白細(xì)胞介素1B基因多態(tài)性、幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)生的相關(guān)性

1、白細(xì)胞介素1B基因多態(tài)性、幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)生的相關(guān)性         08-05-15 11:18:00     編輯：studa20              作者：廖愛軍，蘇琦，田鋒，姚育紅，曾斌【摘要】  目的 探討湖南衡陽地區(qū)白細(xì)胞介素1B（IL1B）基因多態(tài)性與胃癌的關(guān)系以及幽門螺桿菌（Helicobacter pylor

2、i,HP）感染后胃癌發(fā)生的易感基因型。方法 52例胃癌患者癌旁正常胃粘膜組織和55例慢性胃炎患者胃粘膜組織，均經(jīng)快速尿素酶和PCR檢測HP，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性（PCRRFLP）分析技術(shù)，進行基因型檢測，并對C/C、T/T進行測序，比較各基因型在胃癌組和胃炎組中的分布差異。結(jié)果 IL1B31T、IL1B511T等位基因和IL1B31T/T、IL1B511T/T基因型在胃癌組的分布頻率高于胃炎組(P<0.05)，OR值分別為1.97(95%CI=1.153.59)、2.52(95%CI=1.454.39)和2.71(95%CI=1.106.66)、3.33(95%CI=1.

3、149.73)。在伴有HP感染的群體中進行比較，IL1B31位點各基因型未見明顯差異；但I(xiàn)L1B511T等位基因和IL1B511T/T基因型在胃癌組的分布頻率高于胃炎組(P<0.05)，OR值分別為2.16(95%CI=1.104.23)和3.43(95%CI=1.0111.62)。結(jié)論 在湖南衡陽地區(qū)IL1B31T/T、IL1B511T/T基因型與胃癌發(fā)病風(fēng)險相關(guān)，在HP被感染后IL1B511T/T基因型可能為湖南衡陽地區(qū)胃癌易感基因型。 【關(guān)鍵詞】  白細(xì)胞介素1B；基因多態(tài)性；胃癌；幽門螺桿菌    胃癌是由環(huán)境因素和遺傳因素共同引發(fā)的惡性腫

4、瘤。在環(huán)境因素中，HP感染是主要因素，被認(rèn)為是胃癌發(fā)生的啟動因素和促進因素。目前世界上已有半數(shù)以上的人被HP感染，但其中大多數(shù)為無癥狀感染者，只有極少數(shù)發(fā)展成胃癌，因而認(rèn)為存在這些差別的原因既有HP本身的因素，也有宿主本身的因素。    為此，本實驗在湖南衡陽地區(qū)以慢性胃炎患者作為對照，探討該地區(qū)患者被HP感染后IL1B31和IL1B511基因多態(tài)性與胃癌發(fā)生的關(guān)系。    1  材料和方法    1.1  材料    實驗組：72例胃癌標(biāo)本均來自2005

5、年3月2005年12月南華大學(xué)附一醫(yī)院，經(jīng)病理確診(賁門癌除外)，所有病例術(shù)前均未行放療或化療，術(shù)前2周未口服抗生素治療。取胃竇部約0.5g癌旁正常粘膜組織(距癌灶>5cm)分為2塊，1塊行快速尿素酶檢測HP,1塊切成米粒大小置于-80冰箱凍存。實驗組及對照組患者均來自于湖南衡陽地區(qū)。    對照組：70例標(biāo)本來自本院胃鏡室活檢組織，無系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和胃癌家族史，術(shù)前2周未口服抗生素治療,病理確診為慢性淺表性胃炎。取胃竇粘膜組織2塊，1塊行快速尿素酶檢測HP，1塊置于-80冰箱凍存。    1.2

6、60; 實驗方法    1.2.1  基因組DNA的提取    實驗組胃竇部癌旁正常粘膜組織和對照組胃竇部粘膜組織，各取米粒大小一塊，分別放入無菌EP管中用無菌眼科剪剪碎，按照上海生工DNA抽提試劑盒要求操作，DNA提取后于-20冰箱中保存。    1.2.2  HP的檢測    （1）快速尿素酶法檢測HP  試劑盒由福建三強公司提供，按試劑盒要求操作，加入組織樣本后5min內(nèi)顏色逐漸變紅為陽性，不變色則為陰性。   

7、; （2）PCR檢測幽門螺桿菌(HP) UreA基因  試劑盒由上海生工提供，引物參照文獻(xiàn)1由上海生工合成，上游：5GCCAATGGTAAATTAGTT3；下游：5CTCCTTAATTGTTTTTAC3；擴增出的UreA基因片段長度為411bp。反應(yīng)體系為25l，包括PCR Master 12.5l，上、下游引物各1l，模板DNA1l,去離子水9.5l。反應(yīng)條件為94 5min 1個循環(huán)；94 1min，47 1min，72 1min，35個循環(huán)；72延伸10min。產(chǎn)物于2%的瓊脂糖凝膠（溴化乙錠染色）電泳，100V恒壓30min，紫外燈下觀察結(jié)果。出現(xiàn)411bp橙色條帶的為HP陽

8、性，無條帶則為陰性，見圖1。    (3)診斷標(biāo)準(zhǔn)及檢測結(jié)果  所有標(biāo)本經(jīng)兩種方法檢測HP，兩種方法同為陽性則為HP陽性，同為陰性則為HP陰性，一陽一陰者剔除。最后測出實驗組標(biāo)本52例，對照組標(biāo)本55例。    1.2.3  基因多態(tài)性檢測    (1)IL1B31和IL1B511位點PCR擴增  引物由上海生工合成，序列為：IL1B31上游：5    M：100bpDNA marker；14：HP陽性結(jié)果；5：陰性結(jié)果  &

9、#160; 圖1  HPUeaA基因檢測結(jié)果照片    AGAAGCTTCCACCAATACTC3下游：5AGCACCTAGTTGTAAGGAAG 3。IL1B511 上游：5TGGCATTGATCTGGTTCATC 3下游：5GTTTAGGAATCTTCCCACTT 3。擴增體系均為25l，包括PCR Master 12.5l，上、下游引物各1l，模板DNA 1l,去離子水9.5l。反應(yīng)條件為94 5min 1個循環(huán)；94 30s，57 40s ，72 45s，35個循環(huán)；72延伸10min。產(chǎn)物于2%的瓊脂糖凝膠（溴化乙錠染色）電泳，100V恒壓30

10、min，紫外燈下觀察結(jié)果。    (2)PCR擴增產(chǎn)物的限制性內(nèi)切酶消化  酶切體系為20l，其中內(nèi)切酶0.5l，PCR產(chǎn)物5l，緩沖液2l ，去離子水12.5l，37水浴4h。瓊脂糖凝膠電泳及結(jié)果判定：3%的瓊脂糖凝膠（溴化乙錠染色）電泳，100V恒壓50min，紫外燈下觀察結(jié)果。IL1B31位點存在CT的基因多態(tài)性現(xiàn)象，為Alu I 酶切位點，基因型31C/C不被切開，只有239個為一個片段；31C/T產(chǎn)生239bp、137bp和102bp三個片段；31T/T產(chǎn)生137bp和102bp兩個片段，見圖2。IL1B511位點也存在CT的基因多態(tài)性現(xiàn)象，為Ava I 酶切位點，基因511C/C酶切后產(chǎn)生190bp和115bp兩個片段；511C/T產(chǎn)生305bp、190bp和115bp三個片段；511T/T產(chǎn)生305bp一個片段，見圖3。    1.2.4  CT突變和RFLP分析的可靠性證實    隨機挑選電泳圖上顯示的兩種不同純合子基因型的PCR產(chǎn)物送上海生工進行直接測序，見圖47。&#