白背三七多糖的提取純化及含量測定

1、白背三七多糖的提取純化及含量測定                              作者：姜曼花 邱細(xì)敏 劉勝姿  彭勝 黎強(qiáng)【摘要】  目的確定白背三七多糖的最佳提取方案，對其多糖進(jìn)行分離純化和含量測定。方法建立正交實(shí)驗(yàn)，對其提取方案進(jìn)行優(yōu)化；通過Sevage法脫蛋白、

2、乙醇沉淀以及DEAE52柱層析進(jìn)行分離純化；蒽酮-硫酸法測定其總多糖含量。結(jié)果溫度90，固料比1:9，提取時(shí)間2 h；提取次數(shù)2次，所得多糖的含量最高。蒽酮-硫酸法測得粗多糖含量為1.49%；DEAE52柱層析分離純化分別得到組分、組分、組分。結(jié)論水提白背三七多糖工藝簡便，投資少，有利實(shí)現(xiàn)化大生產(chǎn)。 【關(guān)鍵詞】  白背三七 多糖 蒽酮-硫酸法Abstract：ObjectiveTo fix an optical extractive method and to make separation，purification and content determination of poly

3、saccharide in Gynuradivaricata(L.)DC. MethodsOrthogonal experiment was introduced to study the  optimum extraction process of Gynuradivaricata(L.)DC. polysaccharide (GDPS）. The polysaccharide was purified using sevage deprotein and DEAE-52 column chromatography.To make content determination wit

4、h the method of anthranone-sulphuric acid.ResultsThe optimal extracting conditions were:extracting temperature 90， the ratio of solid and liquid 1:9； extracting time 2h and extracting twice;the content percentage of rude polysaccharide was 1.49%. GDPS、 were obtained through DEAE-52 column chromatogr

5、aphy.ConclusionIt's simple, costless to extract polysaccharide with water-boiling method.Key words：Gynura divaricata(L.)DC.;  Polysaccharide;  Extraction and purification;  Content determination     白背三七Gynuradivaricata(L.)DC.為菊科三七草屬植物，又名白(百)子菜，分布于至華南、西南一帶，喜生于潮濕的陰地上

6、1，根、莖、葉均可入藥，其根及根莖味甘，性涼，有清熱、涼血、散淤消腫之功效，用于咳嗽痰喘、肺癰、崩漏、燙傷、跌打損傷、刀傷出血等癥；而莖葉味咸，微辛，性涼，有消熱，舒筋及止血，祛淤的作用，用于鎮(zhèn)咳、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、骨折、創(chuàng)傷出血、癰腫瘡疥等癥。在民間則作為一種保健野菜，由于其能促進(jìn)人體新陳代謝，增強(qiáng)體力，滋補(bǔ)強(qiáng)身，延年益壽而備受青睞。湖南岳陽地區(qū)眾多糖尿病患者長期食用，有效控制了血糖升高，因不知植物名而被患者稱為“救命草”。網(wǎng)上則稱其為“神奇的植物”，也有稱其為“明日葉”或“明日草”等。藥研究表明，多糖(polysaccharide) 是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一，多糖在增強(qiáng)免疫力2、降血糖、抗

7、腫瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面發(fā)揮著生物活性作用。因此對多糖的研究與開發(fā)已越來越引起人們的廣泛關(guān)注。關(guān)于白背三七栽培技術(shù)報(bào)道較多3，化學(xué)活性成分僅見該植物吡咯啶生物堿4、黃酮類成分5，6及脂肪酸成分分析7，8的報(bào)道，尚未見其多糖的研究報(bào)道。本文報(bào)道白背三七多糖的提取純化及含量測定。1  器材1.1  儀器UV-2501 PC紫外分光光度計(jì)，DEAE-52層析柱 1.2    藥材與試劑無水乙醇、濃硫酸、蒽酮、氯仿、正丁醇（均為分析純）、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、白背三七藥材（岳陽市場上購買）。2 

8、方法2.1  白背三七多糖的提取表1  因素與水平（略）2.2  脫蛋白本實(shí)驗(yàn)采用sevage法脫蛋白，粗多糖加適量水溶解，加入1/5體積的sevage試劑（氯仿正丁醇=41），強(qiáng)烈振搖30 min。靜置分層，除去交界處變性蛋白，重復(fù)處理3次。在200400 nm處掃描未見蛋白質(zhì)吸收峰。2.3  粗多糖的分離純化2.4   粗多糖含量測定91         3  結(jié)果 3.1  正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。   

9、 通過正交實(shí)驗(yàn)可知：提取最佳條件為A2B3C1D2，即提取溫度90 ，固料比19，提取時(shí)間2 h；提取次數(shù)2次時(shí)，提取效果最好。因素影響順序分別為提取溫度>固液比>提取次數(shù)>提取時(shí)間。表2  正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）3.2  多糖含量測定表3  標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制（略）以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得回歸方程A= 0.005 1C +0.004  r=0.9998，結(jié)果（表3）表明在24192 g范圍內(nèi)葡萄糖含量與吸光度呈良好的線性關(guān)系.。白背三七樣品吸光度為0.15703，將其代入回歸方程得到C=30.0(g/ml)。  &

10、#160; 多糖的含量()= C×D×VW×1001.49表4  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表5  加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）3.3  多糖分離純化結(jié)果 將白背三七粗多糖以不同濃度KCl為洗脫溶劑過DEAE-52層析柱，洗脫曲線見圖1。有3個(gè)洗脫峰。將此3個(gè)洗脫峰組分分別命名為組分、組分、組分。4  討論4.1  提取條件實(shí)驗(yàn)采用單因素確定正交因素水平，建立正交實(shí)驗(yàn)方法，對白背三七多糖的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化。由單因素實(shí)驗(yàn)和正交分析結(jié)果可知該多糖提取中，溫度是主要影響因素，其次是固液比；提取時(shí)間和提取次數(shù)影響不顯著。因此在提取時(shí)

11、應(yīng)注意控制提取溫度和固液比，該工藝條件簡單，穩(wěn)定可行，多糖提取率高，穩(wěn)定性好，可作為總多糖的提取工藝條件，為有效開發(fā)利用白背三七提供了方法學(xué)基礎(chǔ)。圖1  DEAE-52 洗脫曲線（略）4.2  純化工藝采用DEAE52 柱層析純化，分別用蒸餾水以及0.05，0.1，0.3，0.5的KCl進(jìn)行了分離純化，根據(jù)洗脫曲線，主要得到3個(gè)洗脫峰，由此可初步判斷白背三七中至少含有三種多糖成分，其中以0.05KCl洗脫峰面積最大，推測此為該藥材中含量最高的多糖部分。4.3   含量測定采用蒽酮硫酸法測定粗多糖的含量，與陳文11等人在測定白術(shù)時(shí)采用的苯酚硫酸法相比較，該

12、法無需進(jìn)行苯酚蒸餾等顯色試劑預(yù)處理，操作簡單，穩(wěn)定性好。在研究中，可通過測定生理活性成分含量來衡量白背三七有無藥用開發(fā)價(jià)值，因此此方法的確立可為白背三七開發(fā)利用提供一定的依據(jù)。    綜上所述，白背三七中多糖尚待進(jìn)一步研究，通過基礎(chǔ)的提取方法的確定和純化，為進(jìn)一步的分析鑒定和多糖藥理研究奠定了基礎(chǔ)?！尽?#160; 1 廣東植物研究所.海南植物志M.北京:科技出版社，1974：416.2 李麗立，張 彬，朱南山，等.白術(shù)多糖對早期斷奶仔豬部分免疫性能的影響J.農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研究，2007，28(4):487.3 梁 萍.時(shí)尚野菜富貴菜高產(chǎn)栽培技術(shù)J.廣西農(nóng)學(xué)報(bào)，2006，23(3):4.4 Roeder E，Eckert A，Wiedenfeld H. Pyrrolizidine alkaloids from Gynura divaricata J.Planta Medica，1996，62(4):3861.5 胡 勇，李維林，林厚文，等.白背三七地上部分的化學(xué)成分J.天然藥物，2006，4(2):156.6 黃 騏，林榮華，鄭 釗.白子菜總黃酮含量的測定J.福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)(科學(xué)版)，2006，22(2): 118.7 郭巨先，楊 暹.華南主要野生蔬菜的脂肪酸成分分析J.中國野生植物資源，2004，23 (2):47.8 郭