苦參堿對(duì)肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的實(shí)驗(yàn)研究

1、苦參堿對(duì)肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的實(shí)驗(yàn)研究         09-08-04 11:22:00     編輯：studa20                 作者：耿國軍 姜杰 杜好信 姚成才 陳端揚(yáng) 陳雋鵬 張義 【摘要】  目的：研究分化誘導(dǎo)劑苦參堿(Matrine)在體外對(duì)人肺腺癌SPCA1細(xì)胞生長(zhǎng)

2、抑制的影響。方法：用不同濃度的苦參堿分別處理肺腺癌SPCA1細(xì)胞后，鏡下觀察癌細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；測(cè)定軟瓊脂克隆形成率；MTT (噻唑藍(lán))法測(cè)定生長(zhǎng)抑制率。結(jié)果：不同濃度苦參堿處理后肺腺癌SPCA1細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受到抑制，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨苦參堿的濃度增加而增強(qiáng)。結(jié)論：苦參堿對(duì)肺腺癌SPCA1細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。 【關(guān)鍵詞】  肺腺癌 SPCA1細(xì)胞 苦參堿 生長(zhǎng)抑制研究表明，苦參堿具有抗炎、抗纖維化、抗病毒及抗腫瘤等多方面生物活性 1。為探討苦參堿對(duì)肺腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，本研究選擇肺腺癌細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，通過一定濃度的苦參堿處理肺腺癌細(xì)胞一定時(shí)間后，觀察其對(duì)肺腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑

3、制效果，為臨床治療肺癌提供一定的理論依據(jù)。    1  材料與方法     1.1  材  料  苦參堿購自江蘇連云港，配制為20g/L的無菌溶液備用。流式細(xì)胞儀，為美國產(chǎn)品。肺腺癌SPCA1細(xì)胞株由廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供。小牛血清購自杭州四季青生物工程公司，實(shí)驗(yàn)時(shí)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。    1.2  細(xì)胞培養(yǎng)  隨機(jī)取5瓶處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SPCA1細(xì)胞，在其中的4瓶?jī)?nèi)加入苦參堿，苦參堿濃度分別為0.25、0.50、0.75、1.0m

4、g/ml。及時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基，同時(shí)保持藥物濃度不變，連續(xù)培養(yǎng)，觀察細(xì)胞增殖情況。剩余的1瓶正常培養(yǎng)作為對(duì)照。    1.3  軟瓊脂克隆形成測(cè)定  參照鄂征等2方法，苦參堿濃度分別為0、0.25、0.50、0.75、1.0mg/ml，連續(xù)培養(yǎng)2周，計(jì)算克隆形成率與克隆抑制率。    克隆形成率=克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100；克隆抑制率=(1實(shí)驗(yàn)組克隆數(shù)/對(duì)照組克隆數(shù))×100    1.4  MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率  參照司徒鎮(zhèn)強(qiáng)3等方法，調(diào)整

5、細(xì)胞濃度至103104/ml，并使細(xì)胞分散良好；將稀釋的細(xì)胞懸液加到96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔200l。45小時(shí)細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的苦參堿，使不同組的終濃度分別為0.25、0.50、0.75、1.0mg/ml，對(duì)照組加等量的培養(yǎng)基。微型震蕩器震蕩后，用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)492nm處測(cè)吸光度值(OD)。計(jì)算抑制率。    1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析  全部數(shù)據(jù)以（±s）表示，顯著性比較用t檢驗(yàn)。    2  結(jié)  果     2.1  不同濃度的苦參

6、堿對(duì)SPCA1細(xì)胞生長(zhǎng)的影響  苦參堿對(duì)SPCA1細(xì)胞在24小時(shí)顯示出生長(zhǎng)抑制作用，48、72小時(shí)抑制作用較明顯。0.25mg/ml、0.50mg/ml、0.75mg/ml、1.00mg/ml苦參堿均可抑制SPCA1細(xì)胞增殖，且隨濃度增加對(duì)SPCA1的抑制率也增強(qiáng)，48小時(shí)抑制率分別為4.36、9.45、15.28、20.73。不同濃度組間抑制率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且同一濃度苦參堿對(duì)SPCA1的抑制率隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，見表1。表1  苦參堿對(duì)SPCA1細(xì)胞增殖的影響    2.2  苦參堿對(duì)SPCA1細(xì)胞軟瓊脂克隆形成能力的影響&#

7、160; 隨苦參堿濃度增加，其克隆形成率逐漸下降，克隆抑制率逐漸上升，增殖抑制更加明顯，見表2。表2  對(duì)SPCA1細(xì)胞克隆形成率及抑制率的影響2.3  苦參堿對(duì)SPCA1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制力的影響  不同濃度的苦參堿對(duì)SPCA1細(xì)胞作用24小時(shí)后，吸光度值(OD)逐漸下降，其生長(zhǎng)抑制率逐漸增加，見表3。表3  對(duì)SPCA1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響     09-08-04 11:22:00     編輯：studa20   3  討  論

8、60;    高增殖活性是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特性之一，也是臨床患者死亡的主要原因。因此，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制的研究已經(jīng)成為腫瘤治療學(xué)研究的主要內(nèi)容。肺癌是目前發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快、對(duì)人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一4。肺癌的預(yù)后仍較差。肺癌的高侵襲及轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性多年來一直困擾著臨床治療工作，尋找新的治療方法和有效抗癌藥物具有相當(dāng)重要的意義?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，苦參中所含的苦參堿、氧化苦參堿等生物堿成分具有抗腫瘤活性。    近年來，隨著惡性腫瘤的誘導(dǎo)分化療法的日益興起，苦參堿作為一種具有臨床應(yīng)用價(jià)值的誘導(dǎo)分化劑已引起研究者越來越

9、多的關(guān)注和興趣。觀察對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖活性的抑制作用是篩選誘導(dǎo)分化劑的基本指標(biāo)。本研究中，我們通過較長(zhǎng)時(shí)間觀察SPCA1細(xì)胞的擴(kuò)增傳代發(fā)現(xiàn)，在苦參堿的作用下，SPCA1細(xì)胞增殖減慢，隨苦參堿濃度增加，其增殖抑制更加明顯，最后停止生長(zhǎng)。雖然其中可能發(fā)生細(xì)胞的凋亡或死亡，但細(xì)胞增殖抑制是肯定的。軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)及MTT法是測(cè)定單個(gè)細(xì)胞增殖能力及檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的有效方法5。為進(jìn)一步證實(shí)苦參堿對(duì)SPCA1細(xì)胞的抑制作用，筆者應(yīng)用軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)及MTT法。結(jié)果表明，隨著藥物濃度的增加，其生長(zhǎng)抑制率及克隆抑制率明顯增高。這與其他的研究報(bào)道68一致。    綜上結(jié)果分析，一定濃度的苦參堿能有效抑制SPCA1細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，并且隨苦參堿濃度的增加其抑制作用明顯增加。其作用機(jī)制可能與苦參堿調(diào)控