人前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒分析檢測說明書

1、.人前列腺素 E2（PGE2）ELISA 試劑盒分析檢測說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：48T25ng/L-800ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本前列腺素E2（PGE2）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人前列腺素 E2（PGE2）水平。用純化的人前列腺素 E2（ PGE2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素 E2（ PGE2），再與 HRP標(biāo)記的前列腺素 E2（PGE2）抗體結(jié)合，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化

2、成最終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的前列腺素 E2（PGE2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人前列腺素 E2（PGE2）濃度。試劑盒組成120 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7終止液3ml×1 瓶2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶 8標(biāo)準(zhǔn)品0.5ml ×1（1600ng/L ）瓶3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml ×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶 10說明書1 份5顯色劑 A液3ml×1瓶 11封板膜2 張6顯色劑 B液3ml×1/ 瓶 12密封袋

3、1 個(gè)標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含 NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支， 用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。800ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的 5號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200ng/Ll 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150 l 的 4號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo);.準(zhǔn)品稀釋液100ng/L2 號標(biāo)準(zhǔn)品150l

4、的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ng/L1 號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150 l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加 樣：分別設(shè)空白孔 （空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑， 其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50l ，待測樣品孔中先加樣 品稀釋液 40l ，然后再加待測樣品 10 l （樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置 37溫育 30 分鐘。4.配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30

5、 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50l ，空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50l ，再加入顯色劑 B50l ，輕輕震蕩混勻，37避光顯色 15 分鐘 .10. 終止：每孔加終止液 50l ，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴

6、中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)（× n×5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異，

7、以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1試劑盒保存：； 2-8 。2有效期： 6 個(gè)月;.The performance of kit:1 sensitivity: minimum detection concentration is less than 1 standard. Linearity of dilution. Sample linear regression and the expected concentration correlation coefficient R value is 0.990.2: no specific reaction with other cytokin

8、es.3 repeatability: plate, plate between the coefficients of variation were less than 10%.Human type III procollagen amino terminal peptide ELISA kit steps:1 before use, all reagents and mixing. Do not allow liquid to produce a large number of bubbles, so as to avoid adding a large number of bubbles

9、, resulting in the addition of the error.2 according to determine the number of sample number plus standard strip number. Each standard and blank hole is recommended to do the hole. Each sample can be made according to its own quantity, and can be used as a hole in the hole.3 diluted after standard

10、50ul in reaction hole, added to the sample 50 UL in reaction hole to be measured. Immediately joined the 50 UL antibody biotin. Cover the membrane plate, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius for 45 minutes.4 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off

11、the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 4 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.5 per hole adding chain affinity enzyme -HRP 100ul, gently oscillating mixing, 37 degrees 30 minutes incubation.6 left hole liquid, each hole filled with

12、 washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 4 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.7 per hole adding substrate A, B 50ul, gently oscillating mixing, 37 degrees 5 minutes incubation. Avoid ligh

13、t.8 remove ELISA plate, quickly add 50ul terminated liquid, adding the stop solution immediately after the determination results.9 od determination of each hole at the wavelength of 450nm.;.The result of judgment and analysis:1, instrument value: Yu Bo 450nm ELISA od read the hole on the instrument2

14、, to the OD value as a vertical coordinate (y), corresponding ot standard concentrations as a horizontal coordinate (x), do have corresponding curve, sample ot content can be according to the OD value by standard curve conversion out corresponding concentration, multiplied by the dilution multiple; or with the standard concentration and the OD value calculated the regression equation of the