遺傳學實驗報告.

1、專題一：植物專題實驗一 植物細胞有絲分裂的制片與觀察摘要：本實驗選取大蒜作為實驗材料，通過對大蒜根尖的培養(yǎng)取得生長旺盛的植物分生組織，然后對根尖細胞進行前處理、固定、解離、染色、壓片來觀察細胞有絲分裂的全過程。 關鍵詞：有絲分裂 間期 前期 中期 后期 末期abstract: in this experiment, we chose allium sativum as the material. we got a lot of activity floristic cells through cultivating the roots of allium sativum. then we di

2、sposed the cells in order to observe the whole processes of the mitosis.key words: mitosis interphase prophase metaphase anaphase telopha實驗原理有絲分裂是植物體細胞進行的一種主要分裂方式。有絲分裂的目的是增加細胞的數(shù)量而使植物有機體不斷生長。在有絲分裂過程中，細胞核內的物質能準確的進行復制，然后有規(guī)律的均勻分配到兩個子細胞中去。植物有絲分裂主要在根尖、節(jié)間、莖的生長點、芽及其他分生組織里進行。將生長旺盛的植物分生組織經(jīng)取材，固定、解離、染色、壓片，可以觀察到

3、細胞有絲分裂的全過程。實驗用品大蒜（allium sativum 2n=16），carnoy固定液(由95%的乙醇和冰乙酸以3：1的比例配置)，1mol/l的hcl，石炭酸品紅，水浴鍋，顯微鏡，剪刀，礦泉水瓶，蒸餾水實驗步驟1. 生根、取材與固定采用水培法于暗處使大蒜生根，每天換水兩次。4天后，根長至2.0cm左右。上午10：00用剪刀將根尖剪下，并直接放入固定液中固定，以保持細胞真實的生活狀態(tài),避免操作過程中對細胞生活狀態(tài)的破壞。本次實驗固定時間為14h。2. 解離與水洗本次實驗采用了酸解法使細胞散開。將1mol/l的hcl放入60的恒溫水浴鍋中,將固定好的根尖放入.解離4min。用清水沖洗

4、解離后的材料5次，洗去表面的hcl，并引起后低滲，利于壓片。3. 染色、壓片與鏡檢、拍照截取根尖上分生組織1/3左右于載玻片上，用鑷子將分生組織碾碎；滴上石炭酸品紅染色5min。染完后，蓋上蓋玻片，用解剖針輕敲蓋玻片幾次，以增強細胞擴散程度。 實驗結果通過上述實驗方法獲得了一系列分裂的照片，如圖-1所示。從這一系列圖片我們可以看到有絲分裂是一個連續(xù)的過程，各期的特征如下所述：間期（interphase）：圖-1(a)所示，有絲分裂間期染色體以染色質形式存在，染色質纏繞成絲狀的無規(guī)線團。前期（prophase）：圖-1(b)所示，染色體螺旋化，由無規(guī)線團逐漸變成比較清晰的染色體，核膜核仁消失。中

5、期（metaphase）：圖-1(c)所示，染色體在分裂中期有序地排列在赤道板上，數(shù)目清晰，是染色體形態(tài)觀察的最佳時期。后期（anaphase）：圖-1(d)所示，姐妹染色單體開始分離并在紡錘絲的牽引下移向兩極。 末期（telophase）：圖-1(e)所示，染色體繼續(xù)走向兩極，同時染色體也開始解螺旋，由染色體狀態(tài)逐漸變?yōu)闊o序線團，核膜核仁復現(xiàn)。討論1、大蒜根尖的固定時間在上午9：0011：00和下午15：0017：00為最佳。因為此時是大蒜分裂的高峰期。2、解離的時間要適當，大約4min，因為解離時間的長短與實驗結果的好壞有非常直接的影響，時間過長，則不僅破壞分生組織之間的果膠與纖維素等物質

6、，也使分生組織與伸長區(qū)脫離，染色效果將會降低，而過短，則又達不到分離細胞的結果。3、在切取根尖時大約切從根尖開始算往上1.5mm左右，若切得太短，則只會看到成熟的根冠細胞，在視野中看不到分裂期細胞；若切得太長，則會看到有很多伸長區(qū)的成熟細胞，從而影響實驗結果。4、染色時間不宜過長或過短，染色過深或過淺都會影響最終的實驗結果。5、壓片時用拇指從上往下垂直用力且要避免載玻片與蓋玻片之間的滑動，否則會使細胞之間重疊，影響觀察。6、觀察時先用低倍鏡找到分裂相的位置，再換高倍鏡觀察實驗二 植物細胞減數(shù)分裂的制片與觀察摘要：本實驗選取玉米雄花作為實驗材料，首先將已固定好雄花的花藥剝離出來，然后通過對花粉母

7、細胞進行解離、染色、壓片來觀察細胞減數(shù)分裂的全過程。關鍵詞：減數(shù)分裂 細線期 偶線期 粗線期 雙線期 終變期abstract: in this experiment, we chose zea mays as the material. we got a lot of cells in meiosis. then we disposed the cells in order to observe the whole processes of the meiosis.key words: meiosis leptonema zygonema pachynema diplonema diakine

8、ses實驗原理減數(shù)分裂是生物在形成配子時的一種特殊的分裂方式，是在性母細胞中進行的。減數(shù)分裂產(chǎn)生的每個子細胞染色體數(shù)目減少一半。并且第一次分裂前期特別長，其變化特別復雜，包括同源染色體配對、交換與分離等。實驗用品玉米雄花(zea mays 2n=20)，carnoy固定液(由95%的乙醇和冰乙酸以3：1的比例配置)，鐵礬，蘇木精，恒溫箱，冰乙酸，酒精燈，顯微鏡實驗方法1、 取材與固定（指導老師完成）采集處于減數(shù)分裂時期的玉米雄花，采集時間為上午8：3010：30和下午2：004：00。采集的雄花直接放入新配制的carnoy固定液中固定一周（中間換固定液兩次）。2、 花藥剝離減數(shù)分裂是同步分裂，

9、由于每朵小花中的所有花藥都處于同一時期，因此剝離的量要充足,以便在實驗中能進行選擇。3、 媒染、復染花藥在不傷害花藥的前提下，使用鑷子與解剖針玻璃花藥并放入4%硫酸高鐵銨（鐵礬）水溶液中進行媒染，時間為424h。媒染后，徹底水洗除凈花藥表面的鐵離子。之后放入0.5%的蘇木精中染424h。在25溫箱中進行。染完后再次徹底水洗。除去表面染料。4、 制片、鏡檢與拍照取一枚花藥于載玻片上，滴上一滴45%冰乙酸，并在酒精燈上加熱5秒鐘。材料加熱之后，蓋上蓋玻片，用濾紙折疊成兩層蓋在蓋片上，進行壓片。實驗結果通過上述實驗方法得到以下圖-2：討論1、 在花藥剝離時要注意將穎片剝離干凈，使用的鑷子和解剖針不可

10、傷害花藥，否則花粉母細胞會從傷口處外流，影響實驗效果2、 在挑選花粉粒的時候，應挑選粒大且飽滿的，粒小而癟的花粉往往發(fā)育不良。3、 媒染時間不宜過長或過短，染色過深或過淺都會影響最終的實驗結果。4、 壓片時用拇指從上往下垂直用力且要避免載玻片與蓋玻片之間的滑動，否則會使細胞之間重疊，影響觀察。5、 觀察時先用低倍鏡找到分裂相的位置，再換高倍鏡觀察6、 減數(shù)分裂過程是一個連續(xù)的過程，各時期之間沒有明顯的界限，只要符合這個時期的特征便可作為此時期的分裂相。實驗三 植物細胞多倍體誘導的制片與觀察摘要：本實驗選取大蒜作為實驗材料，通過在培養(yǎng)液中施加秋水仙素的方法培養(yǎng)大蒜根尖細胞從而對其進行多倍體誘導，

11、然后對根尖細胞進行固定、解離、染色、壓片來觀察細胞染色體加倍后的分裂相。關鍵詞：多倍體 秋水仙素abstract: in this experiment, we chose allium sativum as the material. we got a lot of activity floristic cells through cultivating the roots of allium sativum. then we put colchicine into the water. after about 36 hours, we disposed the polyploid cell

12、s in order to observe themselves. key words: polyploidy colchicine實驗原理多倍體是指細胞核內具有兩個以上染色體組，它的產(chǎn)生出了自然發(fā)生外還可人工誘導。誘導多倍體的方法有多種，本實驗采用秋水仙素誘導。它主要作用于細胞分裂過程中紡錘體的形成，使細胞分裂后期染色體不能分向兩極而被阻截在中期，經(jīng)過間期染色體復制，使染色體數(shù)目加倍。實驗用品大蒜（allium sativum 2n=16），carnoy固定液(由95%的乙醇和冰乙酸以3：1的比例配置，秋水仙素，1mol/l的hcl，石炭酸品紅，水浴鍋，顯微鏡，剪刀，礦泉水瓶，蒸餾水 實驗方

13、法1、 生根與秋水仙素處理采用水培法培養(yǎng)大蒜，直至根長約2.0cm。向培養(yǎng)液中加入濃度為0.1的秋水仙素，培養(yǎng)3648h。待根尖膨大時可取材固定。2、 固定、解離（同有絲分裂過程）3、 制片取根尖分生組織一部分放在一潔凈的載片上，先用解剖針把材料碾碎并鋪展開，然后滴上一滴石炭酸品紅染色5min，蓋上蓋片，進行壓片。實驗結果通過以上實驗方法，制取了圖-3。（a） (b)圖-3大蒜的染色體圖（白點示著絲點）圖(a)：2n=16，是未加倍的大蒜細胞中的染色體。圖(b)：4n=32，是經(jīng)秋水仙素加倍后的大蒜細胞染色體。討論1、 染色體加倍的倍數(shù)多少與秋水仙素作用的時間有關。若讓染色體數(shù)目加倍，秋水仙素

14、處理的時間應大于等于細胞的一個分裂周期。如果浸泡的時間大于細胞周期的二倍，則會出現(xiàn)八倍體。若感興趣，可適當延長處理時間，觀察實驗結果。2、 不應該觀察到32條染色體就認定此細胞為四倍體，因為染色體為2n細胞的分裂后期染色體數(shù)也為32條，此時的染色體不含姐妹染色單體。而染色體為4n的細胞中期，含有32對姐妹染色單體。3、 若大蒜根尖細胞被加倍，其尖端部膨大，是認定細胞加倍的理由之一。4、 大蒜根尖的固定時間在上午9：0011：00和下午15：0017：00為最佳。因為此時是大蒜分裂的高峰期。5、 解離的時間要適當，大約4min，因為解離時間的長短與實驗結果的好壞有非常直接的影響，時間過長，則不僅

15、破壞分生組織之間的果膠與纖維素等物質，也使分生組織與伸長區(qū)脫離，染色效果將會降低，而過短，則又達不到分離細胞的結果。6、 在切取根尖時大約切從根尖開始算往上1.5mm左右，若切得太短，則只會看到成熟的根冠細胞，在視野中看不到分裂期細胞；若切得太長，則會看到有很多伸長區(qū)的成熟細胞，從而影響實驗結果。7、 染色時間不宜過長或過短，染色過深或過淺都會影響最終的實驗結果。8、 壓片時用拇指從上往下垂直用力且要避免載玻片與蓋玻片之間的滑動，否則會使細胞之間重疊，影響觀察。9、 觀察時先用低倍鏡找到分裂相的位置，再換高倍鏡觀察專題二：果蠅專題實驗一 果蠅唾腺染色體的觀察摘要：果蠅（drosophila m

16、elanogaster）是研究遺傳學的經(jīng)典材料，它的染色體數(shù)目是2n=8，易于觀察，尤其是果蠅三齡幼蟲階段的唾腺染色體，其唾腺染色體巨大，又稱巨染色體。本實驗通過對果蠅唾腺染色體進行處理和觀察來探求染色體的結構。關鍵詞：果蠅 唾腺染色體abstract: drosophila melanogaster is a classic material of studying genetics. as we all know, drosophila melanogaster has a 2n number of 8, which means we could easy to observe it. e

17、specially for its larval salivary chromosome, it is very huge and clear. so it is called huge chromosome. in this experiment through the observation of the salivary chromosome to explore the structure of chromosome.key words: drosophila melanogaster salivary chromosome實驗原理果蠅三齡幼蟲階段的唾腺染色體處于體細胞同源染色體的配對

18、狀態(tài)，多次復制而不分開，因而形成比一般體細胞根染色體長100-200倍的不螺旋的巨大染色質,又稱為多線染色體，此外上面還常能看到帶紋。本實驗即觀察唾腺染色體的特征。實驗用品黑腹果蠅（drosophila melanogaster），培養(yǎng)基，生理鹽水，解剖針，蒸餾水，石炭酸品紅，載玻片，hcl溶液(1mol/l)，顯微鏡實驗方法1、 三齡幼蟲的培養(yǎng)實驗前將果蠅放入新培養(yǎng)基培養(yǎng)，2325,十天左右。2、 解剖幼蟲把載玻片置于雙筒鏡下。載玻片上滴加生理鹽水一滴，取三齡幼蟲放在其中，操作者兩手各握一枚解剖針，左手解剖針壓住幼蟲后端1/3處，固定幼蟲。右手的解剖針按住幼蟲頭部，用力向右拉，把頭部從身體拉

19、開，唾腺隨之而出，唾腺是一對透明的棒狀腺體。3、 解離在載玻片上除去幼蟲其他組織部分，還要把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈，再把唾腺移到干凈的、預先準備的滴有1mol/lhcl的載玻片上，解離23分鐘。4、 水洗蒸餾水洗滌34次。5、 染色壓片石炭酸品紅染色5分后蓋上蓋玻片，壓片，吸去多余染液。6、 顯微鏡觀察先于低倍鏡下觀察，尋找細胞，再于高倍鏡下觀察染色體形態(tài)特點。唾液腺染色體約5條長臂，點狀染色體附著在染色中心附近，很難看到。在染色體臂上有深淺不一、寬窄不同、粗細不同的帶紋。1. 實驗結果通過上述實驗方法獲得了圖-1。討論1、 在挑選幼蟲時，要挑選個體相對較大，活動能力相對較強的個體。2、

20、在解剖時，頭部解剖針的位置大約在果蠅的眼睛處，后端部解剖針的位置為果蠅身體的1/3處。在拉伸果蠅的時候力度要適當，腸管、神經(jīng)管等全部戳斷從而影響視線。3、 果蠅的一對唾腺染色體為白色透明狀，是其區(qū)分與其他部位的一個明顯特征。4、 在壓片的時候應垂直按壓，且不要使載玻片與蓋玻片之間發(fā)生滑動。在壓片的時侯力度要適當，防止將其唾腺染色體壓斷。實驗二 果蠅的三點測交實驗摘要：果蠅（drosophila melanogaster）是研究遺傳學的經(jīng)典材料，因為它容易采集、培養(yǎng)；它繁殖率高，生活周期短，一般1014天能繁殖一代；它的染色體數(shù)目是2n=8。本實驗選取果蠅為實驗材料了解其飼養(yǎng)條件，性狀識別，觀察

21、完成三點測交的研究。關鍵詞：果蠅 三點測交abstract: drosophila melanogaster is a classic material of studying genetics. firstly, it is easy for us to collect and to feed. secondly, as we all know, drosophila melanogaster has a 2n number of 8, which means we could easy to observe it, furthermore, it also has numerous of

22、gene mutations. finally, its biocycle is very short，therefore it can generate a generation in only 10-14 days. in this experiment we performed the three-point mapping in drosophila melanogaster.key words: drosophila melanogaster three-point mapping實驗原理兩個基因在同一條染色體上呈鏈鎖狀態(tài)時基因間經(jīng)常發(fā)生互換，交換之可作為兩基因間的距離。三個基因在一

23、條染色體上時，通過三點測交可確定三個基因在染色體上的位置順序和基因間的相對距離。實驗用品黑腹果蠅（drosophila melanogaster），野生型形狀為紅眼（+）、長翅（+）、直剛毛（+）；三隱性突變型為白眼（w）、短翅（m）、卷剛毛（sn）。恒溫箱，培養(yǎng)瓶，顯微鏡，乙醚實驗方法1、 實驗果蠅的培養(yǎng)（指導老師完成）分別培養(yǎng)兩種果蠅，78天后，出現(xiàn)幼蟲，去親本。2、 選擇親本特征 雄蠅 雌蠅個體 小 大腹部條紋 3 5腹部末端 圓 尖性梳 有 無性狀選擇 紅眼、長翅、直剛毛 白眼、短翅、卷剛毛(一定要為處女蠅)3、 親本雜交把挑選的雌雄果蠅分別放入同培養(yǎng)瓶內進行雜交，每瓶35對。培養(yǎng)瓶放

24、入25恒溫箱培養(yǎng)。4、 去除親本果蠅雜交78天后，見到f1幼蟲和蛹出現(xiàn)，去除親本。5、 觀察 f1 代果蠅性狀再過 45 天，檢查f1代成蠅性狀。理論上雌蠅全部是紅眼，長翅，直剛毛，基因型為雜合的；雄蠅全部是白眼、短翅、卷剛毛。6、 測交從f1中選出35對果蠅放入同培養(yǎng)瓶內進行雜交，培養(yǎng)瓶放入25恒溫箱培養(yǎng)78天，見到有蛹出現(xiàn)時去親本。7、 f2代果蠅的觀察與統(tǒng)計待蛹羽化成成蟲時，通過觀察其剛毛形態(tài)，眼睛顏色，翅膀大小來確定f2代的表型。 實驗結果1、 f2代果蠅的統(tǒng)計與分析用于測交的雌果蠅是三個基因的雜合體，減數(shù)分裂形成配子時，同源染色體之間又發(fā)生交換的可能，任何兩個基因之間都有可能發(fā)生交換

25、；雄性果蠅只產(chǎn)生兩種配子，這兩種配子只對f2代的果蠅有性別影響，沒有性狀上的影響，所以代的表型有8種，其中6種是重組合，2種是親組合。測交后代表型 觀察數(shù) 重組發(fā)生在m-sn sn-w m-w+ + + 102 0 0 0+ + sn 10 10 10 0+ m + 29 29 0 29+ m sn 22 0 22 22w m sn 42 0 0 0w + + 42 0 42 42w + sn 27 27 0 27w m + 19 19 19 0總計8593120 2932、 三點測交圖距討論1、 在觀察f1代果蠅的性狀時，若觀察結果與理論相符，即雌蠅全部是紅眼，長翅，直剛毛且雄蠅全部是白眼、

26、短翅、卷剛毛，實驗可繼續(xù)進行。假如不是預期結果，實驗不能盲目往下進行。2、 觀察要勤，要及時去除親本，防止子代和親代雜交，影響實驗結果。3、 在開始挑選親本時，乙醚的量要適當，防止因劑量過大造成親本死亡。判斷果蠅是否死亡主要看其翅膀是否向上翹起，若向上翹起則表明果蠅已經(jīng)死亡。4、 在轉換培養(yǎng)基的過程中，若果蠅不幸飛出則要立即處死，絕不能手軟，防止造成實驗室其它果蠅的污染。專題三：動物專題實驗一 小鼠骨髓細胞染色體的制片與觀察摘要：小鼠（mus musculus 2n=40）繁殖周期短，繁殖能力強，是研究分子以及遺傳學的經(jīng)典實驗材料。本實驗采用小鼠骨髓細胞作為實驗材料，因具有旺盛的分裂能力，通過

27、對其進行離心、低滲、固定、滴片、染色來觀察其染色體的形態(tài)結構。關鍵詞：骨髓細胞 染色體abstract: mus musculus , whose cells in bone marrow have a powerful energy in division,is a classic material in learning genetics. in this experiment, we chose the bone-marrow-cell as the material. we got a lot of activity cells from its bone marrow. then w

28、e disposed theh cells in order to observe the structure of the chromosome.key words: bone marrowchromosome實驗原理染色體是細胞分裂時期遺傳物質存在的特定形式，是染色體緊密包裝的結果。此時染色體達到最大收縮，具有典型的形態(tài)。小鼠骨髓細胞具有旺盛的分裂增殖能力，把秋水仙素注入小鼠體內，破壞細胞分裂過程中的紡錘體形成，把分裂固定在中期。將小鼠解剖，取出骨髓細胞，經(jīng)低滲、固定、滴片、染色等處理之后，可觀察到小鼠的染色體。實驗用品小鼠（mus musculus）、秋水仙素溶液、生理鹽水、低滲溶液、g

29、iemsa磷酸緩沖液，離心機，解剖剪，燒杯，顯微鏡，甲醇冰醋酸（1:1）固定液實驗方法1、 藥品的配制（由指導老師完成）秋水仙素溶液：稱10mg的秋水仙素，用100ml生理鹽水溶解生理鹽水：8.5gnacl，溶解在1000ml蒸餾水中，濃度是0.85%低滲溶液：5.59gkcl，用1000ml蒸餾水溶解，濃度是0075%2、 秋水仙素的注射（由指導老師完成）按每克體重約5g的劑量，在處死小白鼠前2h經(jīng)腹腔注射秋水仙素。秋水仙素的作用是破壞細胞分裂中紡錘體的形成，積累細胞中期分裂相。3、 解剖小鼠頸椎脫臼法處死小白鼠，（用手捏住小白鼠頭的后部，并用力下壓；另一手抓住鼠尾，用力向后上方拉，便可使小

30、白鼠的頸椎脫臼，瞬時死亡）立即取下兩后肢連同關節(jié)頭的股骨和脛骨，剔凈其上的肌肉。收集骨髓細胞 用2%檸檬酸鈉溶液洗凈股骨和脛骨，剪去關節(jié)頭，暴露骨髓腔。將吸有適量2%檸檬酸鈉溶液的注射器的針頭從股骨和脛骨的一端插入骨髓腔中，用2%檸檬酸鈉溶液將骨髓吹洗入離心管中，反復沖洗至骨髓腔呈白色為止。4、 離心離心管配平后，1000r/min離心10min，棄去上清液。5、 低滲處理向細胞沉淀中加入5ml低滲液輕輕敲打離心管底部，使其充分接觸，并在37水浴中低滲處理20min。6、 固定低滲處理后，1000r/min離心10min，棄去上清液，沿管壁加固定液，立即將細胞團吹散打勻，靜置15min,然后離

31、心。重復一次。7、 制細胞懸浮液視離心管底細胞多少再加入甲醇冰醋酸（1:1）固定液2-3滴，吹打成懸液。8、 滴片將載玻片在潔凈冰水中預冷，取出后平放在桌面。用吸管吸取2滴細胞懸液，從載玻片上方適當高度處滴到載玻片1/3和2/3處，并立即對載玻片上的細胞懸液吹氣，將細胞懸液吹散吹勻，然后置空氣中自然干燥。9、 染色載玻片充分干燥后，平放，用新鮮配制的1:10的giemsa磷酸緩沖液覆蓋載玻片，染色10min，流水緩緩沖去多余染液，再用吸水紙吸干多余水分，晾干后即可鏡檢。10、 鏡檢采用“弓”字形觀察法，即保證不漏掉每一個細胞。實驗結果根據(jù)上述實驗方法，得到了圖-1，從圖中可以清晰地看到小鼠的染

32、色體數(shù)為2n=40，且全部為端著絲點。討論1、 在取骨髓細胞時，應將脛骨兩端切掉，使之相通。在用生理鹽水沖洗時應從上往下沖，并且反復沖洗，直至紅色褪去為止。2、 在滴片的時候為了讓細胞破裂、分散得更好，滴管與載片之間應保持至少1m的距離，讓細胞摔破。因本人在滴片的時侯距離不夠長，從而導致細胞沒有破裂，從而沒有觀察到預期的結果。（上圖摘自同組同學孫海汐的圖片）3、 滴完片子后，一定讓片子自然干燥后才能染色，否則細胞和染色體會漂浮在液面上，水洗時會被沖掉，影響實驗效果。4、 染色時間大約為15min左右，染色過深或過淺都會影響最終的實驗結果。實驗二 人染色體的制片與觀察摘要：人的外周血中含有豐富的

33、處于分裂間期的淋巴細胞，當經(jīng)過特殊刺激可使其進入分裂期，再用秋水仙素處理便可得到大量中期分裂相的細胞。本實驗采用人外周血作為實驗材料，通過對其進行離心、培養(yǎng)、秋水仙素處理、低滲處理、預固定、二次固定、滴片、giemsa染色處理來觀察其染色體的形態(tài)結構。關鍵詞：外周血細胞 染色體abstract: there are a lot of homeocyte in human blood, which can access to cell division when given a irritation. in this experiment, we chose human blood cell a

34、s the material. we got a lot of activity cells from it. then we disposed theh cells in order to observe the structure of the chromosome.key words: blood cell chromosome實驗原理人體外周血中的淋巴細胞幾乎都處于分裂間期。當在培養(yǎng)基中加入植物性血球凝集素（pha）時，這種淋巴細胞受到刺激轉化為淋巴母細胞，進入分裂期。經(jīng)過短期培養(yǎng)后，用秋水仙素處理就可獲得大量處于分裂中期的細胞，制片后可以清楚地對染色體進行觀察。 實驗用品人外周血、肝

35、素、giemsa染液、雙抗、磷酸緩沖液pbs、秋水仙素、植物性血球凝集素（pha）,培養(yǎng)基, 小牛血清, 青霉素, 鏈霉素, m199, 離心機，甲醇-冰醋酸(3：1）固定液，顯微鏡 實驗方法1、 無菌處理（指導老師完成）所有用器藥品均應消毒，培養(yǎng)基、pha、雙抗用過濾方式滅菌。2、 培養(yǎng)基配制（指導老師完成）取m199 4ml，小牛血清1ml，青霉素、鏈霉素0.04ml，肝素3-4滴，pha0.3ml置于培養(yǎng)瓶中。3、 采血無菌條件下靜脈取血0.2-0.3ml放入培養(yǎng)液中。4、 培養(yǎng)細胞在37溫箱中培養(yǎng)72h，期間經(jīng)常搖動培養(yǎng)瓶。5、 秋水仙素處理培養(yǎng)68h左右，加入秋水仙素溶液，以獲得較多

36、的中期相，搖勻后，繼續(xù)培養(yǎng)44h，可進行染色體制片。6、 低滲處理培養(yǎng)物倒入離心管中，1000r/轉 離心8分鐘去掉上清液，沉淀物為紅細胞和白細胞，然后加入少量預熱37的0.075m kcl,小心用吸管吹氣混勻后，放入37恒溫箱中低滲20分鐘左右，低滲的作用在于使紅細胞破碎，白細胞膨脹破裂，最終導致染色體分散。7、 預固定加入1ml新配制的甲醇-冰醋酸（3：1）固定液，均勻后立即以1000r/轉離心7分鐘，用吸管吸去全部上清液，輕彈離心管底部，使沉淀成糊狀。8、 第一次固定加入5ml固定液，用吹管吹打均勻，固定15分鐘，以1000r/轉離心7分鐘，去掉上清液。9、 第二次固定重復上述操作過程，

37、去掉上清液，視管底細胞多少加入新鮮固定液，制成懸浮液。10、 滴片玻片洗凈后放于冰箱中冰凍，滴片時用吹管吹取細胞懸浮液，滴于載片上，滴片高度應少高些，每張片滴1-3滴，滴后用嘴吹，有助于細胞分散，滴片后斜放，在空氣中干燥11、 giemsa染色取1-2張片，用giemsa染液和磷酸緩沖溶液配成1:10的工作液，滴于載片上染色15分鐘，自來水沖洗后鏡檢。實驗結果通過上述實驗方法，得到圖-2。從圖中可以清晰地看到人的染色體數(shù)為2n=46。討論1、 在滴片的時候為了讓細胞破裂、分散得更好，滴管與載片之間應保持至少1m的距離，讓細胞摔破。此次實驗吸取上次實驗的教訓，所以獲得了較為成功的制片。2、 滴完

38、片子后，一定讓片子自然干燥后才能染色，否則細胞和染色體會漂浮在液面上，水洗時會被沖掉，影響實驗效果。3、 染色時間大約為15min左右，染色過深或過淺都會影響最終的實驗結果。4、 在取血時，手一定要輕，防止紅血細胞混到血清中。5、 加固定液時，一定要邊加邊用食指彈撥離心管，讓細胞充分散開，防止細胞聚集。實驗三 人染色體的分帶染色法摘要：染色體分帶技術是鑒定單個染色體和染色體組的一種手段，它利用特殊的染色方法使染色體產(chǎn)生明顯的染色的暗和染色的命帶相間的帶型形成了鮮明的染色體個體性，本實驗因用吉姆薩染液，故稱為g帶。關鍵詞：吉姆薩染液 胰蛋白酶abstract: the technology of

39、 detaching chromosome band is an important method to identify each chromosome or chromosome set through using special colorant. because it can make the chromosome show two kinds of different belts. in this experiment we use giemsa, so it can be called g-belt.key words: giemsa trypsase實驗原理人染色體經(jīng)過胰蛋白酶處

40、理后，染色體上的蛋白質被酶水解只留下裸露的dna，在吉姆薩染液的過程中，不同的堿基在吉姆薩中著色深淺不同，因此會看到顏色深淺不一的帶紋。 實驗用品 吉姆薩染液 pbs 胰蛋白酶溶液實驗步驟1、 胰蛋白酶處理將上次試驗制得的人染色體的片子取出在室溫下將玻片標本浸入胰蛋白酶工作液中處理25秒左右。2、 漂洗再在pbs中漂洗30秒。3、 染色在giemsa染液中染7分鐘左右。4、 水洗玻片標本在細流自來水下沖洗直至水流不再有顏色為止，在沖洗標本時，不要沖洗標本的正面，以防染色體被水流沖洗掉，空氣干燥。5、 鏡檢采用“弓”字形觀察法，即保證不漏掉每一個細胞。結果通過上述實驗方法，得到圖-3。從圖中可以

41、清晰地看到人的染色體數(shù)為2n=46，且有明顯的帶紋.討論1、 玻片標本在胰蛋白酶溶液處理前須在37溫箱內處理4天左右，才可以得到滿意的結果。2、 用胰蛋白酶處理染色體的時間要恰當，方可使染色體外表面的蛋白質水解。3、 染色時間不要太長，以防因時間過長而導致染色體沒有明顯分帶，所有染色體染色過深。4、 在挑選染色體時，盡量挑選染色體比較長的，這樣使分帶更加明顯。實驗四 dna的粗提取摘要：雞血紅細胞與人的紅細胞不同，存在細胞核，當中含豐富的有dna，而且雞血細胞極易吸水脹破。本實驗以雞血為實驗材料，利用dna在不同濃度的nacl下溶解度不同的方法來粗提取dna。關鍵詞： dna 紅細胞abstr

42、act: different from human blood, the red blood cell in chick has nucleus, where there are numerous of dna. in this experiment we chose the chick blood as the material and disposed it in order to abstract the dna.key words: dna red cell實驗原理雞血紅細胞與人的紅細胞不同，存在細胞核，當中含豐富的有dna，而且雞血細胞極易吸水脹破。首先破壞細胞膜，然后通過高速離心，

43、由于dna的分子量較大，所以會下沉，這樣重復多次可得到較粗的dna。而后利用dna在不同濃度的nacl下溶解度不同的方法來粗提取dna。實驗用品10%檸檬酸鈉、2mol/l nacl 、二苯胺、0.15 mol/l nacl、pbs、離心機、冰乙醇、紗布、蒸餾水、玻璃棒、雞血、燒杯實驗方法1、 取雞血殺活雞取雞血，同時放入抗凝劑檸檬酸鈉溶液。具體制備方法如下：取質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液100 ml，置于500 ml燒杯中，注入新鮮的雞血（約180 ml），同時用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免血液凝結。2、 離心將血液倒入離心管內進行離心，用1000 r/min離心

44、5min，使血細胞沉淀于離心管底部。3、 破碎細胞，釋放dna雞血細胞中的dna與核蛋白結合，位于雞血細胞的細胞核中，正常情況下是不會釋放出來的。為了使dna從細胞核中釋放出來，需要向雞血細胞液中加入蒸餾水，并且攪拌，從而使血細胞膜和核膜脹破。用玻璃棒攪拌可以加速細胞的破裂。注意應沿一個方向快速攪拌，但也不能太快太猛，防止打碎dna。一般5-10 ml的雞血細胞液加入20 ml蒸餾水攪拌5 min。釋放出來的大量dna和rna往往與蛋白質結合在一起，用單層紗布進行過濾，除去一些顆粒較大的雜質。4、 溶解細胞核內的dna在濃度較高的nacl溶液中核蛋白容易解聚，游離出的dna溶解在溶液中。在溶液

45、中加入4060 ml體積濃度為2mol/l的nacl溶液，攪拌1min。5、 dna的析出將溶液中的dna與其他雜質分離，加蒸餾水降低nacl溶液濃度，使dna析出。緩慢貼壁加入蒸餾水，并輕輕地沿一個方向不停地均勻攪拌，以利于dna分子的附著和纏繞。使nacl溶液的終濃度為0.1-0.2 mol/l。加水過程分多次進行，當總加水量為80ml左右時，dna已基本析出。用2層紗布對dna稀釋液進行過濾，濾去蛋白質，收集dna的黏稠物。6、 dna的初步純化將dna黏稠物再溶解，繼續(xù)用2 mol/l的nacl溶液20 ml溶解dna黏稠物，仍舊沿一個方向不停攪拌，使dna充分溶解，以免損失。用2層紗

46、布進行過濾，濾去雜質，收集含有dna的濾液。向濾液中貼壁緩慢加入等倍體積的冰乙醇，并用玻璃棒朝一個方向緩慢、均勻地攪拌，溶液中會出現(xiàn)dna絲狀物，卷起。用0.02mol/l的nacl溶液1ml溶解絲狀物,并加入二苯胺。7、 dna的鑒定同時將對照組（只含二苯胺試劑）與實驗組水浴加熱進行顯色反應。實驗結果經(jīng)過一段時間后實驗組溶液變藍，對照組溶液顏色不變。討論1、 在取雞血的時侯，同時用玻璃棒進行攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免血液凝結。2、 由于溶液中dna含量較少，過濾時應在不溢出的基礎上，使濾液盡可能多地透過紗布，盡量避免浪費。3、 實驗中應以同一方向攪拌溶液，以避免dna被打斷。實

47、驗五 血影的制備摘要：雞血紅細胞與人的紅細胞不同，存在細胞核.本實驗以活雞血為原料通過多次的離心，學會粗略的提取細胞膜的方法。關鍵詞： 細胞膜 紅細胞abstract: different from human blood, the red blood cell in chick has nucleus. in this experiment we chose the chick blood as the material and disposed it in order to abstract the cell membrane. key words: cell membrane red c

48、ell實驗原理雞血細胞的細胞膜具有選擇透過性，較大的物質一般情況下不會從細胞膜透出。若采用5p7.6溶液作用于細胞，便可以改變細胞膜的通透性，使其通透性增大，從而可以通過高速離心的方法使與細胞質分離，制備血影。實驗用品10%檸檬酸鈉，pbs，5p7.6溶液實驗方法1、 離心取10ml血液加入2倍體積的pbs，裝入離心管進行1000r/min，時間為5分鐘的離心。2、 取沉淀，再次離心倒出上清液，重復第一步3、 混合沉淀中加入20倍體積的5p7.6溶液，混合均勻后在常溫中靜置25min4、 離心取10ml裝入離心管進行15000r/min，時間為20分鐘的離心。5、 鏡檢去掉上清液，取出紅色沉淀

49、上層，在顯微鏡下進行觀察。實驗結果通過上述實驗方法，得到了圖-4討論1、 在取雞血的時候，同時用玻璃棒進行攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免血液凝結。2、 在加入低滲液時，一定要邊加邊攪拌，使紅細胞與低滲液充分接觸。3、 在取細胞膜的時候，要取最上表層，不要取得過多。防止細胞內容物影響實驗結果。專題四：鏈孢霉的雜交及四分子分析摘要：粗糙鏈孢霉（nerospora crassa）屬真菌類，是進行四分子遺傳學分析的好材料。本專題選取粗糙鏈孢霉賴氨酸缺陷型和野生型為實驗材料，對雜交所得后代的表現(xiàn)型進行觀察分析，進而了解順序排列的四分體的遺傳學分析方法。關鍵詞：鏈孢霉 交換abstract: nerospora crassa is a good material to tetrad analysis. in this experiment we observed the second division segregation of gametogamy by the lys+ and lys-. t