庚型肝炎病毒E2抗體的檢測(cè)及其臨床意義

1、    庚型肝炎病毒E2抗體的檢測(cè)及其臨床意義        目前多采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增方法檢測(cè)肝炎病人血清中的庚型肝炎病毒(HGV)，此技術(shù)需要病毒在血液中存在時(shí)才會(huì)出現(xiàn)陽性結(jié)果，同時(shí)臨床也需要通過特異性免疫測(cè)定方法來跟蹤感染及恢復(fù)過程。由于GBV-C在培養(yǎng)中不能成功地獲得，沒有天然抗原可供血清學(xué)檢測(cè)之用，近年來國外一種GBV-C E2蛋白被克隆并在CHO細(xì)胞中成功地表達(dá)，這種分泌型E2蛋白被純化后在固相ELISA中應(yīng)用，可用于確定人群血清GBV-C

2、E2抗體水平、探討這種抗體的產(chǎn)生在庚型肝炎臨床流行病學(xué)中的意義。我們對(duì)18例庚型肝炎病毒感染患者血清進(jìn)行了檢測(cè)。 1材料和方法1.1研究對(duì)象選擇1998年3月1999年3月在解放軍302醫(yī)院住院的庚型肝炎病毒感染患者(均兩次以上HGV RNA陽性)，其中男性15例，女性3例，平均年齡(37±4.8)歲，入院后每12周留取1次血清，共留取血清43份，統(tǒng)一檢測(cè)HGV E2抗體。1.2檢測(cè)方法檢測(cè)試劑購自302醫(yī)院科衛(wèi)試劑廠。檢測(cè)程序：用50 mmol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原至工作濃度，包被丹麥產(chǎn)NUNC反應(yīng)板，50 l/孔，置37 2 h，甩干，每孔加封閉液100 l，37

3、1 h，甩干，加血清稀釋液100 l，血清標(biāo)本5 l，設(shè)空白對(duì)照1孔，陰、陽性對(duì)照各2孔，37 30 min，洗板，加TMB底物A、B液各1滴，37顯色10 min，加終止液1滴終止反應(yīng)，經(jīng)酶聯(lián)儀測(cè)吸光度(450 nm)A值，以標(biāo)本A值大于等于臨界值為陽性，反之為陰性。臨界值0.1×PN。2結(jié)果18例患者中有9例(27份血清)HGV E2抗體陽性，其陽性率為50%，抗體出現(xiàn)后其滴度呈明顯逐漸增高趨勢(shì)。見表1。4例急性庚型肝炎情況見表2。表118例庚肝患者病型及感染情況病型例數(shù) (%)抗-HGV E2陽性數(shù)急性肝炎4(22.22)3G3G+A1慢性肝炎5(27.78)1G+B3G+A+

4、B1G+B+E1慢重肝，肝硬化9(50.0)5G+B8G+酒精肝1合計(jì)189     3討論 我們通過對(duì)18例庚型肝炎患者的研究發(fā)現(xiàn)：?jiǎn)渭僅GV感染可致肝功損害，表現(xiàn)單項(xiàng)ALT增高，但恢復(fù)快，預(yù)后好，E2抗體出現(xiàn)時(shí)間為發(fā)病后的26周左右，E2抗體出現(xiàn)同時(shí)或1周左右，HGV RNA陰轉(zhuǎn)，本研究尚未見單純HGV感染所致慢性肝炎病例。急性HGV合并甲型肝炎病毒感染可使肝功損害明顯加重，且可能影響E2抗體的表達(dá)以及疾病的恢復(fù)，由此也看出E2抗體可成為疾病康復(fù)的指標(biāo)之一1，2。從表1中可以看出HGV感染患者中，慢重肝及肝硬化患者明顯多于急慢性肝炎，提示隨病情加重及

5、病程延長，HGV重疊感染率可能有所升高。另外，從研究中也發(fā)現(xiàn)，在慢重肝及慢性肝炎乙/庚重疊感染患者中，隨著E2抗體的出現(xiàn)往往伴隨HGV RNA陰轉(zhuǎn)，但未見伴隨肝功能的改善，考慮乙型肝炎病毒仍為影響疾病的主要因素。總之，從本文研究發(fā)現(xiàn)E2抗體與HGV RNA兩項(xiàng)指標(biāo)呈明顯的負(fù)相關(guān)，此與國外文獻(xiàn)報(bào)道一致3。此項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目有較高的特異性和敏感性，且不受血清保存時(shí)間的影響，但由于本文例數(shù)較少，需今后進(jìn)一步繼續(xù)觀察其臨床意義。表2急性庚肝抗-HGV E2及臨床恢復(fù)情況病例 編號(hào)病型發(fā)病后E2抗體出現(xiàn)時(shí)間(d)抗-HGV E2出現(xiàn)后HGV RNA陰轉(zhuǎn)時(shí)間(d)ALT最高值(U/L)血清膽紅素(mol/L)臨

6、床治愈時(shí)間(d)1單純急性庚肝177438正常242單純急性庚肝40同時(shí)293正常433單純急性庚肝217208正常304急性庚肝+甲肝-持續(xù)陽性50042890     作者單位：張文瑾（解放軍302醫(yī)院感染六科北京100039）朱傳琳（解放軍302醫(yī)院感染六科北京100039）夏杰（解放軍302醫(yī)院感染六科北京100039）劉洪（解放軍302醫(yī)院感染六科北京100039）李力（解放軍302醫(yī)院感染六科北京100039）王惠芬（解放軍302醫(yī)院感染六科北京100039） 參考文獻(xiàn)1，Gutierrez RA,Dawson GJ, Mushahwar I

7、K,et al. ELISA for detection of antibody to the E2 protein of GB virus C. J Virol Methods,1997,69：1-6.2，Tacke M,Kiyosawa K,Stark K,et al. Detection of antibodies to a putative hepatitis G virus envelope protein.Lancet,1997,349：318-320.3，Tacke M,Schmolke S,Schlueter V,et al.Humoral immune response to the E2 protein of hepatitis G virus in associated with long-term recovery from infection a