小鼠免疫組織及免疫細(xì)胞的觀察

1、精品文檔小鼠免疫組織及免疫細(xì)胞的觀察【實(shí)驗(yàn)原理】免疫器官、組織及細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分。中樞免疫器官包括 胸腺和骨髓，是T淋巴細(xì)胞及其他各類(lèi)免疫細(xì)胞發(fā)生、 發(fā)育和分化的場(chǎng)所，外周 免疫器官包括脾脹、淋巴結(jié)和粘膜相關(guān)淋巴組織是免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。各類(lèi)免疫細(xì)胞直接參與免疫系統(tǒng)對(duì)抗原類(lèi)物質(zhì)的免疫應(yīng)答，完善的免疫器官組織結(jié)構(gòu)和正常 的免疫細(xì)胞種類(lèi)和數(shù)量是機(jī)體免疫功能發(fā)揮正常的基本條件?！驹噭┖推鞑摹啃∈蟆⒚藓?、解剖臺(tái)、平皿、大頭針、手術(shù)剪子、手術(shù)鑷子、載玻片、瑞士染液、 細(xì)胞篩【操作方法】1. 取一只小鼠，采用頸部脫臼法處死，將小鼠放到解剖臺(tái)上，沿腹中線剪開(kāi)皮膚 且不破壞腹膜和胸膜，剪開(kāi)腹膜，打

2、開(kāi)腹腔和胸腔，觀察胸腺所在的位置和形狀。2. 分離脾細(xì)胞：取出脾脹，去除其周?chē)闹窘M織，用剪子剪碎脾臟，放入細(xì)胞 篩中，用載玻片清研脾脹，滴加生理鹽水，使脾細(xì)胞分散成細(xì)胞懸液。3. 脾細(xì)胞染色觀察：取少量細(xì)胞懸液置于載玻片上， 與室溫晾干，加瑞士染色液 甲染色1mi n,甩掉染液，用瑞士染色液乙染色 5mi n,用自來(lái)水沖洗，讓染液漂 走，置于光學(xué)顯微鏡下觀察染色脾細(xì)胞?！窘Y(jié)果觀察】小鼠脾細(xì)胞瑞士染色鏡下觀察【注意事項(xiàng)】1. 正確抓取小鼠，防止被鼠咬傷。2. 脾臟分離完整，清研輕柔。3. 染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短。.【討論】脾臟具有多種重要的生理功能，參與并調(diào)節(jié)血液、免疫、內(nèi)分泌系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn)，

3、絕非可有可無(wú)；脾臟功能在疾病的不同階段扮演不同的角色，有時(shí)甚至完全相反， 即具有雙向性、時(shí)向性的特點(diǎn)。1. 脾切除術(shù)后暴發(fā)性感染全脾切除術(shù)后 OPSI的發(fā)生率約為 1 %精品文檔2.4 %。雖然 OPSI 的發(fā)生率不是很高 , 但脾臟切除后 ,在由肺炎球菌導(dǎo)致的感染 中毒性休克中 , 50 % 患者的病情迅速進(jìn)展 , 并最終導(dǎo)致死亡。 脾臟為全身最大 的淋巴器官 , 血循環(huán)相當(dāng)豐富 , 且脾臟具有延緩微循環(huán)的作用 , 有利于清除和 吞噬多種抗原 , 減輕機(jī)體感染的發(fā)生。 同時(shí)脾臟擁有大量重要的免疫細(xì)胞及免疫 因子，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、K細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、殺傷細(xì)胞、 淋巴因子活化殺

4、傷細(xì)胞 (LAK 細(xì)胞)、樹(shù)突狀細(xì)胞。免疫因子包括 tufstin 因子、 備解素即P因子、纖維結(jié)合蛋白免疫核糖核酸環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷內(nèi)源性細(xì)胞毒因子、調(diào)理素和補(bǔ)體等。而脾切除后,脾臟所產(chǎn)生的免疫因子及免疫細(xì)胞消失 ,血漿中免 疫球蛋白 IgM、 IgG 下降, 巨噬細(xì)胞活性下降 , 補(bǔ)體旁路活性下降及自身抗體活性 增強(qiáng), 使免疫系統(tǒng)失衡 , 導(dǎo)致機(jī)體易感性增加 , 甚發(fā)生 OPSI 。2. 關(guān)于 tufstin 是主要由脾臟產(chǎn)生的促吞噬激素 , N ajjar 于 1970 年首先 發(fā)現(xiàn)。是 IgG 分子 Fc 段的一種四肽 (T hrLy s -P ro -A rg),通過(guò)激活中性粒細(xì)胞發(fā)揮吞噬功

5、能。 需要在白細(xì)胞激肽酶及內(nèi)羧基肽酶的共同作用下釋放。 脾 切除、鐮狀紅細(xì)胞貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、A IDS 及一些腹部疾病可使其水平下降 , 脾移植后可使 tufstin 的水平升高。 雖然已發(fā)現(xiàn)其在免疫系統(tǒng)中 的重要作用 , 但具體機(jī)制仍不十分明了。 理論上講上述情況 tufstin 活性減低 的原因包括低丫球蛋白血癥、脾臟內(nèi)中性粒細(xì)胞釋放減少、白細(xì)胞激肽酶活性改 變及 tufstin 分子異常。3. 脾臟的抗腫瘤功能 機(jī)體發(fā)生腫瘤的主要原因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)監(jiān)控失調(diào) , 而脾 臟作為人體免疫系統(tǒng)的重要組成部分 , 無(wú)疑與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。 臨床觀察發(fā) 現(xiàn) , 脾臟不僅自身很少發(fā)生原發(fā)惡性腫瘤且少有轉(zhuǎn)移瘤出現(xiàn) , 這也表明脾臟具 有抗腫瘤的作用。 目前大家較公認(rèn)的觀點(diǎn)為脾臟在腫瘤免疫中具有雙向性、 時(shí)向 性的特點(diǎn)。表現(xiàn)為在腫瘤早期脾臟具有抗腫瘤作用 , 而在晚期則表現(xiàn)為免疫抑制 促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。 其抗腫瘤作用主要表現(xiàn)在 : 可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能。 可 增強(qiáng)巨噬細(xì)胞溶解瘤細(xì)胞及其過(guò)氧化酶作用。 通過(guò)增強(qiáng) NK 細(xì)胞活性發(fā)揮抗 腫瘤作用。Chu認(rèn)為,tufstin的抗腫瘤機(jī)制不僅通過(guò)增加巨噬細(xì)胞的腫瘤趨向性、吞噬能力和分泌能力 , 更重要的是增加巨噬細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基超氧陰 離子的能力 , 對(duì)殺傷腫瘤細(xì)胞具有重要意義。