微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總課件

1、微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物學(xué)教研室 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第一次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容l細(xì)菌基本形態(tài)觀察（球菌、桿菌、螺形菌）l細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（莢膜、鞭毛、芽胞）l革蘭染色法微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總1.細(xì)菌的三種基本形態(tài)l球菌：葡萄球菌。l桿菌：大腸桿菌。l螺形菌：霍亂弧菌。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 細(xì)菌的三種基本形態(tài)示意圖微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總葡萄球菌：葡萄球菌：微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總顯微鏡下的桿菌桿菌(bacillus) Figure 2 - Gram stain

2、of Gram - E. coli cells微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總弧菌弧菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總霍亂弧菌Figure 3 - Gram stain of Gram Cholera cells微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總2.細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)觀察l芽胞示教片：破傷風(fēng)桿菌。l鞭毛示教片：變形桿菌。l莢膜示教片：肺炎雙球菌。 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總芽孢產(chǎn)芽孢細(xì)菌的種類 菌體 （營養(yǎng)細(xì)胞）芽胞微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌1000微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總鞭毛微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總變形桿菌鞭毛1000微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總細(xì)菌莢膜示意圖細(xì)菌莢膜示意圖微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總莢膜的觀察： 負(fù)染色負(fù)染色 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總l【菌種菌種】 齒垢

3、齒垢l【試劑試劑】 生理鹽水、結(jié)晶紫、碘液、生理鹽水、結(jié)晶紫、碘液、95%95%乙醇、復(fù)紅乙醇、復(fù)紅l【材料材料】 酒精燈、接種環(huán)、玻片、酒精燈、接種環(huán)、玻片、3.革蘭氏染色法革蘭氏染色法由丹麥醫(yī)生由丹麥醫(yī)生Hans Christian GramHans Christian Gram于于18841884年創(chuàng)立年創(chuàng)立。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總【操作步驟】結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫初染碘液媒染碘液媒染乙醇脫色乙醇脫色復(fù)紅復(fù)染復(fù)紅復(fù)染涂片固定涂片固定1 min1 min30 s1 min濾紙吸干，油鏡觀察濾紙吸干，油鏡觀察微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 結(jié)晶紫結(jié)晶紫 1 1 碘液碘液 1 1 95% 95% 乙醇乙醇 30”

4、30” 復(fù)紅復(fù)紅 1 1 沖洗沖洗 濾紙干燥濾紙干燥 油鏡觀察油鏡觀察沖洗沖洗沖洗沖洗沖洗沖洗染色染色初染初染媒染媒染脫色脫色復(fù)染復(fù)染微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總紫色（紫色（G）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色革蘭氏染色甲甲菌菌乙菌乙菌初染初染結(jié)晶紫結(jié)晶紫媒染媒染碘碘液液脫色脫色乙醇乙醇復(fù)染復(fù)染復(fù)復(fù)紅紅紫色（紫色（G）紅色（紅色（G-）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色步驟示意圖微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總【結(jié)果】【結(jié)果】l細(xì)菌被染成紫色者，稱為革蘭氏陽性菌；細(xì)菌被染成紫色者，稱為革蘭氏陽性菌；l而細(xì)菌染成紅色者，稱為革蘭氏陰性菌；而細(xì)菌染成紅色者，稱為革蘭氏陰性菌；陽性菌陽性菌紫色紫色 陰性菌陰性

5、菌紅色紅色微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總【意義意義】l鑒別細(xì)菌，用本法染色可將細(xì)菌分成兩大類。鑒別細(xì)菌，用本法染色可將細(xì)菌分成兩大類。l了解致病性了解致病性l指導(dǎo)選擇用藥指導(dǎo)選擇用藥微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總【革蘭氏染色法的原理【革蘭氏染色法的原理 】 革蘭氏染色法的原理尚未闡明，革蘭氏染色法的原理尚未闡明，可能與以下因素有關(guān)?？赡芘c以下因素有關(guān)。 1、通透性學(xué)說、通透性學(xué)說 2、等電點(diǎn)學(xué)說、等電點(diǎn)學(xué)說 3、化學(xué)學(xué)說、化學(xué)學(xué)說微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 通透性學(xué)說通透性學(xué)說G+菌菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易進(jìn)入。脂質(zhì)含量少，乙醇不易進(jìn)入。G-菌菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄

6、，含細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 等電點(diǎn)學(xué)說G+菌菌等電點(diǎn)（等電點(diǎn)（pI23）G-菌菌等電點(diǎn)（等電點(diǎn)（pI45） 在相同在相同pH條件下條件下G+菌所帶負(fù)電荷比菌所帶負(fù)電荷比G-菌多，所以與帶正電荷的結(jié)晶紫染料菌多，所以與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合較牢固，不易脫色。結(jié)合較牢固，不易脫色。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總化學(xué)學(xué)說化學(xué)學(xué)說G+菌菌菌體內(nèi)含有大量菌體內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽核糖核酸鎂鹽，可，可與碘、結(jié)晶紫等染料牢固結(jié)合，與碘、結(jié)晶紫等染料牢固結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不易被乙醇脫色使已著色的細(xì)菌不易被乙醇脫色G-菌菌 菌體內(nèi)含菌體內(nèi)含核糖核酸鎂

7、鹽核糖核酸鎂鹽很少，故易很少，故易被脫色被脫色微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總注 意 事 項(xiàng)涂片的厚度。涂片的厚度。固定的程度。固定的程度。染色的時間控制：一一半一。染色的時間控制：一一半一。沖洗的方法，不要對著涂片區(qū)。沖洗的方法，不要對著涂片區(qū)。95% 乙醇脫色時間。乙醇脫色時間。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第二次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備（示教）一、細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備（示教）二、細(xì)菌分離接種技術(shù)（操作）二、細(xì)菌分離接種技術(shù)（操作） 平板劃線接種法；斜面培養(yǎng)基接種法平板劃線接種法；斜面培養(yǎng)基接種法 液體培養(yǎng)基接種法；半固體穿刺接種法液體培養(yǎng)基接種法；半固體穿刺接種法三、細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象（觀察）三、細(xì)

8、菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象（觀察） 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總一、細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基制作一、細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基制作l液體培養(yǎng)基制作液體培養(yǎng)基制作 普通肉湯培養(yǎng)基成分： 新鮮牛肉浸液100ml，蛋白胨1g，NaCl 0.5g 稱量，包裝，滅菌后使用。l固體培養(yǎng)基制作固體培養(yǎng)基制作 稱取營養(yǎng)瓊脂4.5g，加入100ml蒸餾水中溶解。 包裝后滅菌使用。l斜面培養(yǎng)基制作斜面培養(yǎng)基制作 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總1、稱量及溶化、稱量及溶化2、調(diào)、調(diào)pH 3、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）4、分裝、加塞、包扎、分裝、加塞、包扎5、滅菌、滅菌（6、擺斜面）、擺斜面）操作步驟操作步驟 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總1. 半

9、固體培養(yǎng)基接種法（操作）半固體培養(yǎng)基接種法（操作）2. 斜面培養(yǎng)基接種法斜面培養(yǎng)基接種法3. 液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法 細(xì)菌的分離接種接技術(shù)細(xì)菌的分離接種接技術(shù)（一）分離培養(yǎng)（一）分離培養(yǎng)1. 平板分離劃線接種法（操作）平板分離劃線接種法（操作）（二）純培養(yǎng)（二）純培養(yǎng)微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總平板分離劃線接種法平板分離劃線接種法連續(xù)劃線法 分段劃線法 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總IVIII1/5 I1/10 Rotate 90Flame loopRotate 90Rotate 90III1/4 Flame loop平板劃線接種法（分離培養(yǎng)法）平板劃線接種法（分離培養(yǎng)法）微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)

10、果132注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1.1.各區(qū)之間接種環(huán)要滅菌各區(qū)之間接種環(huán)要滅菌2.2.用力適當(dāng)，不要劃破用力適當(dāng)，不要劃破 瓊脂表面瓊脂表面3.3.注意無菌操作注意無菌操作微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總斜面培養(yǎng)基接種法斜面培養(yǎng)基接種法（操作）（操作）l用途：常用于擴(kuò)大純種細(xì)菌及實(shí)驗(yàn)室保存菌種。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總半固體培養(yǎng)基接種法（操作）半固體培養(yǎng)基接種法（操作）方法：穿刺接種方法：穿刺接種結(jié)果：沿穿刺線生長結(jié)果：沿穿刺線生長動力動力- 擴(kuò)散生長擴(kuò)散生長動力動力+微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總?cè)?、?xì)菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象三、細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象沉淀沉淀成鏈生長成鏈生長渾濁

11、渾濁均勻分散生長均勻分散生長菌膜菌膜表面生長（需氧菌）表面生長（需氧菌）1. 固體固體2. 半固體半固體3. 液體液體菌落菌落 菌苔菌苔動力動力+ 動力動力-微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總液體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象液體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總半固體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象半固體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象有鞭毛動力+無鞭毛動力沿刺線生長混濁生長微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 培養(yǎng)基培養(yǎng)基生長現(xiàn)象生長現(xiàn)象用途用途 固體平板固體平板 固體斜面固體斜面液體液體半固體半固體細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第三次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、細(xì)菌分布實(shí)驗(yàn)一、細(xì)菌分布實(shí)驗(yàn) 空氣

12、中細(xì)菌的檢查空氣中細(xì)菌的檢查 皮膚、日常物品細(xì)菌的檢查皮膚、日常物品細(xì)菌的檢查二、藥敏實(shí)驗(yàn)二、藥敏實(shí)驗(yàn)微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總一、細(xì)菌的分布實(shí)驗(yàn)一、細(xì)菌的分布實(shí)驗(yàn)l（1）空氣細(xì)菌檢查）空氣細(xì)菌檢查 材料：培養(yǎng)基，普通瓊脂平皿l（2）皮膚（其他物品）消毒前后的細(xì)菌檢查）皮膚（其他物品）消毒前后的細(xì)菌檢查 材料：培養(yǎng)基，無菌生理鹽水，75%酒精棉球， 2.5%碘酒棉球，無菌棉棒l（3）自來水中的細(xì)菌檢查）自來水中的細(xì)菌檢查 材料：培養(yǎng)基，無菌棉棒，酒精燈微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總1. 1. 空氣中細(xì)菌的檢查空氣中細(xì)菌的檢查取三塊瓊脂平板，將取三塊瓊脂平板，將2 2個打開皿蓋個打開皿蓋分別置于不同的環(huán)境分別置于不

13、同的環(huán)境1530min1530min后，后，蓋好皿蓋。另外蓋好皿蓋。另外1 1個不啟蓋作為對個不啟蓋作為對照。置照。置3737培養(yǎng)培養(yǎng)1824h1824h。材料：材料：普通瓊脂平板普通瓊脂平板方法：方法：結(jié)果：結(jié)果：計(jì)數(shù)菌落數(shù)，觀察菌落數(shù)的差異。計(jì)數(shù)菌落數(shù)，觀察菌落數(shù)的差異。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總2 2、皮膚消毒前后的細(xì)菌檢查方法、皮膚消毒前后的細(xì)菌檢查方法l在在1個平皿底部做好標(biāo)記，分為個平皿底部做好標(biāo)記，分為消毒前消毒前與與消毒后消毒后兩個區(qū)域。兩個區(qū)域。l取一支無菌棉簽放入無菌鹽水中浸泡，取一支無菌棉簽放入無菌鹽水中浸泡，在管壁上擠干水在管壁上擠干水后擦拭皮膚或其他物品，然后將該棉簽涂布于無

14、菌平皿后擦拭皮膚或其他物品，然后將該棉簽涂布于無菌平皿消毒前區(qū)域，消毒前區(qū)域，作來回劃線，注意勿劃破瓊脂表面。作來回劃線，注意勿劃破瓊脂表面。l將將皮膚區(qū)域或物品皮膚區(qū)域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支無菌棉棒用消毒前所述方法取材，接種于標(biāo)有消取一支無菌棉棒用消毒前所述方法取材，接種于標(biāo)有消毒后的平皿區(qū)域。毒后的平皿區(qū)域。l平皿平皿37、24h培養(yǎng)后取出觀察表面有無細(xì)菌生長，比培養(yǎng)后取出觀察表面有無細(xì)菌生長，比較消毒前后菌落數(shù)目，描述菌落特征。較消毒前后菌落數(shù)目，描述菌落特征。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總結(jié)果：結(jié)果：計(jì)數(shù)菌落數(shù)計(jì)數(shù)菌落數(shù)371824h消毒前消毒

15、后微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總自來水中的細(xì)菌檢查l在在1個平皿底部做好標(biāo)記。個平皿底部做好標(biāo)記。l用酒精燈對水管口滅菌，擰開水管開關(guān)放水用酒精燈對水管口滅菌，擰開水管開關(guān)放水15S。l取一支無菌棉簽蘸取自來水，將該棉簽涂布于標(biāo)有消毒取一支無菌棉簽蘸取自來水，將該棉簽涂布于標(biāo)有消毒前的無菌瓊脂平皿表面，前的無菌瓊脂平皿表面，作來回劃線，注意勿劃破瓊脂作來回劃線，注意勿劃破瓊脂表面。表面。l將平皿于將平皿于37、24h培養(yǎng)后取出觀察平皿表面有無細(xì)菌培養(yǎng)后取出觀察平皿表面有無細(xì)菌生長，描述菌落特征。生長，描述菌落特征。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 二、藥敏試驗(yàn)（二、藥敏試驗(yàn)（紙片擴(kuò)散法）紙片擴(kuò)散法）材料：材料：方法：方

16、法：普通瓊脂平板普通瓊脂平板(2塊平板塊平板/組）組）大腸桿菌、金葡菌大腸桿菌、金葡菌氯霉素、青霉素、碘酒、結(jié)晶紫氯霉素、青霉素、碘酒、結(jié)晶紫 大腸桿菌大腸桿菌葡菌球菌葡菌球菌氯氯青青慶慶鏈鏈氯氯青青慶慶鏈鏈371824hG+G-微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總l步驟步驟（無菌操作）（無菌操作）1、在培養(yǎng)基平皿上做標(biāo)記。、在培養(yǎng)基平皿上做標(biāo)記。2、接種；用棉簽分別沾取菌液（、接種；用棉簽分別沾取菌液（G+，G-）均勻分）均勻分別涂布于別涂布于2個平皿上。個平皿上。3、貼藥片；鑷子滅菌取藥片放置于平皿上的標(biāo)記、貼藥片；鑷子滅菌取藥片放置于平皿上的標(biāo)記 位置，再滅菌后可取另一藥片放置。位置，再滅菌后可取另一藥片

17、放置。4、37，過夜培養(yǎng)，觀察結(jié)果。，過夜培養(yǎng)，觀察結(jié)果。藥敏實(shí)驗(yàn)（紙片擴(kuò)散法）藥敏實(shí)驗(yàn)（紙片擴(kuò)散法）微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥敏實(shí)驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)紙片法抑紙片法抑菌環(huán)直徑菌環(huán)直徑青霉素青霉素(10ug/片片)鏈霉素鏈霉素(10ug/片片)氯霉素氯霉素(30ug/片片)慶大霉素慶大霉素(10ug/片片)敏感標(biāo)準(zhǔn)敏感標(biāo)準(zhǔn)抗藥抗藥2011 10 12中度敏感中度敏感21-2812-1410-1713-14高度敏感高度敏感29 15 17 15白色葡萄球菌白色葡萄球菌（ G+ ）大腸桿菌大腸桿菌（ G- ）微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第四次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容l病原

18、性球菌標(biāo)本片觀察 鏈球菌、 腦膜炎雙球菌 l血漿凝固酶試驗(yàn)l抗“O”試驗(yàn) 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總目的要求l掌握病原性球菌的基本形態(tài)。l掌握藥敏實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)與判斷。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總鏈球菌鏈球菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總腦膜炎雙球菌腦膜炎雙球菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 原理和意義原理和意義 致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使人或致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使人或動物血漿發(fā)生凝固，因此，測定血漿凝固酶的有動物血漿發(fā)生凝固，因此，測定血漿凝固酶的有無是鑒定葡萄球菌致病性的重要依據(jù)。無是鑒定葡萄球菌致病性的重要依據(jù)。血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總步驟：步驟： 血漿血漿 血漿血漿12 金葡金葡 白葡白

19、葡+ + + + 凝集（凝集（+）不凝集（不凝集（-）血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn) 生理鹽水生理鹽水+ + + + 無菌操作：無菌操作：微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總血漿凝集試驗(yàn)結(jié)果血漿凝集試驗(yàn)結(jié)果微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總l鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLOSLO，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASOASO，當(dāng)兩者中和后，再加入當(dāng)兩者中和后，再加入SLO SLO 乳膠試劑，因病人血清中乳膠試劑，因病人血清中ASOASO量很多，未被中和掉的抗體與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰量很多，未被中和掉的抗體與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰凝集，為陽性；無凝集，為陰性。凝集，為陽性；無凝集，為陰性。方法方法：間接凝集：

20、間接凝集結(jié)果結(jié)果：效價大于：效價大于400400單位單位意義意義：風(fēng)濕熱及其活動性的輔助診斷風(fēng)濕熱及其活動性的輔助診斷抗抗“O”試驗(yàn)（試驗(yàn)（ASO test）：微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總步驟：步驟：抗抗“O”試驗(yàn)（試驗(yàn)（ASO test） 陰性對照（陰性對照（1滴）滴） 待檢血清待檢血清 （1滴）滴） + + 膠乳試劑（膠乳試劑（1滴）滴） 膠乳試劑（膠乳試劑（1滴）滴）- ？2min2min微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第五次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容l操作：肥達(dá)試驗(yàn)l肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜菌標(biāo)本微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總肥達(dá)實(shí)驗(yàn)肥達(dá)實(shí)驗(yàn) 肥達(dá)試驗(yàn)（肥達(dá)試驗(yàn)（Widal test）是用已知的傷寒）是用已知的傷寒桿菌桿菌O、H抗原和甲、乙型

21、副傷寒桿菌抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原抗原與與病人血清做定量凝集試驗(yàn)，以測定患者血清中有病人血清做定量凝集試驗(yàn)，以測定患者血清中有無相應(yīng)抗體，根據(jù)抗體含量的多少以及增長情況，無相應(yīng)抗體，根據(jù)抗體含量的多少以及增長情況，可幫助診斷傷寒及副傷寒。可幫助診斷傷寒及副傷寒。 【原理】【原理】 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總肥達(dá)反應(yīng)稀釋法示意表肥達(dá)反應(yīng)稀釋法示意表試驗(yàn)管（每管試驗(yàn)管（每管0.5ml） 對照管對照管 1234567生理鹽水生理鹽水0.50.50.50.5 0.50.5 0.5-1“O”抗原抗原 0.50.50.50.5 0.50.50.52“H”抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.53P

22、A抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最終稀釋度血清最終稀釋度 1:401:801:1601:3201:640 1:1280-微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總肥達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷肥達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷 血清的凝集效價（滴度）：血清的凝集效價（滴度）：是指能與一定量的是指能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（即抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（即“+”凝集）的凝集）的血清最高稀釋倍數(shù)。血清效價代表血清中抗體的血清最高稀釋倍數(shù)。血清效價代表血清中抗體的含量，血清效價越高，所含抗體的量愈多。含量，血清效價越高，所含抗體的量愈多。 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總結(jié)果判

23、斷結(jié)果判斷1、正常凝集效價、正常凝集效價 傷寒沙門菌傷寒沙門菌“O”抗體凝集效價在抗體凝集效價在1：80以下，傷以下，傷寒沙門菌寒沙門菌“H”抗體在抗體在1：160以下，以下， 甲、乙型副傷寒沙門菌甲、乙型副傷寒沙門菌“H”抗體凝集效價在抗體凝集效價在1：80以下。以下。2、病程中動態(tài)觀察、病程中動態(tài)觀察 二份血清，第二次效價增長四倍以上有意義二份血清，第二次效價增長四倍以上有意義3、O與與H抗體在診斷上的意義抗體在診斷上的意義微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 O H A B 診診 斷斷 意意 義（義（可能可能）傷寒及副傷寒感染早期傷寒及副傷寒感染早期/交叉反應(yīng)交叉反應(yīng)傷寒及副傷寒感染晚期傷寒及副傷寒感染晚

24、期/預(yù)防接種預(yù)防接種/非特異性回憶反應(yīng)非特異性回憶反應(yīng)傷寒傷寒甲型副傷寒甲型副傷寒乙型副傷寒乙型副傷寒接種傷寒及副傷寒三聯(lián)疫苗接種傷寒及副傷寒三聯(lián)疫苗非腸熱癥非腸熱癥/早期用抗生素早期用抗生素/免疫功能低下免疫功能低下3、O與與H抗體在診斷上的意義抗體在診斷上的意義微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總?cè)舛舅缶舛舅缶⑸飳?shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第六次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、細(xì)菌染色標(biāo)本檢查法一、細(xì)菌染色標(biāo)本檢查法 抗酸染色法（操作）抗酸染色法（操作）二、標(biāo)本片觀察：二、標(biāo)本片觀察：（鉤端螺旋體（鉤端螺旋體 、白色念珠菌，曲霉、枯草、白色念珠菌，曲霉、枯草桿菌）桿菌） 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總l分

25、枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色抗酸染色。l齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色蘭色。一、抗酸染色原理一、抗酸染色原理微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 抗酸染色抗酸染色l材料： 標(biāo)本：卡介苗 染液：石炭酸復(fù)紅，3%鹽酸酒精，美藍(lán) 器具：同革蘭氏染色

26、微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)方法：1、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備 涂片涂片 干燥干燥 固定固定3、油鏡觀察油鏡觀察1）初染：）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色：）脫色： 3%鹽酸酒精脫色301；用水沖洗。3）復(fù)染復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1，用水沖洗后用吸水紙吸干。2、染色染色微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總 抗酸染色步驟抗酸染色步驟 1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。、涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片涂片 干燥干燥

27、 固定固定微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總抗酸染色步驟抗酸染色步驟l2、染色包括初染、脫色、復(fù)染三步。、染色包括初染、脫色、復(fù)染三步。 石炭酸復(fù)紅維持石炭酸復(fù)紅維持 3-5 5 3%鹽酸酒精鹽酸酒精30 1 美藍(lán)復(fù)染美藍(lán)復(fù)染1 沖洗沖洗 干燥干燥 油鏡觀察油鏡觀察沖洗沖洗沖洗沖洗初染初染脫色脫色復(fù)染復(fù)染微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總?cè)⒖顾崛旧Y(jié)果三、抗酸染色結(jié)果抗酸菌呈紅色抗酸菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總注意事項(xiàng)：1、無菌操作、無菌操作2、菌種管搖勻后取菌、菌種管搖勻后取菌3、涂片均勻、涂片均勻4、初染加熱維持、初染加熱維持35分鐘，勿沸騰燒干分鐘，勿沸騰燒干5、冷卻后沖洗、冷卻后沖洗6、油鏡下從視野中找紅色抗酸菌、油鏡下從視野中找紅色抗酸菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總二、標(biāo)本片觀察二、標(biāo)本片觀察l白色念珠菌l鉤端螺旋體l枯草桿菌l曲霉微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總白色念珠菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總鉤端螺旋體微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總類炭疽（枯草桿菌）類炭疽（枯草桿菌） 炭疽桿菌炭疽桿菌微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總曲霉微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總第七次第七次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容l膿汁標(biāo)本中金黃色葡萄球菌的鑒定膿汁標(biāo)本中金黃色葡萄球菌的鑒定 微生物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容匯總實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材l標(biāo)本：膿拭子、感染分泌物或模擬膿汁標(biāo)本l菌種：金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物、表皮葡萄球菌l培養(yǎng)基：血瓊脂平板、甘露