急性水腫性胰腺炎內(nèi)源性RAS的活化與局部微循環(huán)障礙關(guān)系的研究

1、急性水腫性胰腺炎內(nèi)源性RAS的活化與局部微循環(huán)障礙關(guān)系的研究               作者：彭曉暉 吳春燕 劉巍立 崔鳳奎 周總光1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和主要儀器、試劑 Wistar雄性大鼠50只，體重170220g，由華西醫(yī)大動(dòng)物中心提供，禁食不禁水24h。適應(yīng)環(huán)境。按隨機(jī)化原則將大鼠分為5組（n=10）:1組為正常組;2、3、4、5組分別為急性水腫性胰腺炎（acute edematous pancreatitis，AEP）自然病程2h、4h、6h

2、和8h組。主要儀器和設(shè)備:蛙皮縮膽囊肽（Caerulein）及異硫氫酸熒光素（FITC）購(gòu)自Sigma公司;血管緊張素放免檢測(cè)及淀粉酶檢測(cè)試劑盒為國(guó)產(chǎn)分析純。Olympus X-70熒光顯微鏡。1.2 動(dòng)物模型的建立 在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左背腹膜后間隙皮下注射蛙皮縮膽囊肽（Caerulein）誘發(fā)AEP 1 。先注射5.5g/kg，1h后再注射7.5g/kg，2次共13g/kg。正常組注入相應(yīng)劑量生理鹽水，以第1次注射為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始點(diǎn)。1.3 紅細(xì)胞標(biāo)記及胰腺局部微循環(huán)的觀察 參照Klar（1995）的方法用異硫氫酸熒光素（FITC）標(biāo)記紅細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后分別在4h、6h、8h以1%戊巴比妥鈉（3040mg

3、/kg）腹腔麻醉，靜脈注入FITC標(biāo)記的紅細(xì)胞后用Olympus X-70熒光顯微鏡對(duì)胰腺微循環(huán)進(jìn)行活體觀察。1.4 標(biāo)本采集、檢測(cè) 抽取下腔靜脈血3ml。1.5ml經(jīng)ED-TA抗凝后，1500r/min低溫離心（4°C）5min，分離血漿，檢測(cè)血漿血管緊張素;1.5ml檢測(cè)血清淀粉酶（AMS）（碘-淀粉比色法）;取胰腺組織100mg加1N醋酸1ml煮沸，冷卻后勻漿，3500r/min低溫離心15min，取上清液采用放免法檢測(cè)胰腺局部組織的Ang。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料用x±s表示。組間采用t檢驗(yàn)，Ang與胰腺局部微循環(huán)血量變化的相關(guān)性采用線性回歸分析，P0.05有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義。          2 結(jié)果   2.1 AMS活性變化 見(jiàn)表1。由表1可以看出，與正常對(duì)照組相比，AEP組AMS活性顯著升高。但AEP組內(nèi)各時(shí)段AMS的活性比較差異無(wú)顯著性（P0.05）。2.2 血漿Ang的活化 見(jiàn)圖1。由圖1可以看出與正常組相比，AEP組Ang活性隨時(shí)間的延長(zhǎng)而持續(xù)上升，且各組間差異有顯著性（P0.05）。2.3 胰腺局部組織RAS的活化 與正常對(duì)照組相比，胰腺局部組織RAS的活化在AEP組上調(diào)，并隨時(shí)間的延長(zhǎng)而繼續(xù)增加（圖1）。2.4 胰腺局部組織活體觀察 發(fā)現(xiàn)

5、在疾病早期胰腺小葉局部微循環(huán)即開(kāi)始出現(xiàn)血液流速減慢、流量減少等微循環(huán)障礙的表現(xiàn)（表2）。表1 血清淀粉酶以及胰腺干濕比的測(cè)定值 （略） 注:與正常組血清淀粉酶相比，# P0.001;與正常組胰腺干濕比相比，* P0.05 圖1  AEP組血漿和局部組織Ang含量的變化（略）表2 FITC紅細(xì)胞標(biāo)記胰腺微循環(huán)活體觀測(cè) （略）注:與正常對(duì)照組相比，* P0.0012.5 AEP組胰腺局部組織RAS的活化與胰腺局部微循環(huán)血量變化的相關(guān)性分析 胰腺局部微循環(huán)血量隨著RAS活化的上調(diào)而逐漸減少，相關(guān)分析顯示兩者呈顯著線性相關(guān)（r=0.5449，P0.05）。3 討論腎素-血管緊張素系

6、統(tǒng)（RAS）作為循環(huán)的激素系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)心血管、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)等的影響，在維持血壓及水電解質(zhì)平衡方面起著重要的調(diào)節(jié)作用，其效應(yīng)肽血管緊張素（Ang）通過(guò)相應(yīng)的受體AT1、AT2發(fā)揮關(guān)鍵作用。隨著認(rèn)識(shí)的深入，人們發(fā)現(xiàn)相對(duì)于全身循環(huán)的、系統(tǒng)的RAS，多個(gè)組織器官存在著局部組織的RAS，并可以通過(guò)自分泌以及旁分泌等方式參與多種物質(zhì)表達(dá)的調(diào)控、細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、纖維化以及炎癥反應(yīng)，以適應(yīng)各自不同的功能調(diào)節(jié) 13 。胰腺組織就是新近發(fā)現(xiàn)的穩(wěn)定存在內(nèi)源性RAS的組織之一，多個(gè)研究已經(jīng)從形態(tài)學(xué)上證明在胰腺血管內(nèi)皮細(xì)胞、導(dǎo)管上皮細(xì)胞、腺泡細(xì)胞以及胰島細(xì)胞存在RAS不同組分的表達(dá) 4 ，并且發(fā)現(xiàn)在急性炎癥時(shí)表達(dá)上

7、調(diào)，但對(duì)其在胰腺炎病理生理變化中的作用目前尚不完全明了。而隨著對(duì)急性胰腺炎病理生理過(guò)程認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步加深，人們觀察到急性胰腺炎的發(fā)生、發(fā)展并非完全取決于胰酶的組織溶解作用，而與以缺血為特征的胰腺微循環(huán)障礙有著極其重要的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)缺血可導(dǎo)致胰腺細(xì)胞功能的破壞、腺泡內(nèi)大量胰酶被激活、鈣離子內(nèi)流、溶酶體膜的破壞和酶的釋放，從而導(dǎo)致病變的加重。而Zhou等的研究則證明，由于胰腺小葉多由屬于終動(dòng)脈的小葉內(nèi)動(dòng)脈供給血液，其分支間無(wú)吻合血管，所以胰腺微循環(huán)對(duì)缺血更為敏感 5 ，因此胰腺局部組織的RAS通過(guò)影響胰腺的微循環(huán)而參與胰腺炎癥時(shí)的病理生理變化似乎是最可能的途徑。本實(shí)驗(yàn)觀察到在AEP大鼠的炎癥早期就

8、有血漿以及局部組織勻漿中Ang的濃度的升高，并隨著病程進(jìn)展表達(dá)逐漸上調(diào)，并且各時(shí)段局部組織中Ang的濃度都明顯高于血漿中Ang的濃度，兩者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示存在著局部組織RAS的激活、Ang的合成。同時(shí)筆者觀察到AEP大鼠的胰腺在炎癥早期存在著明顯的小葉內(nèi)動(dòng)脈管徑減小、毛細(xì)血管密度降低、血管間吻合減少，F(xiàn)ITC紅細(xì)胞標(biāo)記顯示胰腺微循環(huán)的流速減慢、流量減少，這些現(xiàn)象都說(shuō)明在胰腺炎病理生理的變化過(guò)程中有著血管痙攣、微循環(huán)灌流不足等局部微循環(huán)障礙的存在。并且在實(shí)驗(yàn)中可以觀察到Ang的濃度與胰腺的局部微循環(huán)障礙呈正相關(guān)，提示局部組織RAS的活化在胰腺局部微循環(huán)障礙的病理變化過(guò)程中可能起著重要的作用，

9、但是是否局部組織RAS可以控制或決定胰腺局部微循環(huán)障礙的發(fā)生發(fā)展，進(jìn)而影響炎癥反應(yīng)的過(guò)程和程度還有待于進(jìn)一步的研究，但是相信對(duì)炎癥時(shí)胰腺局部組織RAS活化的認(rèn)識(shí)的加深將為研究AP的發(fā)病機(jī)制提供一條新的思路。參考文獻(xiàn)1 Campbell DJ，Habener J.Angiotensinogen gene is expressed and differ-entially regulated in multiple tissues of the rat.J Clin Invest，1986，78:31-39.2 Dzau VJ，Ellison KE，BrodyT，et al.A comparativ

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