不同商品規(guī)格黃芪中2種苷類成分的含量測定2

1、 不同商品規(guī)格黃芪中2種苷類成分的含量測定 摘要：目的：比較不同商品規(guī)格黃芪中2種苷類成分(黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷)的含量。方法：采用高效液相色譜法，對不同商品規(guī)格黃芪中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量進行測定。結(jié)果：一級、二級、三級、四級黃芪藥材中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量分別為0.114 2、0.129 8、0.157 3、0.284 3 mg.g1和0.054 7、0.057 4、0.0481、0.052 2 mg.g1。結(jié)論：黃芪甲苷含量與黃芪藥材商品等級成負相關(guān)，毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量與其商品等級沒有規(guī)律。建議等級劃分在考慮藥材外觀性狀直徑、長短時，應(yīng)根據(jù)不同的應(yīng)用需

2、求，結(jié)合有效成分的含量測定進行綜合評價。 關(guān)鍵詞：黃芪：商品等級；黃芪甲苷；毛蕊異黃酮葡萄糖苷；含量測定黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus (Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus embranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，為臨床常用補氣中藥之一1。化學成分研究結(jié)果表明，黃芪藥材主要含皂苷類、黃酮類和多糖類等活性成分2。藥理作用研究表明，皂苷類為其抗病毒、保肝、抗腫瘤、改善心臟功能、抗炎、鎮(zhèn)痛及抑制滑膜成纖維細胞增殖等生物活性3；黃酮類成分具有調(diào)節(jié)免疫、抗心肌缺血、保肝、抗炎、抗突

3、變、清除自由基等多種生物活性4。其中皂苷類化合物主要是黃芪甲苷，具有強心、清除氧自由基、Ca2+通道的調(diào)控、減少炎癥物質(zhì)的產(chǎn)生、抗衰老、抗高糖、抗病毒及心臟、腦、肝、腎的保護作用等藥理作用5；黃酮類化合物主要包括毛蕊異黃酮、芒柄花素等2，而毛蕊異黃酮具有抗局部缺血損傷、阻斷鈣離子通道、舒張血管、減輕血管緊張素引起的內(nèi)皮細胞損傷等多種血管保護效應(yīng)6 黃芪商品規(guī)格以長短、粗細分為四個等級7，市場上多以飲片大小決定質(zhì)量優(yōu)劣及價格高低8。現(xiàn)行版中國藥典對黃芪的質(zhì)量評價主要是采用高效液相色譜法對其所含的黃芪甲苷、黃酮類進行含量測定9，中國藥典也是測定其黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷1，有報道黃芪不同商品規(guī)

4、格中黃酮類含量不同8,10，而不同商品等級規(guī)格黃芪中2種苷類成分的含量測定則尚未見報道。為此，本試驗采用高效液相色譜法測定黃芪中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量，比較不同商品規(guī)格對黃芪中2種苷類成分含量的影響，為研究黃芪中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的變化提供實驗依據(jù)，為進一步完善其質(zhì)量標準提供參考依據(jù)。1儀器與試藥1.1儀器 1100 LC高效液相色譜儀(美國Agilent公司，DAD檢測器，ELSD檢測器)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；W2018型恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司)；RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-III循環(huán)水式真

5、空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)；AE240天平梅特勒一托利多儀器(上海)有限公司；FZl02 型微型植物試樣粉碎機(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。2.2試藥 黃芪甲苷對照品、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為：110781200613、20633674，供含量測定用)；甲醇、乙腈為色譜純(德國默克公司)，水為超純水，其他試劑均為分析純。黃芪藥材購買于重慶市萬州區(qū)中藥材市場，經(jīng)重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W校李潔玉老師鑒定為豆科植物蒙古黃芪Amembranaceus var.mongholicus或膜莢黃芪A.embranaceus，的干燥根；不同商品規(guī)格黃芪區(qū)分：一級：長5

6、0以上，上中部直徑15 以上，末端直徑不少于0.5。 二級：長40以上，上中部直徑1以上，末端直徑不少于0.4，間有老皮。三級：根不分長短，上中部直徑0.7，末端直徑不少于0.3，間有破短節(jié)子、老皮。四級：又名毛條，即細支根和須根。2方法與結(jié)果2.1黃芪甲苷的定量分析2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 色譜柱：Agilent SB-C18柱(46 mm× 150，5um)；流動相為乙腈-水(32：68)；流速：1 mL.min-1；柱溫30：ELSD漂移管溫度：90；氮氣流量：2.5 mL.min-1；進樣量10uL，碰撞器：關(guān)。2.1.2溶液的配制2.1.2.1對照品溶液的制備 取

7、黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含400ug的溶液，即得。2.1.2.2供試品溶液的制備 取本品中粉約2.0g，精密稱定，置索氏提取器中，精密加入甲醇40 mL，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4h，靜置放冷，濾過，回收甲醇至干，殘渣加蒸餾水10mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼續(xù)用 70乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10m

8、L容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。2.1.2.3線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液(含黃芪甲苷400ugmL-1)5、10、15、20、30 uL，注入液相色譜儀，得進樣量X(ug)與峰面積Y的線性方程。結(jié)果表明，黃芪甲苷進樣量在2.0120 ug與峰面積成良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=1.678 6 C+4.934 2，r=0.999 2(n=5)。2.1.2.4精密度試驗 取黃芪甲苷對照品溶液(400ugmL-1)，進樣量10uL，連續(xù)測定，進樣5次，測定黃芪甲苷對照品峰面積的RSD為122(n=5)，表明儀器精密度良好。2.1.2.5重復(fù)性試驗 取同一黃芪樣品5份(一等品)，按“2.

9、1.2.2”項下供試品溶液的制備方法制備及“2.1.1”項下色譜條件測定，測得黃芪甲苷RSD為12l(n=5)，表明本方法重復(fù)性良好。2.1.2.6穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液(一等品)，室溫密閉放置，分別在制備后0、4、8、12、24h進樣，測定黃芪甲苷峰面積，RSD為1.88(n=5)，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.1.2.7加樣同收率試驗 精密稱取已知含量的黃芪約材約2.0g(一等品)，共6份，分別精密加入一定量的黃芪甲苷對照品，按“2.1.2.2”項下供試品溶液的制備方法制備及“2.1.1”項下色譜條件測定。結(jié)果表明，其平均回收率為99.22，RSD為1.28，符合分析要求。2128

10、樣品含量測定 分別按“2.1.22”項下供試品溶液制備方法制備，平行3份，按“2.1.1”項下色譜條件測定，以峰面積代入回歸方程中計算黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表1。表1不同商品規(guī)格黃芪中黃芪甲苷的含量(n=3)No.不同商品規(guī)格 黃芪甲苷mg.g-1 RSD% 1 一級 0.114 2 1.282 二級 0.129 8 1.623 三級 0.157 3 1.544 四級 0.284 3 1.63 22毛蕊異黃囿可葡萄糖苷的定量分析2.2.1笆譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 色譜柱為Agilent SB-C18柱(4.6 ×150，5um)；流動相為乙腈-0.2甲酸溶液，梯度洗脫：O20 min

11、(20A40A)，2030 min(40A)；溫度為30。C；檢測波長為260 nm；流速為1mLmin-1進樣量10uL。2.2.2溶液的配制2.2.2.1對照品溶液的制備 取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含100ug的溶液，即得。2.2.2.2供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約2.0g，精密稱定，置250mL圓底燒瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流4h，靜置放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。2.2.2.3線性關(guān)系考察 分別

12、精密吸取對照品溶液(含毛蕊異黃酮葡萄糖苷100 ug.mL-1)l、5、lO、15、20 uL，注入液相色譜儀，得進樣量x(ug)與峰面積y的線性方程。結(jié)果表明，毛蕊異黃酮葡萄糖苷進樣量在0.102.00 ug與峰面積成良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=24933.180 9C+0.3064，r=0.999 1(n=5)。2.2.2.4精密度試驗 取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液(100 ug.mL-1)，進樣量10uL，連續(xù)測定，進樣5次，測定毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品峰面積的RSD為0.24(n=5)，表明儀器精密度良好。2.2.2.5重復(fù)性試驗 取同一黃芪樣品5份(一等品)，按“2.2.2.2”

13、項下供試品溶液的制備方法制備及“2.2.1”項下色譜條件測定，測得毛蕊異黃酮葡萄糖苷RSD為128(n=5)，表明本方法重復(fù)性良好。2.2.2.6穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液(一等品)，室溫密閉放置，分別在制備斤O、4、8、12、24 h進樣，測定毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積，RSD為1.48(n=5)，表明樣品溶液住24 h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.2.7加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的黃芪約材約1.Og(一等品)，共6份，分別精密加入一定量的毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品，按“2222”項下供試品溶液的制備方法制備及“2.2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果表明，其平均吲收率為9829，RSD為176，符合分析要

14、求。2.2.2.8樣品含量測定 分別按“2222”項下供試品溶液制備方法制備，平行3份，按“221”項下色譜條件測定，以峰而積代入回歸方程中計算毛蕊異黃酮葡萄苷的含量，結(jié)果見表2。表2不同商品規(guī)格黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量(n=3) No.不同商品規(guī)格 毛蕊異黃酮葡萄糖苷/mg.g-1RDS/% 1 一級 0.054 7 1.322 二級 0.057 4 1.723 三級 0.048 1 1.085 四級 0.052 2 1.82 3討論 由表1和表2可知，結(jié)果表明黃芪不同商品規(guī)格中2種苷類成分含量有一定差異，黃芪藥材中黃芪甲苷的含量為四級三級二級一級，毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量為二級>

15、;一級四級三級，黃芪藥材中黃芪甲苷的含量隨其等級降低含量越高，而毛蕊異黃酮葡萄糖苷則規(guī)律性不強，這與田圣志等8，10-11所測得的結(jié)果趨勢基本一致。其含量的高低對其質(zhì)量的影響較大，制定藥材及飲片標準以及炮制制劑生產(chǎn)過程時應(yīng)加以重視。因此本試驗對黃芪商品藥材規(guī)格與黃芪質(zhì)量的關(guān)系進行了初步探討，對黃芪藥材的質(zhì)量評價具有積極意義，值得進一步研究。 由于本試驗所取樣品有一定的局限性，但仍有一定的代表性，市售黃芪根據(jù)其長短、粗細來分等級從而決定其價格，存在一定的不合理性，也提示在制定黃芪藥材和飲片質(zhì)量標準時應(yīng)予考慮黃芪商品規(guī)格的區(qū)別。 本試驗結(jié)果表明黃芪藥材中較細者黃芪甲苷含量較高，而毛蕊異黃酮則無較好的規(guī)律性。近年來，隨著黃芪野生資源匱