人口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌及白斑P16蛋白及PCNA表達(dá)的研究

1、人口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌及白斑P16蛋白及PCNA表達(dá)的研究    人口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌及白斑P16蛋白及PCNA表達(dá)的研究    華西口腔醫(yī)學(xué)雜志 1999年第2期第17卷 短篇報道    作者：姜育紅何國斌石愛梅趙紅宇    單位：姜育紅何國斌河南醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)系450052；石愛梅趙紅宇河南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔科    現(xiàn)已知抑癌基因p16的編碼產(chǎn)物P16蛋白可通過抑制細(xì)胞周期依賴性蛋白激

2、酶CDK4的活化而使細(xì)胞停滯在G1期,從而抑制細(xì)胞的增殖1,2。增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是DNA聚合酶的輔助蛋白,對細(xì)胞增殖的啟動有重要意義3。目前PCNA常作為反映細(xì)胞增殖水平的可靠指標(biāo)。本文研究口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)及白斑(leukoplakia, LK)P16蛋白及PCNA的表達(dá),以了解P16蛋白表達(dá)對口腔粘膜增殖水平的影響及其與口腔粘膜SCC發(fā)生、發(fā)展過程的關(guān)系。    1材料和方法   

3、 所有標(biāo)本均選自河南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科19901997年存檔的蠟塊。選取32例口腔粘膜白斑,其中單純增生性白斑8例,不典型增生性白斑24例;口腔粘膜SCC43例,其中級13例,級19例,級11例。以上標(biāo)本均經(jīng)兩位病理科醫(yī)師雙盲法閱片并診斷一致。6例正?？谇徽衬ぷ鳛閷嶒瀸φ铡?#160;   P16蛋白單抗(Santa Cruz公司)、PCNA單抗(DAKO公司)、免疫組化染色用SP試劑盒,均購自北京中山生物技術(shù)公司。免疫組化染色步驟按SP試劑盒說明。每批染色均設(shè)陽性對照及陰性對照。    PCNA染色以細(xì)胞

4、核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒狀或彌漫性著色為陽性細(xì)胞,細(xì)胞漿不著色。P16蛋白陽性細(xì)胞細(xì)胞漿和細(xì)胞核均可染成深淺不等的棕黃色,出現(xiàn)其一即為陽性細(xì)胞。對PCNA染色,同時計算PCNA陽性指數(shù),即陽性細(xì)胞占總計數(shù)細(xì)胞的百分率。    2結(jié)果    2.1P16蛋白免疫組化染色結(jié)果    正常粘膜組均為P16蛋白陽性表達(dá),陽性細(xì)胞分布于上皮各層次,胞核和胞漿均為陽性。單純增生性白斑與正常對照組相似,但染色強(qiáng)度明顯增加,角化層以下各層呈現(xiàn)一均勻的棕黃色帶狀,陰性細(xì)胞少見。不典型增生性白斑胞漿表

5、達(dá)與單純增生性白斑相似,但胞核表達(dá)出現(xiàn)異質(zhì)性,表現(xiàn)為有的胞核染色較深,有的胞核著色較淺或為陰性。    37.21%(16/43)的口腔粘膜SCC表現(xiàn)為P16蛋白染色陰性,即胞漿和胞核均為陰性。陰性標(biāo)本見于SCC級及級,但SCC級均為陽性表達(dá)。口腔SCC P16蛋白染色陽性切片異質(zhì)性更趨明顯,可見較多的核陰性細(xì)胞散在分布。P16蛋白染色結(jié)果見表1。    表1口腔粘膜鱗癌及白斑P16蛋白表達(dá)          

6、60; 組別    例數(shù)    P16蛋白陽性    %            正常對照組    6    6    100.00        &#

7、160;   白斑    32    32    100.00            鱗狀細(xì)胞癌    43    27    62.79      

8、      級    13    13    100.00            級    19    12    63.16*    &#

9、160;       級    11    2    18.18*                * 兩者之間有顯著性差異(P0.05)    2.2PCNA染色結(jié)果   

10、0;本實驗各組標(biāo)本均為PCNA染色陽性。正常口腔粘膜PCNA陽性細(xì)胞見于基底層細(xì)胞,呈線狀排列,數(shù)量較少,其它細(xì)胞層未見陽性反應(yīng)。單純增生性白斑陽性細(xì)胞數(shù)較正?？谇徽衬ぴ黾?P0.05),陽性細(xì)胞也主要分布于基底層,但有25%的病例除基底層以外棘細(xì)胞層也出現(xiàn)數(shù)量不等的陽性細(xì)胞。作者稱此為基底上層模式。不典型增生性白斑陽性細(xì)胞數(shù)較單純增生性白斑明顯增加(P0.01),分布范圍較廣。不典型增生性白斑多表現(xiàn)為基底上層分布模式。    口腔SCC各組PCNA陽性細(xì)胞分布大致與細(xì)胞分化程度有關(guān)。高分化SCC陽性細(xì)胞主要分布于基底樣增生活躍的癌巢周邊,癌巢中央多為陰

11、性。低分化鱗癌陽性細(xì)胞散在分布,遍布于組織全層,數(shù)量明顯增多。各組PCNA染色模式及陽性指數(shù)見表2。    表2口腔粘膜鱗癌及白斑PCNA表達(dá)            組別    例數(shù)    基底上層    模式(%)    PCNA陽性指數(shù)±s(%) 

12、0;          正常對照組    6    0(0.00)    8.02±1.23b            白斑    32    22(68.75) 

13、;   22.49±11.73b            單純增生    8    2(25.00)a    11.71±2.23c            不典型增生  &

14、#160; 24    20(83.33)a    26.07±11.42c            鱗狀細(xì)胞癌    43        40.54±15.97b       &#

15、160;        13        25.63±6.54d                19        35.85±10.47d   &

16、#160;            11        55.51±14.22d                a:兩者之間P0.01;b:兩兩之間P0.01;c:P0.01;d:兩者之間P0.01;  

17、0; 2.3P16蛋白表達(dá)與PCNA陽性指數(shù)的關(guān)系    P16蛋白表達(dá)陰性的標(biāo)本,相應(yīng)的PCNA陽性指數(shù)明顯高于P16蛋白表達(dá)陽性者(P0.001)。但當(dāng)比較范圍限制在SCC級和級時,二者之間的差別則無統(tǒng)計學(xué)意義。    3討論    本實驗37.21%的口腔SCC標(biāo)本未檢測到P16蛋白,這可能是由于p16基因的缺失4,5,也可能是由于p16基因甲基化抑制其轉(zhuǎn)錄6。這一現(xiàn)象只出現(xiàn)在細(xì)胞分化程度較差的口腔SCC級和級,提示P16蛋白缺失可能是口腔SCC從低度惡性向高

18、度惡性轉(zhuǎn)化的重要變化。Nishikawa等7對人星形細(xì)胞瘤的研究也有相似的結(jié)果。    本研究結(jié)果表明從正?？谇徽衬さ讲坏湫驮錾园装?均見有P16蛋白表達(dá),且上皮染色較均勻,提示p16基因及其產(chǎn)物的缺失與口腔癌前損害的發(fā)生關(guān)系不大,這與Zhong等8的研究結(jié)果一致。    本實驗正?？谇徽衬CNA染色皆為陽性,說明正?？谇徽衬ぞ哂幸欢ǖ姆至言鲋衬芰Α？谇徽衬陌┣皳p害到口腔SCC,隨著惡性程度的增加,PCNA陽性指數(shù)有增加趨勢,反映該過程細(xì)胞增殖活性的不斷增加。由于各病變組PCNA陽性指數(shù)重疊較小,作者認(rèn)為,利

19、用PCNA陽性指數(shù)作為口腔SCC進(jìn)展的量化指標(biāo)以及作為口腔SCC的輔助診斷值得進(jìn)一步研究。    本實驗口腔SCC級病例PCNA陽性指數(shù)明顯高于其它各組,除由于SCC級具有較高的細(xì)胞增殖活性外,也可能與該組病例P16蛋白表達(dá)陰性率較高有關(guān)。    (本文承蒙劉學(xué)杰教授指導(dǎo),特此致謝)    參考文獻(xiàn)    1Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J, et al. A cell cycle regulato

20、r potentially involved in genesis of many tumor types. Science, 1994, 264(4):436440    2Nobori T, Miura K, Wu DJ, et al. Deletion of the cyclin-dependent kinase-4 inhibitor gene in multiple human cancers. Nature, 1994, 368(4):753756    3Mathews MB, Bernstein RM, Franza BR, et al. Identity of the proliferating cell nuclear antigen and cyclin. Nature, 1984, 309(5):374376    4Yeudall WA, Crawford RY, Ensly JF, et al. MTSI/CDK4 is altered in cell lines derived from primary and metastatic oral squamous cell carcinom