英文翻譯抗血栓藥氯吡格雷的化學(xué)酶合成方法

1、抗血栓藥氯吡格雷的化學(xué)酶合成方法摘要：L-鄰氯苯甘氨酸經(jīng)確認(rèn)是已知的抗血栓藥氯吡格雷中結(jié)構(gòu)的一部分。我們準(zhǔn)備通過酶催化光學(xué)純手性砌塊拆分鄰氯苯甘氯酸甲酯。最好的結(jié)果就是通過固定化枯草桿菌蛋白酶,酶交聯(lián)聚合獲得堿性蛋白酶。高的對映體過量合成子保持不變的氯吡格雷合成，簡單的過程使這個途徑適合大規(guī)模生產(chǎn)。1介紹氯吡格雷是一種抗血小板聚集和抗血栓形成的藥物，減少動脈粥樣硬化事件的管理包括心肌梗死、缺血性中風(fēng)和周圍性血管疾病,廣泛用于血管內(nèi)支架布局后結(jié)合阿司匹林。 在兩個可能的立體異構(gòu)體中,只有(S)型對映體適用于制藥應(yīng)用中,因為(R)型對映體是缺乏抗血栓形成的活性,并在實驗中導(dǎo)致動物抽搐。鄰氯苯甘氨酸

2、（S）型是一個非天然的氨基酸且在市場上銷售的外消旋混合物，是一種有價值的合成氯吡格雷的中間體，立體中心與取代基的兩個分子嚴(yán)格相關(guān)。 幾種(S)型的合成法來自于解決拆分(RS)鄰氯苯甘氨酸,或其酯類,通過與酒石酸的形成非對映的鹽或樟腦磺酸分步結(jié)晶。 另外，準(zhǔn)備工作在經(jīng)濟(jì)上更不合適,因為50%的最終產(chǎn)品必須被丟棄，推遲這項拆分到最后一步,也就是說,結(jié)晶(RS)氯吡格雷與(1R)樟腦磺酸,或其前體與(2R,3R)酒石酸的結(jié)晶推遲。苯甲基的質(zhì)子的存在使得芳基甘氨酰胺外消旋化傾向:溫和的條件和酶的立體選擇性轉(zhuǎn)換促使我們嘗試生物催化的方法以便獲得光學(xué)純的鄰氯苯甘氨酸與所需的結(jié)構(gòu)。雖然很多成功的例子關(guān)于酶催

3、化苯基甘氨酸已經(jīng)在文獻(xiàn)上報道，只有少數(shù)關(guān)于鄰氯苯甘氨酸的案例被描述。苯基甘氨酸和一些類似物,不同的取代芳環(huán),包括鄰氯苯甘氨酸可作為半合成青霉素和頭孢菌素的原料，已經(jīng)準(zhǔn)備采用D乙內(nèi)酰脲酶。(RS)型鄰氯苯甘氨酸已經(jīng)成功地被Fadnavis等人通過固定化青霉素G酰基?；附鉀Q。2結(jié)果與討論2.1酶催化RS型鄰氯苯甘氨酸的拆分首先,我們計劃去探討生物陰極轉(zhuǎn)換羧基或氨基的可能性,即酶催化水解或合成酯3和酰胺4。表1酶法水解(RS)31.高效液相色譜法計算。2.酸的結(jié)構(gòu)得到光學(xué)純的分配與高效液相色譜法相比(S)2和(S)3(見下文)。3.(S)結(jié)構(gòu)屬于未反應(yīng)的酯3。 方案1：枯草桿菌蛋白酶水解(RS)6

4、。表2酶法水解(RS)61.由高效液相色譜C18固定相而定。2.由叔丁氧羰基切除后高效液相色譜手性固定相而定。3.酸5的結(jié)構(gòu)被指定,與文獻(xiàn)的D值相比，6被酯化。 我們從脂肪酶篩選開始,同時考慮到穩(wěn)定的性能、選擇性和可大規(guī)模生產(chǎn)的工業(yè)效用。然而,盡管寬類底物的選擇性,包括氨基酸,只有低ee(0-25%)后得到鄰氯苯甘氨酸甲酯3水解,從不同的起源利用脂肪酶。(從豬胰脂肪酶,PPL,從假單胞菌發(fā)射光譜,PFL,從圓柱假絲酵母,從南極假絲酵母,CAL B) 添加一個離子液體1-丁基3-甲基咪唑四氟硼酸鹽，選擇苯基甘氨酸, 并沒有提高對映體純度。在其他的水解酶中,只有胰凝乳蛋白酶提供一個滿意結(jié)果。酸(S

5、)2 ee停滯在40%67%,當(dāng)改進(jìn)反應(yīng)條件時,狀況卻得不到改善。一家韓國集團(tuán)最近獲得一項專利用堿性蛋白酶催化解決鄰氯苯甘氨酸甲酯, 但是,枯草桿菌蛋白酶(從枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌或嘉士伯方案1),在我們的手中,只提供部分濃縮(S)3(23 - 27% ee)。值得注意的是,在這種情況下,普遍(S)異構(gòu)體是未反應(yīng)的酯。(見表1,條目10,11)。這個事實可以解釋的觀測報告,枯草桿菌蛋白酶的催化部位排向脂肪酶的催化的鏡像站點。CALA和B可以?；?RS)鄰氯苯甘氨酸甲酯3到4a或4b在有機(jī)溶劑中,但是,正如報告中苯基甘氨酸甲酯隨著PPL和PFL，他們的行動是沒有選擇性的。從蜂蜜曲霉?；D(zhuǎn)移酶

6、,到鏈霉菌屬不能識別N乙酰衍生物作為襯底，N三氟乙?；?變成2，收益率變低（24小時后變?yōu)?0%),沒有立體選擇性。這些初步結(jié)果促使我們處理甲酯篩選,選擇容易移動的(TFA治療)逆轉(zhuǎn)錄酶叔丁基羰基組。從脂酶檢測,只有PPL顯示非常低的活動,改變叔丁氧羰基甲酯，由6到5羧酸收益變低。胰凝乳蛋白酶,這是一個更有前途的酶，在無保護(hù)的情況下甲酯3沒有改變叔丁氧羰基衍生物6，甚至在4天之后。方案2試劑與條件： (i) CH3OH, DCC, DMAP, CH2Cl2; (ii) TFA, CH2Cl2; (iii) 20% NH4OH; (iv) TsCl, (iPr)2O, Et3N; (v) Na

7、HCO3, KI, CH3CN; (vi) paraformaldehyde,ClCH2CH2Cl, HCl in DMF表3高效液相色譜條件1.檢測器波長對所有化合物被設(shè)定在220納米,除了9(250納米)。2.流量為1毫升/分鐘,除了9(0.7毫升/分鐘)。3.每個樣本注入的10微升。這些令人滿意結(jié)果與Arosio等人報道的詳細(xì)研究蛋白酶催化水解的一系列硫代酸酯相一致。用以代替carboxyester的ethylthioester,被作者選自適合完成襯底通過原位催化基礎(chǔ)繼續(xù)(R)異構(gòu)體的外消旋化。使用難聞氣味己二硫醇l被認(rèn)為不適合大規(guī)模制備的目的,另一方面,考慮到(RS)鄰氯苯甘氨酸的低成

8、本對最終產(chǎn)品的價值，完成去消旋化過程不是強(qiáng)制性的,在任何情況下(R)異構(gòu)體可能后來外消旋和回收。由于氯吡格雷的合成需要(S)甲基酯而不是(S)酸，我們設(shè)法使用枯草桿菌蛋白酶嘉士伯作為生物催化劑在相反的反應(yīng),也就是說,酸5的酯化。事實上,在這種情況下,由于酶(S)異構(gòu)選擇,(S)酯6需要被獲得。幾個有關(guān)枯草桿菌蛋白酶催化酯化的氨基酸或peptideshave例子被報道,但在我們的示例中只有起始物料在所有條件下測試時被發(fā)現(xiàn)。由于這些結(jié)果可能是由于甲醇的負(fù)面影響,我們嘗試使用一個已知的酶,更穩(wěn)定的枯草桿菌蛋白酶制劑,交叉連接酶聚合商商品化（諾維信）被稱為Alcalase。然而在這種情況下沒有觀察到5

9、到6的酯化。然而,枯草桿菌蛋白酶提供的實驗優(yōu)點促使我們測驗這個酶水解條件下的制備。從有機(jī)溶劑的研究中，四氫呋喃提供了最好的結(jié)果ee(> 98%),而在乙腈和二甲基甲酰胺ee分別只有79%和65%。使用交聯(lián)酶在四氫呋喃/水也縮短了反應(yīng)時間,所需的40%的變成了(S)酸5在14小時后實現(xiàn),而不是自由枯草桿菌蛋白酶在叔丁基甲基醚/水中所需的63小時。 (S)型異構(gòu)體5通過酯化反應(yīng)移除保護(hù)基(TFA)而使用(S)甲基酯3(90%的收益率),氯吡格雷制備的合成子被轉(zhuǎn)化。2.2 由（s）型鄰氯苯甘氨酸合成氯吡格雷從報道的氯吡格雷的合成提供四氫吡啶一部分形成作為第一步,緊隨其后的是引入合適的氯苯衍生品

10、，另外,四氫吡啶成環(huán)反應(yīng)后在衍生苯硫酚乙醇7和8或9甲酯(RS)3中,我們選擇了第二種方法制備光學(xué)純化學(xué)酶促精制(S)3并處理,沿襲文獻(xiàn)的方法描述(RS)3、9在乙腈與甲苯磺酸鹽8的碳酸氫鈉提供中間9(70%)。最好的結(jié)果(50%的收益率)雜環(huán)形成了與多聚甲醛(作為甲醛來源)福爾馬林或1、3二氧戊環(huán)提供較低的收益率和更復(fù)雜的最終反應(yīng)混合物(方案2)。(S)1的ee由手性柱高效液相色譜分析。2.3高效液相色譜分析在鄰氯苯甘氨酸無保護(hù)的案例中，酶促反應(yīng)的進(jìn)展可以現(xiàn)場實時監(jiān)控，使用手性柱。叔丁氧羰基衍生品的案例中,一個手性柱篩選同時執(zhí)行兩個監(jiān)控有難度。我們因此決定通過C18柱控制反應(yīng)進(jìn)程,擱置ee評

11、估到移除叔丁氧羰基團(tuán)之后。 這樣我們不僅能夠檢測生物轉(zhuǎn)化的立體化學(xué)的結(jié)果，而且驗證了一些外消旋化是否最終發(fā)生在去保護(hù)步驟。由于已知硫代酸酯主要為外消旋化，所以我們不僅要檢測ee的最終產(chǎn)物1，還要檢測所有的中間產(chǎn)物。實際上，我們嘗試著將(s)-3作為自由基（作為甲苯磺酸鹽8的親核取代）從三氟醋酸鹽中移除BOC，使用0.5M的碳酸氫鈉反應(yīng)生成10%的R型同分異構(gòu)體。相反的，當(dāng)與20%氫氧化銨反應(yīng)時，沒有觀察到外消旋化。通過使用手型固定相，中間產(chǎn)物9和最終產(chǎn)物1的光學(xué)純度就都可以確定。選擇列,移動階段,收集和保留時間收錄在表3。3.結(jié)論光學(xué)純的氯吡格雷,一種結(jié)構(gòu)為蛋白氨基酸即 (S)型鄰氯苯甘氨酸的

12、抗血栓藥物,32%的收益來自于鄰氯苯甘氨酸甲基酯。這種手性合成子通過化學(xué)酶法來獲得,是由于苯甲基的質(zhì)子的存在。為了避免頻繁的對硫代酸酯進(jìn)行外消旋化，通過立體選擇容易獲得的蛋白酶催化水解(RS)6觀察到了最好的結(jié)果。使用交聯(lián)聚合的枯草桿菌蛋白酶(堿性蛋白酶),而不是一個游離酶,不僅簡化了實驗過程和酶的復(fù)蘇, 相比于類似的對映體過量，也明顯縮短了反應(yīng)時間(14小時而不是63小時)。為了評估所有中間體對映體純度,高效液相色譜法在對于每個化合物的手性固定相的研究更方便。流程中的良好產(chǎn)率,氯吡格雷和枯草桿菌蛋白酶的工業(yè)效益以及酶催化的有效性使這個合成途徑適合大規(guī)模生產(chǎn)，而為了避免冗長且費(fèi)時的分步結(jié)晶非對

13、映的刺激過程,通常用于S型異構(gòu)體的案例。4.實驗4.1.綜述所有的試劑和酶是從Sigma-Aldrich購買的。所有反應(yīng)都使用薄層色譜法，在60，F(xiàn)254的硅膠預(yù)涂板以及110攝氏度下的三酮溶液里被觀測(0.3g的丁醇，100ml和3ml醋酸)。TLC洗滌液是由水、丁醇、乙酸(5:4:1)混合,劇烈攪拌后的有機(jī)相分離,。在60(0.063 - -0.200毫米)(默克公司)的硅膠上用柱層析法進(jìn)行。用Bruker-Avance 500 MHz光譜儀記錄核磁共振波譜。在25攝氏度時可以用PerkinElmer241旋光計測定1分米的細(xì)胞旋光度。用高效液相色譜法分析Merck-Hitachi l -

14、 6200。質(zhì)譜被記錄在一個熱電Finnigan LCQTM離子阱質(zhì)譜儀上。使用PerkinElmerDSC-7儀器進(jìn)行差示掃描量熱法(DSC)。4.2 N-Boc（RS）鄰氯苯甘氨酸5 向在50ml水中鄰氯苯甘氨酸(10g，0.054mol)的懸浮液中添加1，4二惡烷(40ml)和氫氧化鈉(2.37g,2.37mol)。在添加乙酸叔丁酯碳酸氫鈉(12.4mol,0.054mol)之后,將混合物在室溫下攪拌18小時。在薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)展。濃縮混合物在換算壓力,增加了1 M鹽酸直到pH值變?yōu)?。通過抽吸獲得了沉淀產(chǎn)品(13.7g,89%的收率)。核磁共振氫譜表征為(CDCl3) d 1.23

15、 (s, 9H, CH3C), 5.75 (d, 1H, CH, J 4.5 Hz), 7.22 7.34 (m, 2H, Ar),7.41 (d, 1H, Ar, J 6.5 Hz), 7.51 (d, 1H, Ar, J 6.9 Hz), 8.23 (d, 1H, NH, J 4.5 Hz)。4.3. N-Boc-(RS)鄰氯苯甘氨酸甲酯6向80ml干燥的二氯甲烷的化合物5(3g、10.5mmol)的溶液中按順序添加80ml的無水甲醇DCC(2.38g,2.38mmol)和DMAP(0.12g,1.05mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時。利用薄層色譜監(jiān)測酯的形成。白色沉淀被吸入，用p

16、H值8(2*20毫升)的碳酸氫鈉溶液洗滌濾液,用硫酸鈉處理干燥然后減壓蒸發(fā)。用硅膠柱層析法純化殘留物(1/10)提供純的6(洗滌液己烷/乙酸乙酯98:2,2.7 g,86%)。核磁共振氫譜表征為(CD3OD) d 1.47 (s, 9H, CH3C), 3.74 (s, 3H, CH3O), 5.73 (br s, 1H, CH), 7.307.38 (m, 2H, Ar), 7.43 (m, 1H, Ar), 7.50 (m, 1H, Ar)。4.4. N-Boc(S)鄰氯苯甘氨酸54.4.1. 枯草桿菌蛋白酶催化水解(RS)鄰氯苯甘氨酸6 向TBME(18ml)的(RS)型6(1g，3.3

17、4mmol)的溶液中添加pH值7.5的緩沖劑(0.1 M KH2PO4/0.1 M氫氧化鈉50ml/ 40.9ml)(36ml)和蛋白酶從地衣芽b(24毫克,255 U)。通過添加0.5 M的氫氧化鈉并且不停地攪拌保持溫度在35度,pH值維持在7.5。反應(yīng)過程由高效液相色譜監(jiān)測(見表3)。制備高效液相色譜分析的樣品如下:一些水和有機(jī)相,20和10個,分別被收集后,通過氮?dú)鈿饬饕瞥宥』酌选＜尤爰状贾?通過0.45 lm GHP ACRODISC過濾掉混合物，對濾液進(jìn)行了分析。轉(zhuǎn)換了40%后(65小時)pH值是8并且將水相從有機(jī)分離后,提取到叔丁基甲醚(5 15ml)。在ph為3時提取出水相

18、與叔丁基甲醚,用硫酸鈉干燥,用 (S)-酸5 (0.33 g, 35%)，然后在減壓下過濾和蒸發(fā)。aD = +101 (c 1,CH3OH). MS (ESI-) m/z 284 (M1 with Cl), 286 (M1 with Cl)用三氟乙酸處理樣本,化合物6如下所述,用高效液相色譜(表3)分析,以確定ee(> 99%)。4.4.2. 堿性蛋白酶催化水解(RS)鄰氯苯甘氨酸6向9ml四氫呋喃，90ml的水的(RS)鄰氯苯甘氨酸6(1g，3.34mmol)溶液中添加,pH值8的2M氫氧化鈉。添加蛋白酶(10g，255U)并攪拌保持溫度在30度。在轉(zhuǎn)化率達(dá)到40%（14小時）時,提取

19、出反應(yīng)的混合物以及叔丁基甲醚（3*80ml）；水相通過去除酶被過濾并且在酸化使pH值為3后,提取叔丁基甲醚（4*60ml）。用硫酸鈉處理有機(jī)相,在過濾后,減壓蒸發(fā)來獲得酸5(0.32 g, 34%)。一個樣本在切除保護(hù)基團(tuán)后來提供化合物2的鹽,用高效液相色譜法分析了ee(seeTable 3)，顯示98%。4.5. N-Boc S鄰氯苯甘氨酸甲酯6提前對(RS)5進(jìn)行表達(dá)，然后進(jìn)行對S酸5(0.6g,0.6mmol)的酯化。天然的S甲酯6(0.6g, 95%)沒有進(jìn)一步提純，用于下一步。這個樣本是純凈的用于分析。D = +119.3 (c 1, CHCl3) lit.aD = +117.14.

20、6. (S)鄰氯苯甘氨酸甲酯3向在10ml二氯甲烷的S鄰氯苯甘氨酸甲酯（樣品6）的溶液中逐滴添加二氯甲烷（10ml）的三氟乙酸 (0.64 mL, 8.35 mmol)的溶液,并且在室溫下攪拌。由薄層色譜法檢測反應(yīng)過程，直到起始物料消失不見（3小時后）。把殘渣(高效液相色譜ee 98%)溶解在水(10ml)中，添加20%的氨水直至ph為7。提取二氯甲烷（3*20ml），接著用硫酸鈉處理溶劑，過濾蒸發(fā)溶劑以獲得目標(biāo)化合物3。0.315 g, 90% 從(S)-5中, 98% ee。D = +123 (c 1, CH3OH) lit.30 aD = +134. 1H NMR (CDCl3) d 2

21、.3(m, 2H, NH2), 3.75 (s, 3H, CH3O), 5.06 (br s, H, CH), 7.257.33 (m, 2H, Ar), 7.367.43 (m, 2H, Ar).4.7. 2-2噻吩基乙基1-甲苯磺酰8將甲苯磺酰氯化物(4.55g,23.87mmol)和三乙胺(3.36ml,24.1mmol)噻吩基乙醇添加到二異丙醚(23ml)的噻吩基乙醇7(3g,23.4mmol)溶液中,室溫下攪拌直到起始物料(50小時,薄層色譜法 甲苯/乙酸乙酯9:1,用5%磷鉬酸乙醇溶液檢測)。用15ml的水洗滌有機(jī)相與10ml30%的碳酸鉀溶液和水（10ml）反應(yīng)，然后用硫酸鈉干燥

22、，過濾在減壓下蒸發(fā)以獲得甲苯硫酸鹽8 (5.85 g, 86%)。核磁共振表征為(CDCl3) d 2.47 (s, 3H,CH3Ar), 3.20 (t, 2H, CH2CH2O, J 7 Hz), 4.25, (t, 2H, CH2O, J 7 Hz),6.82 (d, 1H, H-30 , J 3.4 Hz), 6.92 (m, 1H, H-40), 7.16 (d, 1H, H-50 , J5 Hz), 7.34 (d, 2H, Ar, J 8 Hz), 7.78 (d, 2H, Ar, J 8 Hz).4.8.S鄰氯苯甘氨酸甲基-2-2-thien-2乙胺基醋酸鹽9向乙腈(11ml)

23、甲苯磺鹽酸8(2.8g,2.8mmol)的3(2.2克,2.2中毒)溶液中添加碳酸氫鈉(1.1g,13.2mmol)和碘化鉀(0.18g,1.1mmol)。攪拌混合物直到回流（14小時）。在這之后添加0.18g的碘化鉀，讓反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行6小時直到回流。在減壓下蒸發(fā)溶劑并30ml乙酸乙酯溶解殘渣。用10ml的水和15ml的15%的氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相。在用硫酸鈉干燥，過濾，在減壓下去除溶劑（結(jié)晶）。用硅膠柱色譜法精制粗產(chǎn)品。用9:1的己烷/乙酸乙酯洗滌以獲得純凈的9。通過高效液相色譜法顯示Ee達(dá)到了98%，見表三。核磁共振表征為(CDCl3) d 2.21 (m, 1H, NH), 2.82 (m

24、,1H, CHN), 2.96 (m, 1H, CHN), 3.07 (t, 2H, CH2-thienyl, J 7 Hz), 3.72 (s, 3H, CH3O), 4.98 (br s, 1H, CHCOOCH3), 6.85 (d, 1H, H-30 ,J 3.4 Hz), 6.94 (m, 1H, H-40), 7.15 (d, 1H, H-50 , J 5 Hz), 7.237.32 (m, 2H, Ar), 7.357.43 (m, 2H, Ar). MS (ESI+) m/z 310 (M+1 withCl), 312 (M+1 with Cl)。4.9. 氯吡格雷1向20ml

25、的1 -二氯乙烷的樣品9(1 g, 3.23 mmol)溶液中添加多聚甲醛(0.11 g, 3.67 mmol)；攪拌混合物直到回流，移去水，保持沸騰4小時。冷卻到30攝氏度時，逐滴加入10m4%的二甲基甲酰胺鹽酸溶液。加熱混合物直到回流（2小時），反應(yīng)過程由薄層色譜監(jiān)測(甲苯/乙酸乙酯95:5,檢測有5%的磷鉬酸乙醇溶液)。冷卻到室溫，加入200ml的水，通過添加30%的碳酸鉀溶液調(diào)節(jié)ph到7.5。提取醋酸乙酯（3*100ml），接著用100ml的水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，在減壓下去除溶劑獲得殘渣0.67g，通過硅膠柱層析法精制（己烷/乙酸乙酯=98:2 作為洗滌劑），得到純凈的樣品1作為

26、成品。核磁共振表征為(CDCl3) d 2.872.96 (m, 4H, H-6 and H-7), 3.68 (d, 1H, H-4, J 4 Hz), 3.75 (s,3H, CH3O), 3.80 (d, 1H, H-4, J 4 Hz), 4.97 (br s, 1H, H-8), 6.68 (d,1H, H-3, J 5 Hz), 7.08 (d, 1H, H-2, J 5 Hz),7.247.36 (m, 2H, H-12 and H-13), 7.44 (d, 1H, H-14, J 7.7 Hz), 7.74 (d, 1H, H-11, J7.7 Hz). MS (ESI+)

27、m/z 322 (M+1 with Cl), 324 (M+1 with Cl).aD = +45 (c 1, CH3OH). Ee 98% (通過高效液相色譜法)。用于分析的樣本轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硫酸氫鹽。D = +54.8 (c 1, CH3OH) （文獻(xiàn)值） aD = +55. DSC (5 C/min) 熔化吸熱峰在178.50攝氏度。(dH 75.769 J/g)。應(yīng)答這項工作在財務(wù)上是由意大利米蘭帕多瓦大學(xué)支持的。我們感謝Fiamma Ronchett教授有益的論述。序號儀 器型 號生 產(chǎn) 廠 家1精密增力電動攪拌器JJ-1/100w上海常思工貿(mào)有限公司2循環(huán)水式真空泵SHZ-D(III

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30、公司13氨水28%AR上海凌峰化學(xué)試劑有限公司14乙二醇二甲醚98%CP上海凌峰化學(xué)試劑有限公司15氯化鋰97%AR廣東光華科技股份有限公司引用：1. Escolar, G.; Heras, M. Drugs Today 2000, 36, 187199.2. Jarvis, B.; Simpson, K. Drugs 2000, 60, 347377.3. Chow, G.; Ziegelstein, R. C. Am. J. Cardiovasc. Drugs 2007, 7, 169171.4. Schwartz, N. E.; Albers, G. W. Curr. Neurol. N

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