞扣，當細胞不再附著在試管上時，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細胞懸液或凝集塊；5.3。5 記錄結果:記錄觀察到的凝集程度或溶血程度.6。1凝集或發(fā)生溶血為陽性結果;6.2細胞混勻2min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結果.四、微柱凝膠法 1。原理：ABO/RhD卡的微管中裝填有葡聚糖凝膠顆粒和抗A、抗B、抗D標準血清，如果紅細胞表面存在A或B或D抗原，就會與對應的抗體發(fā)生凝集

10、反應，凝膠顆粒具有分子篩的作用,可以阻滯凝集的紅細胞在離心力的作用下通過凝膠顆粒，使其懸浮在凝膠顆粒中，未凝集的紅細胞則可以通過凝膠顆粒到達微管底部。2 .標本采集及處理：用EDTA抗凝管采集被檢對象靜脈血，充分混勻，確?？鼓浞?緊急情況下可以使用抗凝動脈血。3000rpm，離心3-5min。（嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者，如不進行反定型試驗可采集末梢血。）3. 標本運送與儲存：采集好的標本與申請單同期盡快(一般2小時內(nèi)）送往輸血科。標本采集后和檢測后,應置于28環(huán)境下儲存。檢測后的標本應至少保存7天，以備結果查對。4 。儀器與材料：ABORhD血型定型檢測卡(單克隆抗體）、ABORh

11、D血型檢測卡(微柱凝膠）、試管架、一次性塑料滴管、記號筆、一次性試管。5. 操作步驟： 5。1將微住凝膠試劑卡做好患者姓名等標記； 5。2 將待檢紅細胞用低離子強度溶液稀釋成0。5-0.8%的懸浮液，加入標有A、-B、-D(和對照)的微管中，各1滴(或50ul）；5。3用低離子溶液將反定型紅細胞A1、B配成0.50.8%濃度，分別加入對應的微孔AC、BC中，各1滴(或50l）。再分別加入患者血漿各1滴（或50l）; 5.4專用離心機離心5分鐘，2分鐘900rpm, 3分鐘1500rpm，取出肉眼判定結果。6。 結果判定：6。1陽性結果：紅細胞抗原與相應抗體在微住凝膠中形成的特異性抗原抗體復合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應。6.1 反應強度：特異性紅細胞抗原抗體復合物位于凝膠表面,為強陽性反應；復合物在凝膠中為弱陽性反應；愈靠近凝膠底部顆粒愈小，反應愈弱.6.1 陰性結果:被檢紅細胞抗