不同產(chǎn)地白英中多糖含量的測(cè)定

1、不同產(chǎn)地白英中多糖含量的測(cè)定         11-04-26 11:33:00     編輯：studa20                作者：王林江，雷倩，馬雙良，汪曉敏，徐順【摘要】  目的測(cè)定不同產(chǎn)地白英多糖的含量，為白英的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。方法利用水提醇沉法從白英中提取得到多糖，采用苯酚-硫酸法測(cè)定3個(gè)

2、產(chǎn)地白英的多糖含量。結(jié)果不同產(chǎn)地白英多糖含量分別為:安徽1.66%，浙江1.84%，江蘇1.62%。結(jié)論苯酚-硫酸法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適合測(cè)定白英中多糖含量，不同產(chǎn)地白英多糖的含量差異不大,為白英的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論參考。 【關(guān)鍵詞】  白英； 多糖； 苯酚-硫酸法白英Solanum lyratum Thunb.系茄科植物，全草作為傳統(tǒng)中藥已有二千多年的歷史，最早見(jiàn)于本經(jīng)記載，多產(chǎn)于浙江、江蘇、安徽，性味苦、辛、微寒。常與他藥伍用治療肺癌、胃癌、肝癌等多種癌癥，此外還用于治療感冒發(fā)熱、黃疸性肝炎、膽囊炎、水腫等。白英的化學(xué)成分研究表明白英中含有黃酮類(lèi)、多酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、多糖類(lèi)

3、、倍半萜類(lèi)、甾醇類(lèi)、香豆素類(lèi)等多種化合物1。多糖是構(gòu)成生命的基本物質(zhì)之一，廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜、植物和微生物細(xì)胞壁中，是一類(lèi)天然高分子化合物。隨著對(duì)多糖結(jié)構(gòu)的逐步深入了解，多糖化合物的生物活性研究得以迅速發(fā)展。多糖在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、降血糖及降血脂等方面顯示出良好的應(yīng)用前景2，3。白英中的多糖具有多種生物活性4，5，不僅可以作為廣譜免疫促進(jìn)劑具有調(diào)節(jié)免疫功能，還可以抗感染、抗輻射、抗凝血、降血糖、預(yù)防和治療腫瘤等。植物多糖的含量可以在一定程度上體現(xiàn)該藥材免疫作用的強(qiáng)弱。白英多糖是其主要成分之一6，7，但目前有關(guān)白英多糖的研究報(bào)道較少，不同產(chǎn)地白英多糖的含量比較也未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用水提

4、醇沉法從白英中提取得到多糖，采用苯酚-硫酸法8，9顯色測(cè)定了3個(gè)不同產(chǎn)地白英中多糖的含量，為選取優(yōu)良藥用白英產(chǎn)地提供依據(jù)，為白英質(zhì)量評(píng)價(jià)做出補(bǔ)充，也為其藥理作用的進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。1  藥材、試劑與儀器1.1  藥材安徽產(chǎn)白英購(gòu)于北京同仁堂，浙江和江蘇產(chǎn)地的白英購(gòu)于鄭州市醫(yī)藥公司。經(jīng)鑒定均為茄屬植物白英。1.2  試劑無(wú)水葡萄糖（對(duì)照品）天津化學(xué)試劑三廠生產(chǎn)，其它試劑均為分析純。1.3  儀器紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)Jasco V-550型，V-550工作站（日本島津科技公司）,石英吸收池；RE-52-99 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），SHZ-D 循

5、環(huán)水式真空泵（鄭州市上街區(qū)長(zhǎng)虹儀器儀表廠），DGB/20-002臺(tái)式干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠），電子天平FA1004A（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。2  方法與結(jié)果2.1  白英中多糖的提取精確稱(chēng)取安徽白英藥材粉末(過(guò)60目篩)5.0g置于索氏提取器中，以石油醚回流除去脂類(lèi)，藥渣揮去溶劑后，用80%的乙醇提取以除去單糖、低聚糖等干擾成分，最后用水提取多糖。提取液在50經(jīng)減壓濃縮至原體積的1/3左右,濃縮液中加入35倍量的95%的乙醇,靜置，抽濾，沉淀依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌多次，60烘干至恒重，得白英多糖。2.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制  

6、60;  11-04-26 11:33:00     編輯：studa20A=54.553 6C-0.072 7  r=0.999 2    說(shuō)明本方法在0.0050.017 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取“2.2”供試品溶液顯色后，每隔1h測(cè)一次，連續(xù)6次，吸光度分別為0.544，0.532，0.537，0.536，0.541，0.531，RSD為0.83%。結(jié)果表明樣品在16 h內(nèi)顯色穩(wěn)定，在6 h內(nèi)可以進(jìn)行測(cè)定。2.8  加標(biāo)回收率測(cè)定精確稱(chēng)取安徽白英5份，

7、每份1.5g，分別加入無(wú)水葡萄糖9mg，用“2.2”所述方法制備溶液，測(cè)定吸光度分別為0.711，0.721，0.694，0.705，0.683，計(jì)算平均回收率為96.5%，RSD為3.12%。式中C為供試液中葡萄糖濃度(mg/ml) ，D為供試液的稀釋因素，f為換算因子，W為供試品質(zhì)量(mg)。結(jié)果見(jiàn)表1。2.10  3個(gè)產(chǎn)地含量比較同法分別測(cè)定浙江與江蘇產(chǎn)地的白英中多糖的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。表1  多糖含量的測(cè)定結(jié)果（略）3  討論3.1  顯色劑的選擇文獻(xiàn)中有選用蒽酮-硫酸法測(cè)定植物中多糖的含量，但是蒽酮-硫酸法易受蛋白質(zhì)的干擾，因此在用蒽酮-硫酸法

8、測(cè)定一些中草藥中多糖的含量前需除蛋白，以純化多糖，此法容易造成多糖損失，且實(shí)驗(yàn)表明該法用于測(cè)定白英中多糖含量時(shí)數(shù)據(jù)重復(fù)性不好。而苯酚-硫酸法受蛋白質(zhì)干擾較小，操作比蒽酮-硫酸法簡(jiǎn)單，故本實(shí)驗(yàn)選用苯酚-硫酸作為顯色劑。3.2  結(jié)果分析在多糖的含量測(cè)定中，尤其當(dāng)多糖組成復(fù)雜時(shí)，因較難得到相應(yīng)多糖對(duì)照品，多采用葡萄糖代替對(duì)照品，測(cè)定樣品中多糖的相對(duì)含量。文中以比色法測(cè)定樣品中的單糖，通過(guò)單糖和多糖的換算因子計(jì)算藥材中的多糖含量。結(jié)果表明，苯酚-硫酸法測(cè)多糖含量簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、重復(fù)性好，穩(wěn)定性良好，且無(wú)需多糖純品和貴重儀器，適合對(duì)白英多糖含量進(jìn)行測(cè)定。  

9、0; 從測(cè)定結(jié)果看出，3個(gè)主產(chǎn)地的中草藥白英中多糖含量相差不大，測(cè)量結(jié)果對(duì)白英質(zhì)量監(jiān)控有一定參考價(jià)值?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1徐 順,王林江,劉宏民.白英化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17 (4):523.2陳小燕,高澤立.多糖的研究進(jìn)展多糖對(duì)機(jī)體免疫功能的影響J.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2006,15(5):540.3吳曉忠,羅素琴,劉樂(lè)樂(lè),等.中藥多糖抗腫瘤作用的研究進(jìn)展J.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,21(1):81.4吳亞林,黃靜,潘遠(yuǎn)江.白毛藤多糖的分離和生物免疫活性研究J.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版),2004,31(3):319.5楊惠麟,孫志良,丁 榕,等.白毛藤多糖的提取及體外抑菌試驗(yàn)J.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志, 2005,4:24.6Wu Yalin, Pan Yuanjiang, Sun Cuirong. Isolation, purification and structural investigation of a water-soluble polysaccharide from Solanum lyratum ThunbJ. International Journal of Biological Macromolecules,2005,36:2