鐵甲草抑制二甲基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的實驗研究

1、鐵甲草抑制二甲基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的實驗研究 10-08-31 11:21:00 編輯：studa20 作者：張紀達，溫成平，范永升【摘要】 目的觀察鐵甲草醇提取物抑制二甲基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化形成的作用效果并探討其作用機制。方法采用二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型，用高、中、低劑量(12.6，4.2，1.4 g/kg)的鐵甲草醇提液進行干預(yù)治療，并與秋水仙堿進行對照，檢測大鼠肝功能、血清透明質(zhì)酸(HA)、層粘蛋白（LN）和型前膠原氨基端肽(PC)、 肝組織羥脯胺酸(Hyp)含量及肝臟病理組織學(xué)改變。 結(jié)果鐵甲草高、中、低劑量組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及鐵甲草高劑量組血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(A

2、ST)水平與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)；鐵甲草各劑量組大鼠肝組織Hyp含量均明顯低于模型組(P 0.05)。鐵甲草各劑量組大鼠血清HA 、LN、 PC含量明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。鐵甲草高、中、低劑量組肝組織纖維化病變明顯減輕，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。 結(jié)論鐵甲草對二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化形成具有明顯的抑制作用，其機制可能與保護肝細胞和抑制膠原纖維合成有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 鐵甲草； 肝纖維化； 二甲基亞硝胺Abstract：ObjectiveThe aim of this study was to observe the inhib

3、itive effects of the extract of Cassia mimosoides Linn. on dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis in rats and to explore the action mechanism. MethodsIntervention treatment with the extract of Cassia mimosoides Linn. was explored in the rats with dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis at

4、 the high, intermediate, and low doses of 12.6 g/kg，4.2 g/kg，and 1.4 g/kg respectively, compared with the group treated with colchicine. Hepatic function, levels of serum hyaluronic acid (HA), serum laminin (LN), serum aminoterminal propeptide of type III procollagen (PIIINP), hepatic hydroxyproline

5、 (Hyp) in rats were assayed and histopathological alterations in rats were examined. ResultsThe results indicated that, compared with those in the model group, alterations in the levels of serum alanine aminotransferase (ALT) in the groups treated with extract of Cassia mimosoides at low, intermedia

6、te, and high doses, and serum aspartate aminotransferase (AST) level in the group at the high dose were statistically significant (P0.05); hepatic hydroxyproline (Hyp) levels in the rats treated with extract of Cassia mimosoides at various doses were significantly lower than those in the model group

7、 (P0.05). Levels of serum hyaluronic acid (HA), serum laminin (LN), and serum aminoterminal propeptide of type III procollagen (PIIINP) in the groups treated with extract of Cassia mimosoides were significantly lower than those in the model group, and the differences were statistically significant (

8、P0.05). Hepatic fibrosis of rats in the groups treated with extract of Cassia mimosoides at high, intermediate, and low doses alleviated significantly, and the differences compared with the pathological changes in the model group were statistically significant. ConclusionIt was concluded that, intra

9、gastric administration with extract of Cassia mimosoides showed significant inhibitive effects on the dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis in rats, and the inhibitive mechanisms might be related with the protective effects on hepatic cells and the inhibition on collagen fiber synthesis.Key w

10、ords：Cassia mimosoides Linn. (Leguminosae); Hepatic fibrosis; Dimethylnitrosamine 鐵甲草Cassia mimosoides Linn.為豆科（Leguminosae）決明屬植物，味甘、微苦，性涼，歸肝、腎和肺經(jīng)；具有清肝明目、利水通淋和解毒消癰功能；可用于治療濕熱黃疸、頭昏眼花、水腫和癰腫疔瘡等1。文獻報道鐵甲草含有大黃素、木犀草素-7-葡萄苷、大黃素甲醚、大黃酸2，3、1,8-dihydroxy-6-methoxy-2-methyl -anthraquinone4。鐵甲草在廣東梅州地區(qū)民間主要用于慢性乙型肝炎和

11、肝纖維化的治療，為探討鐵甲草對實驗性肝纖維化形成的抑制作用，我們以SD大鼠為實驗對象，對二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化模型進行干預(yù)治療，觀察藥物的作用效果并探討其作用機制。1 材料與儀器1.1 動物SPF級SD雄性大鼠，60只，體重160180g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，許可證號： 2007A003；在廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF級實驗室飼養(yǎng)，動物實驗設(shè)施證明：0022793。大鼠飼料由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。1.2 藥物鐵甲草全草2007-10購于廣東省梅州市蕉嶺縣，用85乙醇提取3次，混合后濃縮成含生藥材1.26 g/ml，用時以蒸餾水配成所需濃度。 秋水仙堿：西雙版納版納藥業(yè)有

12、限責任公司，規(guī)格：0.5 mg/片，批號：20071108，用時以生理鹽水溶解。1.3 試劑二甲基亞硝胺(DMN)：購于天津化學(xué)試劑研究所，批號：060523,使用前用生理鹽水配成0.5%溶液備用；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）試劑盒，由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)；透明質(zhì)酸(HA) 、層粘蛋白（LN）和型前膠原氨基端肽(PC)試劑盒,由北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)，批號：080220；總蛋白（TP）和白蛋白(AlB)測試試劑自配。1.4 儀器AU5421全自動生化檢測儀(奧林巴斯公司)；FJ-2008PS全自動免疫計數(shù)器(

13、西安核儀器廠)；KDC02042 低溫冷凍離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)；TU-1001型紫外可見分光光度計 (上海緊密儀器儀表有限公司)；OlympusCK40一F200倒置顯微鏡（日本 Olympusoptical公司）。2 方法2.1 動物分組及造模給藥 60只SD雄性大鼠，隨機分為6組，每組10只，分別為正常組，模型組，鐵甲草醇提取高劑量組、中劑量組和低劑量組(12.6，4.2，1.4 g/kg)，秋水仙堿治療組(0.2 mg/kg)。除正常組外，其余各組動物均進行肝纖維化模型制備5，以0.5DMN溶液(1199生理鹽水稀釋)按體重10 mg/kg劑量腹腔注射，每周連續(xù)3 d

14、，1次/d，第1周每次用2/3劑量，以后用全量，共4周，正常組用等體積的生理鹽水。在制備模型的同時，鐵甲草高、中、低劑量組和秋水仙堿治療組均灌胃給藥，1次/d，共4周，正常組和模型組均予等量生理鹽水灌胃。第4周末處死動物，摘眼球取血，分離血清，待檢；取肝左葉組織，一部分制成勻漿待檢，一部分用10甲醛溶液固定，送檢。2.2 血清肝功能及肝纖維化指標檢測 采用全自動生化儀檢測血清肝功能，放免法檢測血清肝纖維化指標。2.3 肝組織Hyp測定 采用堿水解法檢測肝組織Hyp，按試劑盒說明操作。2.4 病理組織學(xué)觀察 10甲醛溶液固定肝組織，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察拍照。肝組織纖維化病變按嚴重程度分為5期(S04)6：S0：無纖維化病變；Sl：匯管區(qū)、匯管