2019-2020年微生物SOP文件

1、、簡(jiǎn)易SOPt件:1.1、標(biāo)本接收篩選方案：1.1.1、痰標(biāo)本：目測(cè)：黃色、灰色、血性、鐵銹色，渾濁、稠厚，呈現(xiàn)團(tuán)塊狀的標(biāo)本為合格標(biāo)本；而無(wú)色、白色、有黑色小點(diǎn)，清稀，呈現(xiàn)泡沫狀，有明顯食物渣滓、紙屑灰塵、泥土的為不合格標(biāo)本。顯微鏡下篩選：對(duì)經(jīng)過(guò)目測(cè)篩選的標(biāo)本須經(jīng)過(guò)顯微鏡下再次篩選，凡膿細(xì)胞25/HP且復(fù)層鱗狀上皮10/HP的標(biāo)本為合格標(biāo)本，可進(jìn)入下一步程序；而膿細(xì)胞10/HP或復(fù)層鱗狀上皮25/HP的標(biāo)本為不合格標(biāo)本，應(yīng)拒收。1.1.2、尿標(biāo)本：目測(cè)：采用一次性無(wú)菌杯，杯蓋嚴(yán)密者為初步合格；顯微鏡下篩選：標(biāo)本經(jīng)過(guò)離心后鏡檢，凡有較多復(fù)層鱗狀上皮的，膿細(xì)胞較少而細(xì)菌數(shù)量較多的、或有大量尿結(jié)晶析

2、出的均為不合格標(biāo)本，應(yīng)拒收。1.1.3、大便標(biāo)本：采用一次性無(wú)菌杯，杯蓋嚴(yán)密，無(wú)明顯灰塵、泥土或紙屑者為合格標(biāo)本。1.1.4、咽拭子標(biāo)本：須采用顯微鏡下篩選，凡無(wú)膿細(xì)胞的標(biāo)本為不合格標(biāo)本，應(yīng)拒收；而膿細(xì)胞10/HP的為合格標(biāo)本。一一懷疑為風(fēng)濕熱、猩紅熱的病人除外。1.1.5、血液、骨髓、心包液：凡未接種于血培養(yǎng)瓶中的均為不合格標(biāo)本，應(yīng)拒收。1.1.6、各種穿刺液：所有標(biāo)本均采用無(wú)菌容器送檢或未接種于血培養(yǎng)瓶中，否則為不合格標(biāo)本，應(yīng)拒收。1.1.7、腦脊液、生殖道標(biāo)本：采用一次性無(wú)菌杯或直接接種于血培養(yǎng)瓶中，由醫(yī)護(hù)人員（住院病人）或病人家屬（門診病人）當(dāng)面交送給專業(yè)微生物檢驗(yàn)人員，經(jīng)過(guò)詢問(wèn)是在3

3、0min內(nèi)，保溫保濕條件下運(yùn)送的方為合格標(biāo)本，否則應(yīng)拒收。1.1.8、其他標(biāo)本：必須是采用無(wú)菌容器運(yùn)送的，且在相應(yīng)規(guī)定時(shí)間內(nèi)送檢的才是合格標(biāo)本。1.2、標(biāo)本預(yù)處理：1.2.1、痰標(biāo)本：按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版）相關(guān)章節(jié)，采用先用20ml生理鹽水洗滌兩次，經(jīng)過(guò)10ml生理鹽水稀疏后，用接種鉤鉤取膿性部分，采用壓片法制作痰涂片，再在杯中加入胰蛋白酶消化1-2小時(shí)后接種。1.2.2、尿標(biāo)本：WBC5/HP勺尿標(biāo)本不用進(jìn)行培養(yǎng)，因?yàn)楹苌贂?huì)出現(xiàn)沒(méi)有細(xì)胞滲出的尿路感染.當(dāng)WBC5/H時(shí)，取4ml離心后，棄去上清液，留下200仙l混勻后接種，剩余標(biāo)本涂片干燥后染色； 不離心標(biāo)本用于菌落計(jì)數(shù)， 方法，

4、取5ml生理鹽水， 加入50l尿液標(biāo)本，混勻后取100屋接種，結(jié)果X1000為每毫升菌落數(shù)。1.2.3、大便標(biāo)本：取綠豆大小的糞便標(biāo)本加入生理鹽水制成勻漿，用接種環(huán)取一環(huán)涂片，觀察有無(wú)膿細(xì)胞，真菌抱子及菌絲，有真菌的須接種CHROMagafc珠菌培養(yǎng)基，膿細(xì)胞+以上的接種糞便選擇性培養(yǎng)基， 已經(jīng)經(jīng)驗(yàn)應(yīng)用抗生素的采用改良TTC增菌液或Na&Q肉湯增菌液先進(jìn)行增菌。留下涂片干燥后Gram染色，觀察菌群情況，注意有無(wú)菌群失調(diào)。對(duì)于無(wú)膿細(xì)胞的標(biāo)本無(wú)須進(jìn)行接種。1.2.4、咽拭子標(biāo)本：潤(rùn)濕后接種。剩余標(biāo)本直接涂片，干燥后染色。1.2.5、腦脊液：由臨床醫(yī)生按無(wú)菌操作直接注入血培養(yǎng)瓶1-3ml直接

5、送檢。1.2.6、生殖道標(biāo)本：須將培養(yǎng)基孵溫后接種。剩余標(biāo)本直接涂片作Gram染色。1.2.7、其他標(biāo)本：除血液、骨髓、心包液等所有標(biāo)本必須在接種完后用剩余標(biāo)本作直接涂片，干燥后作Gram染色。1.3、讀片：根據(jù)人體對(duì)細(xì)菌/真菌感染在早期主要以非特異性免疫的細(xì)胞免疫為主的特點(diǎn)，結(jié)合標(biāo)本來(lái)源部位系統(tǒng)器官生理病理特點(diǎn)，收尋2030個(gè)視野中膿細(xì)胞聚集處的膿細(xì)胞胞漿中有無(wú)吞噬的細(xì)菌及細(xì)菌的染色排列特征，菌體特征（如粗細(xì)、長(zhǎng)短、扭曲）并作記錄。其中痰液標(biāo)本的讀片尤為重要：闡述痰液形成過(guò)程和排出過(guò)程，我們可以得知，在下呼吸道中感染中形成的炎性滲出、包裹物中存在與感染直接相關(guān)的病原菌，在自然排痰的過(guò)程中會(huì)被

6、上呼吸道的正常菌群所污染，但污染菌位于炎性包裹物之外，且人體對(duì)正常菌群具有共生性保護(hù)因而不會(huì)產(chǎn)生吞噬現(xiàn)象，借此理論，我們將選擇痰標(biāo)本中膿細(xì)胞成團(tuán)塊狀分布，集中而不稠密，且周圍無(wú)鱗狀上皮細(xì)胞或無(wú)大量成團(tuán)狀分布的細(xì)菌球的區(qū)域?yàn)樽x片區(qū)，認(rèn)真收尋膿細(xì)胞聚集處的膿細(xì)胞胞漿中有無(wú)吞噬的細(xì)菌及細(xì)菌的染色排列特征，菌體特征（如粗細(xì)、長(zhǎng)短、扭曲）并作記錄，將此作為確定病原菌的理論依據(jù)。糞便標(biāo)本： 在觀察吞噬現(xiàn)象的同時(shí)， 作好菌群比例計(jì)算， 并記錄 （菌群比例分析參照相關(guān)文件） 。1.4、標(biāo)本接種：1.4.1、痰液：一般：BAChoc（加入萬(wàn)古霉素的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化嗜血桿菌培養(yǎng)基）、MecKCHROMagar懷疑為軍團(tuán)菌

7、的加種BCYE-a培養(yǎng)基，懷疑為百日咳的加種Boudet-Gengou培養(yǎng)基，懷疑為肺炎支原體感染的加種Hayflick雙相培養(yǎng)基或采用免疫學(xué)及分子生物學(xué)方法檢測(cè)，肺炎衣原體須用免疫學(xué)或分子生物學(xué)方法。1.4.2、尿液：一般：BAMecK懷疑為真菌感染的加CHROMagar懷疑為淋病的加巧克力培養(yǎng)基，懷疑為軟下疳的加種Choc；懷疑支原體感染的接種支原體選擇性培養(yǎng)基如PPLOAB分離鑒定培養(yǎng)基或商品培養(yǎng)基1.4.3、大便標(biāo)本：一般感染性腹瀉的糞便標(biāo)本直接接種或增菌后接種：SSSMCTCBS懷疑為金黃色葡萄球菌性食物中毒或偽膜腸炎的加HSM高鹽甘露醇培養(yǎng)基），懷疑為真菌性腸炎的加CHROMaga

8、r懷疑為偽膜性腸炎的應(yīng)作厭氧菌培養(yǎng)分離艱難梭菌。1.4.4、耳、鼻、眼、咽拭子標(biāo)本：BAChouCHROMagar懷疑為白喉的加亞端酸鉀血瓊脂或卵黃培養(yǎng)基1.4.5、膿液、及膿性穿刺物：一般：BAMecK來(lái)源于面部、扁桃體周圍、頜下、腋下等處淋巴結(jié)膿月中的膿液加種Choc,懷疑為真菌的力口CHROMagar來(lái)源于生殖系統(tǒng)的膿液須加種巧克力培養(yǎng)基。懷疑厭氧菌感染時(shí)應(yīng)作厭氧菌培養(yǎng)接種BAP（強(qiáng)化血瓊脂）、KVLB（卡拉-萬(wàn)古凍溶血瓊脂）、BBE（膽七擬桿菌瓊脂）、PEA（苯乙醇血瓊脂）等。1.4.6、血、骨髓標(biāo)本：由醫(yī)護(hù)人員床旁接種，需氧+厭氧或L-型血培養(yǎng)瓶，懷疑播散型結(jié)核分枝桿菌感染的加種分枝

9、桿菌血培養(yǎng)基。經(jīng)過(guò)增菌后轉(zhuǎn)種BAChoc、MecK厭氧菌BAP等固體培養(yǎng)基。1.4.7、胸腹水、鞘膜液：無(wú)菌操作注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)增菌后BAChoc、MecK厭氧菌BAP等固體培養(yǎng)基。1.4.8、腦脊液：由臨床醫(yī)生按無(wú)菌操作直接注入血培養(yǎng)瓶1-3ml直接送檢。1.4.9、手術(shù)創(chuàng)面、燒傷創(chuàng)面分泌物：接種BA、MecK懷疑為真菌感染的加CHROMagar1.4.10、各種生殖道標(biāo)本：種BAChoc、MecKCHROMagar1.4.11、組織標(biāo)本：（暫未開(kāi)展！）先粉碎后接種BAChoc、MecKCHROMagar有必要時(shí)作厭氧菌培養(yǎng)。1.4.12、皮屑、甲屑、毛發(fā)：種CHROMagar沙氏斜面培養(yǎng)基、

10、必要時(shí)種察氏培養(yǎng)基。1.5、讀板：1.5.1、痰液：（經(jīng)過(guò)1824h隔夜培養(yǎng)，但孚生球菌、營(yíng)養(yǎng)缺陷鏈球菌以及分枝桿菌則需延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間）1.5.1.1、 BA生長(zhǎng)、Choc不生長(zhǎng)、Mecm生長(zhǎng)：Gram染色：分G+co（革蘭陽(yáng)性球菌）,G+b（革蘭陽(yáng)性桿菌）G+co-依靠溶血特征，菌落形態(tài)、菌落顏色、菌體形態(tài)區(qū)分：葡萄球菌：淡黃色/白色，中等大小，較凸，規(guī)則圓形，B/丫溶血，較濕潤(rùn)，微球菌：黃色/白色/橙色，中等大小，較凸，規(guī)則圓形，不溶血，較干燥，不易乳化較葡萄球菌生長(zhǎng)緩慢，該菌一般無(wú)臨床意義；鏈球菌：白色/灰白色、凸起小菌落，B溶血為溶血型鏈球菌，其中化膿性鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌菌落

11、相對(duì)較大（多在1.0mm左右），而咽峽炎鏈球菌，馬鏈球菌等菌落則較?。ǘ嘣?.5mm左右）；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的寬大a溶血為肺炎鏈球菌，該菌是最常見(jiàn)的肺部感染病原菌，在社區(qū)獲得性感染中有重要的地位；細(xì)如針尖，白色凸起a溶血的為草綠色鏈球菌，自然咯痰標(biāo)本中的草綠色鏈球菌一般不具有臨床意義；孚生球菌：白色小菌落，0/丫溶血，菌落黏著不易刮取，但在鹽水中易乳化，較濕潤(rùn)，在質(zhì)量較好的新鮮血瓊脂或哥倫比亞血瓊脂上易生長(zhǎng)，在含血MHA不生長(zhǎng)。從正?？热〉奶狄褐蟹蛛x到一般不具有臨床意義，但在套管保護(hù)下采集的下呼吸道標(biāo)本中分離出來(lái)具有臨床價(jià)值。2氣球菌：白色凸起小菌落，a溶血，1.

12、0mm左右，有特殊氣味（酷似乙醛），菌落較草鏈大。鏡下為短鏈或葡萄球菌樣排列，菌體大而著色不均。從痰液中分離到不具有臨床意義。3腸球菌：灰白，低凸，2.0mm左右之a(chǎn)溶血菌落，較濕潤(rùn)，4口腔球菌：白色凸起較大菌落，不溶血，黏著，接種針挑之則整個(gè)菌落挑起，瓊脂上不留痕跡。該菌偶爾可引起肺部的嚴(yán)重感染，一般好發(fā)生于COPDI人和肺氣月中病人；G+b一依靠溶血特征，菌落形態(tài)、菌落大小、菌體形態(tài)區(qū)分：棒狀桿菌：白色1.0-1.5mm左右大小，較干燥，不溶血/狹窄B溶血的為白喉或一股棒狀桿菌；小而濕潤(rùn)，灰白/無(wú)色，半透明的為J-K棒狀桿菌；灰白細(xì)小，B溶血的可能為假結(jié)核、化膿放線菌、溶血分泌桿菌；除白喉

13、桿菌外，假結(jié)核、化膿放線菌、溶血分泌桿菌是罕見(jiàn)的咽喉部病源菌，棒狀桿菌一般不導(dǎo)致肺部感染；芽抱桿菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃狀、蠟狀、邊緣不規(guī)則，不同種類菌落形態(tài)差異巨大，寬大B溶血。延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，菌落從濕潤(rùn)變得干燥，邊緣呈放射狀擴(kuò)散，形成葉狀、掌狀、雪花狀、齒輪狀等，常常為痰培養(yǎng)的污染菌；1.5.1.2、 BA生長(zhǎng)、Choc生長(zhǎng)、MecK生長(zhǎng)：Gram染色：分G+co及G+bG+CQ平面球菌、藻球菌：血瓊脂上為a溶血，0.5-1.0mm大小，在Choc上呈現(xiàn)金屬色澤，無(wú)臨床意義。G+b乳桿菌：細(xì)小，白色凸起a溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，無(wú)臨床意義；G-菌：根據(jù)形態(tài)分為G-b（

14、革蘭陰性桿菌）、G-co（革蘭陰性球菌）、以及根據(jù)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)的需求對(duì)苛養(yǎng)性G-b進(jìn)一步分類，常見(jiàn)的如嗜血桿菌，軍團(tuán)菌等：1.5.1.3、 BA生長(zhǎng)、Choc生長(zhǎng)、MecK生長(zhǎng)：Gram染色：G-b一氧化酶、分科瓊脂顏色腸桿菌：氧化酶（-）,MecK紅色、淡紅色或無(wú)色濕潤(rùn)大菌落；弧菌：氧化酶（+）,MecK紅色或無(wú)色扁平大菌落；非發(fā)酵菌：氧化酶（+/-）,MecK無(wú)色或淡紅色透明小菌落1.5.1.4、 BA生長(zhǎng)、Choc生長(zhǎng)、Mecm生長(zhǎng)：Gram染色：分G-b及G-coG-b:苛養(yǎng)性G-b:HACEK：嗜沫/副嗜沫嗜血桿菌、艾肯氏菌、碳酸噬胞菌、放線桿菌、金氏菌；心桿菌：人類心桿菌；鞘氨醇單胞

15、菌：少動(dòng)鞘氨醇單胞菌；莫拉菌：缺陷莫拉菌、非液化莫拉菌、奧斯陸莫拉菌；寡源菌：所有種；黃桿菌及相關(guān)種：包括鞘氨醇桿菌、產(chǎn)呷咪金色桿菌、黏液威克菌、動(dòng)物傷口伯杰氏菌、短穩(wěn)桿菌等；甲基桿菌：嗜中溫甲基桿菌；巴斯德菌：除產(chǎn)氣和溶血巴斯德菌外的所有種；鮑特氏菌：百日咳/副百日咳鮑特氏菌；弗朗西絲菌：所有種。G-co：氧化酶（+）、觸酶（+）奈瑟菌：白色/黃色中等大小菌落，該類細(xì)菌為口腔常見(jiàn)正常菌群，該菌在痰培養(yǎng)中含量的高低反應(yīng)了標(biāo)本采集狀態(tài)的合格程度，大量出現(xiàn)提示培養(yǎng)結(jié)果將是不可信的；卡他莫拉菌：白色小菌落（24h內(nèi)），菌落有脆性，用接種環(huán)推之可移，是兒科和老年病人常見(jiàn)的下呼吸道病原菌；1.5.1.5

16、、 BA不生長(zhǎng)/細(xì)小、Choc生長(zhǎng)、MecK生長(zhǎng)：Gram染色：G-b、菌體細(xì)小或呈扭曲之長(zhǎng)絲狀嗜血桿菌：灰色/無(wú)色，半透明，1.5-2.0mm的多為流感嗜血桿菌17,該菌為最常見(jiàn)的肺部感染病原菌，可發(fā)生于各個(gè)年齡層次，其高攜帶與COPD：病有較強(qiáng)的相關(guān)性；灰色略黃，不透明，1.0-1.5mm的多為副流感嗜血桿菌。一般副流感嗜血桿菌不導(dǎo)致肺部感染，大量出現(xiàn)提示培養(yǎng)結(jié)果將是不可信的；1.5.1.6、 BA不生長(zhǎng)、Choc不生長(zhǎng)、Mee生長(zhǎng)、BCYE-a生長(zhǎng)/或在含有L-半胱氨酸、鐵離子、復(fù)合抗生素選擇劑的強(qiáng)化血瓊脂上生長(zhǎng)一Gram染色：G-b、菌體細(xì)、長(zhǎng)絲狀提示可能為軍團(tuán)菌：該菌在BCYE-a上

17、4872h為中等大小扁平菌落，灰白色，較粘著；該菌具有較強(qiáng)的生物危險(xiǎn)性，其中嗜肺軍團(tuán)菌可傳染；1.5.1.7、真菌及奴卡菌：BAChoc、MecKCHROMagOS生長(zhǎng)一Gram染色形態(tài)、生長(zhǎng)速度真菌：酵母樣真菌，菌落中等大小，生長(zhǎng)快，多數(shù)可在CHROMagart顯色；大多為口腔咽喉正常菌群，一般不導(dǎo)致肺部感染，但免疫缺陷、糖皮質(zhì)激素、長(zhǎng)期大劑量的抗生素使用可增加該類微生物機(jī)會(huì)感染的可能性；煙曲霉菌，絲狀真菌菌落，35c培養(yǎng)2448h時(shí)菌落為白色泛綠，72h后菌落迅速轉(zhuǎn)為褐色，中心粉末狀背面為黃褐色如煙熏狀，該菌為肺部最常見(jiàn)的條件致病菌，感染時(shí)患者癥狀重，預(yù)后非常差；奴卡菌：小菌落，生長(zhǎng)慢，菌

18、落皺褶，呈顆粒狀，有時(shí)產(chǎn)生褐色、黃色、黑色等色素，該類細(xì)菌可導(dǎo)致肺膿月中，標(biāo)本膿性，有硫磺顆粒者應(yīng)高度懷疑該菌；肺炎支原體：固體培養(yǎng)基上，低倍鏡或解剖顯微鏡下為典型“荷包蛋”樣菌落，在Hayflick雙相培養(yǎng)基的液體中使培養(yǎng)基變黃，該類微生物是最常見(jiàn)的非典型性肺炎的病原體，在社區(qū)獲得性感染中有著很高的比例。1.5.2、大便：沙門菌：SS:中心黑色之乳糖陰性菌落（亞利桑拉群可以為陽(yáng)性），SMC:紅色菌落志賀菌：SSSMC勻?yàn)闊o(wú)色透明之乳糖陰性菌落O-157大腸埃希菌：SS:為紅色乳糖陽(yáng)性菌落，SMC%無(wú)色透明之山梨醇陰性菌落其他致病性大腸埃希菌多數(shù)為：SSSMC勻?yàn)榧t色其中A-D大腸埃希菌在SS

19、上可能為無(wú)色菌落霍亂弧菌：SS:無(wú)色菌落，TCBS黃色大菌落其他弧菌：SSTCBS勻?yàn)闊o(wú)色或淡綠色菌落小腸結(jié)腸耶爾森菌：SS為無(wú)色小菌落，SM紅色牛眼狀小菌落氣單胞菌：所有氣單胞菌轉(zhuǎn)種血瓊脂均呈現(xiàn)B溶血嗜水氣單胞菌，SS紅色菌落，TCB砂黃色，SMCE色之大菌落其他氣單胞菌：SS無(wú)色菌落，TCB劭黃色，SMCE色之大菌落鄰單胞菌：SSTCBSSSMC勻?yàn)闊o(wú)色菌落1.5.3、尿液：腸桿菌、非發(fā)酵菌、弧菌，葡萄球菌、腸球菌、參照痰液讀碟方法；J-K棒狀桿菌：小而濕潤(rùn)，灰白/無(wú)色，半透明，生長(zhǎng)慢；真菌：中等大小，生長(zhǎng)快，多數(shù)可在CHROMagat顯色支原體：固體培養(yǎng)基上，低倍鏡或解剖顯微鏡下為典型“

20、荷包蛋”樣菌落解月尿支原體：含尿素和酚紅的支原體液體培養(yǎng)基中使培養(yǎng)基變紅；人型支原體：含精氨酸和酚紅的支原體液體培養(yǎng)基中使培養(yǎng)基變紅；各種生殖道標(biāo)本：腸桿菌、非發(fā)酵菌，葡萄球菌、腸球菌、無(wú)乳鏈球菌參照痰液讀碟方法；真菌：中等大小，生長(zhǎng)快，多數(shù)可在CHROMagat顯色；支原體：固體培養(yǎng)基上，低倍鏡或解剖顯微鏡下為典型“荷包蛋”樣菌落解月尿支原體：含尿素和酚紅的支原體液體培養(yǎng)基中使培養(yǎng)基變紅；人型支原體：含精氨酸和酚紅的支原體液體培養(yǎng)基中使培養(yǎng)基變紅；淋病奈瑟菌：在GC培養(yǎng)基上為灰/灰白半透明小菌落，非常濕潤(rùn)；在強(qiáng)化血瓊脂上為灰白凸起，不溶血，有銀色光澤1.0-2.0大小的菌落；陰道加德納爾菌：

21、GC培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，強(qiáng)化血瓊脂上無(wú)色/灰白，細(xì)小，狹窄B溶血的菌落，生長(zhǎng)緩慢，多數(shù)需48h才能形成明顯小菌落。1.5.4、腦脊液：腸桿菌、非發(fā)酵菌、弧菌，葡萄球菌、腸球菌、鏈球菌、G+b卡他莫拉菌、嗜血桿菌、奴卡菌等參照痰液讀碟方法；真菌：中等大小，生長(zhǎng)快，多數(shù)可在CHROMagat顯色；新型隱球菌：BA上為白色，1.0mm左右大小圓形凸起菌落，不溶血，CHROMagar上不顯色。肺炎支原體：固體培養(yǎng)基上，低倍鏡或解剖顯微鏡下為典型“荷包蛋”樣菌落，在Hayflick雙相培養(yǎng)基的液體中使培養(yǎng)基變黃。腦膜炎奈瑟菌：BA上為無(wú)色透明，凸起，1.0-1.5mm左右大小的露滴狀菌落，Choc（營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化

22、，含奈瑟菌選擇劑）上為灰色有銀色光澤的，半透明，凸起，1.5mm左右大小的濕潤(rùn)菌落；血、骨髓標(biāo)本：先經(jīng)過(guò)增菌后轉(zhuǎn)種，腸桿菌、非發(fā)酵菌、弧菌，葡萄球菌、腸球菌、鏈球菌、G+b卡他莫拉菌、嗜血桿菌等參照痰液讀碟方法；真菌：中等大小，生長(zhǎng)快，多數(shù)可在CHROMagart顯色；同時(shí)應(yīng)注意雙相真菌和深部絲狀真菌，如馬爾尼菲青霉菌、莢膜組織胞漿菌、球抱子菌，煙曲霉菌、毛霉菌、鐮刀菌、暗色抱科真菌新型隱球菌：BA上為白色，1.0mm左右大小圓形凸起菌落，不溶血，CHROMagar上不顯色。肺炎支原體：固體培養(yǎng)基上，低倍鏡或解剖顯微鏡下為典型“荷包蛋”樣菌落，在Hayflick雙相培養(yǎng)基的液體中使培養(yǎng)基變黃。

23、腦膜炎奈瑟菌：BA上為無(wú)色透明，凸起，1.0-1.5mm左右大小的露滴狀菌落，Choc（營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化，含奈瑟菌選擇劑）上為灰色有銀色光澤的，半透明，凸起，1.7、mm&右大小的濕潤(rùn)菌落紅斑丹毒絲菌：可形成兩種菌落，光滑型細(xì)小、圓形突起、有光澤、易乳化；粗糙型菌落大，表面顆粒狀、邊緣如卷發(fā)樣，微a溶血。其他標(biāo)本：參照以上標(biāo)本的讀碟方法。1.8、鑒定（在讀碟的基礎(chǔ)上進(jìn)行）G+CQ觸酶陽(yáng)性、易乳化一一葡萄球菌：鳥(niǎo)氨酸、尿素、ONPG硝還采用酶法4-6h觀察記錄結(jié)果；試管法凝固酶，分別于1h、4h、24h觀察一次；蕈糖、甘露醇、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、木糖；觸酶陽(yáng)性、不易乳化一一微球菌：葡OF七葉甘

24、、精氨酸、硝還、枸檬酸鹽、動(dòng)力、7.5%高鹽肉湯；不溶血性鏈球菌一一觸酶陰性一一6.5%高鹽肉湯、CAMPS驗(yàn)、桿菌肽、膽七、蕈糖、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、七葉甘、菊糖（所有糖類均需加入血清）；肺炎鏈球菌Optochin如果R,需加6.5%高鹽肉湯、膽七、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、菊糖（所有糖類均需加入血清），必要時(shí)作膽汁溶菌試驗(yàn)和乳膠凝集試驗(yàn)；D群鏈球菌及腸球菌一一觸酶陰性一一6.5%高鹽肉湯、膽七、精氨酸雙水解、棉子糖、甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、蔗糖、動(dòng)力；口腔球菌一一觸酶陰性/弱陽(yáng)一一葡OF;草綠色鏈球菌一Optochin（R）6.5%高鹽肉湯、膽七、棉子糖、甘露醇、山梨醇、乳

25、糖、七葉甘、尿素；G+b:一觸酶（+）一棒狀桿菌：硝還、尿素、七葉甘、明膠、動(dòng)力、葡、麥、蔗、甘醇、木一觸酶（+）一芽抱桿菌：動(dòng)力、卵磷脂水解、甘露醇、木糖、青霉素酶一觸酶（+）李斯特菌：20c動(dòng)力、CAMP甘露醇、木糖、鼠李糖、七葉甘觸酶（）紅斑丹毒絲菌：代&精氨酸水解、七葉甘、動(dòng)力、蕈糖、阿拉伯糖腸桿菌科：一一氧化酶（一）、KIAGYZ15eAPI20E等鑒定系統(tǒng)；一一沙門菌、志賀菌、致病性大腸埃希菌需作血清學(xué)試驗(yàn)；弧菌科：一氧化酶（+）、KIA、GYZ9vAPI20E、或按操作規(guī)程上的經(jīng)典雙歧圖表法鑒定；發(fā)酵菌：一氧化酶（土）、KIA、GYZ11n15n、API20N、或按操作規(guī)

26、程上的經(jīng)典雙歧圖表法鑒定；G-co:氧化酶（+）、觸酶（+）、DNase硝還、酶法葡、麥、蔗、甘醇、木糖；等血桿菌：一觸酶、V、X因子需求、酶法鳥(niǎo)氨酸、尿素、靛基質(zhì)、ONPG硝還、葡、蔗、孚L、甘糖、木糖；軍團(tuán)菌：一氧化酶（土）、觸酶（+）、硝還（一）、尿素（一）、糖類（一）、動(dòng)力（+）/橡樹(shù)嶺軍團(tuán)菌（一）一血清學(xué)試驗(yàn)定種；念珠菌：CHROMaga等色培養(yǎng)基不顯色的玉米-土溫80、TH-15c、API20c、YBC卡等鑒定系統(tǒng)；其他罕見(jiàn)細(xì)菌按經(jīng)典書(shū)籍提供的方法鑒定?？咕幬锩舾性囼?yàn)：按CLSI2008版方案有關(guān)規(guī)定執(zhí)行， 其中鏈球菌采用5%BloodMHA嗜血桿菌用HTM淋病奈瑟菌用G*養(yǎng)基

27、（不加選擇劑） ，其他非苛養(yǎng)菌用MHA所選用藥物根據(jù)CLSI選藥規(guī)則結(jié)合我院工作實(shí)踐發(fā)展了以下幾種組合：腸桿菌科/弧菌科：AM（AMC）、GMCIP、SXTTEANCZCTX/CACTXCROFOXFEPAZT（CXM）（CAZ）、（IPM）、FT（尿路用）；非發(fā)酵菌（含蓋假單胞菌、不動(dòng)桿菌、窄食單胞菌、伯克菌在內(nèi)）：PIP、GMTMANCIP、SXT（假單胞菌不選）、TE（假單胞菌不選）、CFP/SB（即SCF）、CTXCAZIPM、AZT、FER（PIP/TZ）、FOX（假單胞菌不選）、LVF（窄食單胞菌、伯克菌選用）；葡萄球菌：OX、FOXCMVAETE、OFLSXT（RA）、FT（尿路

28、用）；腸球菌：GM。、AM/PVAOFL/LEVRATE、E、FT（尿路用）；肺鏈：OXCMVAE、TE、OFLSXTRAC;B-鏈/草鏈：P（草鏈用）、FEP.CROCMVA、E、TE、OFL淋病奈瑟菌：P、CIP、TE、SPTCROCXMAZI;腦膜炎奈瑟菌：不作常規(guī)測(cè)試：P、CROMEMTE/MIN,常規(guī)測(cè)試：CIP、SXTC、RA嗜血桿菌：AMCIP、SXTTE、AMX/CACXMCROAZI。抑菌環(huán)測(cè)量后，根據(jù)相應(yīng)breakpoint標(biāo)準(zhǔn)解釋，得出SI、R定性結(jié)果；肺鏈除OX外，所有B-內(nèi)酰胺類抗生素均須采用稀釋法得出確切得MIC,才能由此得出S、I、R結(jié)果，K-B法不可用。二、各科

29、病原菌接種微量生化管及所帖K-B藥敏紙片1、腸桿菌科：GYZ15:硫化氫、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽；靛基質(zhì)、甲基紅、枸檬酸；尿素、動(dòng)力、產(chǎn)氣；賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸、棉子糖；山梨醇、側(cè)金盞花醇、木糖；可視情況補(bǔ)種DNAB,丙二酸鹽2、弧菌科：GYZ9:1%NaC賴氨酸精氨酸鳥(niǎo)氨酸、甘露醇、水楊素、6喻鹽、枸緣酸3、腸桿菌科/弧菌科藥敏：氨葦西林（AM、慶大霉素（GM）、復(fù)方新諾明（SXT）;四環(huán)素（TE）、環(huán)丙沙星（CIP）、阿米卡星（AN）、頭抱唾咻（CZ）、頭抱曲松（CRO）、頭抱嚷歷（CTX）、頭抱他定（CAZ）、頭抱西?。‵OX）、頭抱叱歷（FEP）、氨曲南（AZM）、亞胺培南（IPM,）、頭抱嚷

30、屈/克拉維酸（CTX/CA）、頭抱他呢/克拉維酸（CAZ/CA）（若病原菌來(lái)自小便或腸道則加貼味喃妥因）4、非發(fā)酵菌GYZ11FO（M、需）、氧化酶、枸緣酸、麥芽糖（非）、精氨酸雙水解、甘露醇（非）、木糖（非）、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、DNAB、乙酰胺GYZ15精氨酸、鳥(niǎo)氨酸、賴氨酸、枸緣酸、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、尿素、七葉甘、靛基質(zhì)、B-半乳糖甘酶（ONPG）蔗糖（非）、麥芽糖（非）、木糖（非）、硫化氫、葡萄糖（非）、氧化酶非發(fā)酵菌藥敏：哌拉西林（PIP）、慶大霉素（GM）、妥布霉素（TM）、阿米卡星（AN）、環(huán)丙沙星（CIP）、氨曲南（ATM）,四環(huán)素（TE）、復(fù)方新諾明（SXT）、頭抱西?。‵OX）、

31、舒普深（SCF）、頭抱嚷歷（CTX）、頭抱他定（CAZ）、左氧氟沙星（LVF,嗜麥芽和窄食假單胞菌貼）、頭抱叱歷（FEP）、亞胺培南（IPM）4、革蘭氏陰性雙球菌：OE（+）、H2Q（+）、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、DNAS、葡萄糖（非）、木糖（非）、麥芽糖（非）、甘露醇（非）、蔗糖（非）5、革蘭氏陰性雙球菌（主要用于淋球菌）藥敏：四環(huán)素（TE）、環(huán)丙沙星（CIP）、青霉素G（PG）,壯觀霉素（SPT）、阿奇霉素（AZI）、頭抱曲松（CRO卜頭抱味辛（CXM）;（可用阿奇霉素經(jīng)驗(yàn)性治療）6、嗜血桿菌科：HQ（+）、OE（+）、VX因子需求試驗(yàn)（衛(wèi)星試驗(yàn)）、酶法硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、鳥(niǎo)氨酸、尿素、靛基質(zhì)、B-半

32、乳糖甘酶（ONPG）葡萄糖（非）、乳糖（非）、木糖（非）、甘露糖（非）、蔗糖（非）所有氨基酸，糖類生化管均要封石蠟（防CO2軍發(fā)，厭氧也能生）嗜血桿菌科藥敏：復(fù)方新諾明（SXT、氨卞西林（AM）、環(huán)丙沙星（CIP）,頭抱曲松（CRO）、頭抱味辛（CXM）,阿奇霉素（AZI）、四環(huán)素（TE）、阿莫西林/克拉維酸（AMC）7、葡萄球菌：硝酸鹽還原試驗(yàn)、鳥(niǎo)氨酸、尿素、B-半乳糖甘酶（ONPG）覃糖、甘露醇、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、木糖葡萄藥敏：紅霉素（E）、克林霉素（CM）、苯晚西林（OX）、頭抱西?。‵OX）、青霉素G（PG四環(huán)素（TE）、萬(wàn)古霉素（VA）、左氧氟沙星（LVF）、復(fù)方新諾明（SXT）

33、、利福平（RA）、米諾四環(huán)素（MIN）、氯霉素（CL）8、腸球菌：HQ（-）、膽汁七葉甘、七葉甘、6.5%高鹽、蔗糖、動(dòng)力、甘露醇、山梨醇、精氨酸雙水解、棉子糖、阿拉伯糖、山梨糖腸球菌藥敏：吠喃妥因（FT）、慶大霉素120（GM120紅霉素（E）、四環(huán)素（TE）、萬(wàn)古霉素（VA）、氨曲南（ATM）、左氧氟沙星（LVF）、利福平（RA）8、肺炎鏈球菌藥敏：紅霉素（E）;四環(huán)素（TE）、萬(wàn)古霉素（VA）、左氧氟沙星（LVF）、復(fù)方新諾明（SXT）、利福平（RA）、氯霉素（CL）、克林霉素（CM）、苯晚西林（OX）9、B-溶血鏈球菌：H2O（-）,6.5%高鹽，CAM就驗(yàn)，膽汁七葉甘，草糖，乳糖，棉

34、子糖，甘露醇，山梨醇，七葉甘，菊糖（注：所有糖類均要加入血清）10、草綠色鏈球菌：OPR,6.5%高鹽，膽汁七葉甘，棉子糖，甘露醇，山梨醇，乳糖，七葉甘，尿素，草糖；（注：所有糖類均要加入血清）B-鏈/草鏈藥敏：紅霉素（E）、四環(huán)素（TE）、克林霉素（CM）、左氧氟沙星（LVF）、萬(wàn)古霉素（VA）、頭抱義泡（FEP）、青霉素（P）、頭抱曲松（CRO）三、各科簡(jiǎn)易雙歧鑒定表3.1、常見(jiàn)G+干菌簡(jiǎn)易鑒定表棒狀桿菌屬芽抱桿菌特菌屬丹毒絲屬加德納菌屬諾卡菌屬馬紅球菌形棒狀，一端或兩桿短桿，細(xì)桿細(xì)小桿菌，分枝絲狀，可斷裂成卵圓形或態(tài)端膨大，常呈狀，鏈狀或線生長(zhǎng)緩慢，桿狀、球桿狀；產(chǎn)/、短桿狀，產(chǎn)“八”，

35、倒“八”，柵欄狀排列白芽抱或絲狀狀多48小時(shí)才形成菌落同色素；可形成氣生菌絲，抗酸弱陽(yáng)性；菌落的表面皺褶，顆粒狀不同色素， 抗酸部分陽(yáng)性革 蘭染色+初代為G+,陳舊培養(yǎng)物偉G-染色陰陽(yáng)不定，初代為G+觸酶+-+動(dòng)力-V+（筋斗狀）-ND-硫化-ND-大多產(chǎn)-NDND氫H2S3.2、常見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性球菌雙歧鑒定表常見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性球菌雙歧鑒定表一觸酶H2Q陽(yáng)性（+）菌屬嚴(yán)格需氧形狀動(dòng)力OFOE葡萄糖菌屬-葡萄狀排夕U,菌體較小，易乳化-F-微球菌屬+四聯(lián)狀排列，菌體較大，不易乳化-P-口腔球菌屬-白色，觸酶弱陽(yáng)性，易乳化，黏，挑則整個(gè)菌落全部離開(kāi)，瓊脂上不留痕跡-FNDP動(dòng)性球菌屬+OND巨球菌屬+/

36、-菌體細(xì)胞較大，2m-+觸酶H2Q陰性（-）菌屬形態(tài)萬(wàn)古霉素葡錮糖PYRLAP6.5%高鹽45010鏈球菌屬鏈狀，成對(duì)S-+-V-腸球菌屬鏈狀，成對(duì)S-+乳球菌屬鏈狀，成對(duì)S-+V-+氣球菌屬成對(duì)，四聯(lián)，成簇S-+-+-攣生球菌鏈狀，四聯(lián)，成簇，成對(duì)S-+V-片球菌屬成對(duì)，四聯(lián)，成簇R-+V+-無(wú)色藻球菌屬鏈狀，成對(duì)R+-V-+鏈球菌分群一、根據(jù)Lancefild抗原分群A群化膿性鏈球國(guó)（大菌落）、咽峽炎鏈球國(guó)（小菌落），桿菌肽大多敏感（S）B群無(wú)乳鏈球菌（小菌落），CAMP+）,馬尿酸鈉（+）C群停乳鏈球菌馬亞種（大菌落）、咽峽炎鏈球菌（小菌落）CAMP（-）,6.5%高鹽（-）,桿菌肽：R

37、（耐藥）D群腸球球菌、非腸球菌（牛鏈球菌，馬鏈球菌），豬鏈球菌6.5%高鹽（+）,膽七（+）;但D群非腸球?yàn)椋?.5%高鹽（-）,膽七（十）F群咽峽炎鏈球菌（小菌落）G群停乳鏈球菌（大）、咽峽炎鏈球菌（小）二、根據(jù)菌落大小大菌落類化膿鏈球菌、停乳鏈球菌小菌落類咽峽炎鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌三、根據(jù)溶血性質(zhì)a溶血草綠色鏈球菌、腸球菌及D群非腸球菌、肺炎鏈球菌B溶血A群、B群、D群丫溶血草綠色鏈球菌、腸球菌及D群非腸球菌、肺炎鏈球菌四、按病理作用化膿鏈球菌群化膿鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、馬鏈球菌、豬鏈球菌、停乳鏈球菌草綠色鏈球菌群牛鏈球、緩癥鏈球菌、變異鏈球菌、唾液鏈球菌、咽峽炎鏈球菌（米勒群）、不相關(guān)鏈球菌

38、草綠色鏈球菌鑒定雙歧鑒定表七葉甘VP甘露醇月尿酶精氨酸山梨醇代表困種牛鏈球菌+/-牛鏈球，馬腸鏈球菌，非解乳糖鏈球菌緩癥鏈球- -緩癥鏈球菌，格式鏈球菌，口腔正常鏈球菌，血液鏈球菌變異鏈球菌+-+變異鏈球菌，鼠變異鏈球菌唾液鏈球菌+-+/-唾液鏈球菌，前庭鏈球菌咽峽炎鏈球菌+/-+/-+-咽峽炎鏈球菌，星群鏈球菌，中間鏈球菌血液鏈球菌+- -+-生物1.2.3型非B溶血鏈球菌分群OR奧普托新）膽汁溶菌膽汁七葉甘肺炎鏈球菌+-草綠色鏈球菌-牛鏈球菌-+（備注：精氨酸：-）豬鏈球菌-+（備注：精氨酸：+,能分解葡穩(wěn)糖等多種糖）B溶血鏈球菌分群LancefieId桿菌肽CAMP覃糖七葉甘高鹽備注化膿

39、鏈球菌（大菌落）A1S-+-無(wú)乳鏈球困（小菌落）BR+-馬鏈球菌（小菌落）CR-精水（十）G群（停乳鏈球菌）（大菌落）GR-ND-星座鏈球菌（小菌落）R-精水（十）3.3、革蘭氏陽(yáng)性球菌雙歧鑒定表二觸酶陽(yáng)性（+）菌屬嚴(yán)格需氧形狀動(dòng)力OF OE葡萄糖菌屬-葡相狀排列，菌體較小，易乳化-F-微球菌屬+四聯(lián)狀排列，菌體較大，不易乳化-O-口腔球菌屬-白色，觸酶弱陽(yáng)性，易乳化，黏，挑則整個(gè)菌落全部離開(kāi)，瓊脂上不留痕跡-FND動(dòng)性球菌屬+OND巨球菌屬+/-菌體細(xì)胞較大，2m-+觸酶HO陰， 性(-)鏈球菌屬a溶血奧普妥新S肺炎鏈球菌奧普妥新R膽汁七葉甘陰性（-）:草綠色鏈球菌膽汁七葉甘陽(yáng)性（+）:D群

40、鏈球菌及D群非腸球，豬鏈球菌B溶血桿菌肽SA群鏈球菌CAMP(+)B群鏈球菌膽汁七葉甘陽(yáng)性（十）D群鏈球菌Lancefield群血清抗原檢測(cè)Y溶血膽汁七葉甘陰性（-）:草綠色鏈球菌膽汁七葉甘陽(yáng)性（+）:D群鏈球菌注釋：草鏈進(jìn)一步分群見(jiàn)上，D群及豬鏈球菌進(jìn)一步分群如下：七葉甘（+）,6.5%高鹽陽(yáng)性（十）腸球菌七葉甘（+）,6.5%高鹽陽(yáng)性（-）豬鏈球菌OPR,精氨酸：+,能分解葡穩(wěn)糖，乳糖，蔗糖，麥芽糖，菊糖等多種糖七葉甘（+）,6.5%高鹽陽(yáng)性（-）D群非腸球棉子糖陽(yáng)性（+）,精氨酸陰性（-）,能利用蔗糖，棉子糖，阿拉伯糖；山梨醇及菊糖：不止一牛鏈球困棉子糖陰性（-）,精氨酸陰性（-）：能利

41、用蔗糖，不能利用棉子糖一馬腸鏈球菌3.4、常見(jiàn)8種葡萄球菌生化反應(yīng)鑒別表：生化試驗(yàn) 凝固酶硝酸鹽鳥(niǎo)氨尿素ONPG覃糖甘露甘露麥芽蔗糖 木糖葡萄球菌雙歧鑒定圖：+:金葡、中間葡萄、豬葡萄血漿凝固晞L一：施氏、里昂、溶血、表葡、腐生、豬葡:金葡：利用大多數(shù)糖，可產(chǎn)色素:中間：利用蔗糖及ONPG日性:豬葡不利用甘露醇和麥芽糖，不產(chǎn)色素蔗糖-:施氏：甘露糖為陽(yáng)性里昂|=表葡多粘S:施氏:里昂:表葡R：豬葡表葡溶葡腐生溶葡r-表葡麥芽糖腐生豬葡（施氏）或施氏多粘尿素:溶表腐覃糖+新生霉素.SRSJS多粘菌素!BSR草糖菌名管試W*酸醇糖糖金黃色葡萄球菌+-d-+-表皮葡葡萄球菌-+d+-d+-溶血葡相球

42、菌-+-+d-+-里昂葡相球菌-+d-+-+-施氏葡相球菌-+-d+-+-腐生葡穩(wěn)球菌-+-+d-+-中間葡穩(wěn)球菌+-+d+d+-豬葡穩(wěn)球菌+/-+-d-+-+-+-3.5、腸球菌雙歧鑒定表腸球菌屬初步分群試驗(yàn)I群R群田群IV群V群甘露醇產(chǎn)酸+-+山梨糖產(chǎn)酸+-精氨酸雙水解-+-試驗(yàn)I群鳥(niǎo)腸球菌淺黃腸球菌病臭腸球菌蒼白腸球菌假鳥(niǎo)腸球菌棉子糖腸球菌解糖腸球菌阿拉伯糖棉子糖+-+-+-+-+-+丙酮酸鹽+-+-試驗(yàn)n群糞腸球菌屎腸球菌鉛黃腸球菌鶉雞腸球菌蒙氏腸球菌動(dòng)力-+-色素-+-+山梨醇+vv-V棉子糖-v+阿拉伯糖-+試驗(yàn)m群豕腸球菌耐久腸球菌小腸腸球菌殊異腸球菌鼠腸球菌阿拉伯糖-棉子糖-+

43、-+-精氨酸雙水解（-:一鳥(niǎo)腸球菌精氨酸雙水解（十）山梨醇（-）一屎腸球菌（甘露醇+、阿拉伯糖+、棉子糖-）山梨醇（十）棉子糖-、阿拉伯糖-:一糞腸球菌:棉子糖+、阿拉伯糖+:一鳥(niǎo)腸球菌3.7、腸桿菌科與其他科菌的區(qū)別試驗(yàn)?zāi)c弧菌科非發(fā)酵科葡錮糖FF0/-氧化酶-+*形態(tài)桿狀弧形桿狀鞭毛周毛或無(wú)單毛單、叢、周、無(wú)注：非發(fā)酵中不動(dòng)、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌OE為-一、腸桿菌科初步分類：菌屬苯丙氨酸葡錮糖酸鹽父形桿菌+-普羅威登斯菌屬+-摩根菌屬+-克需伯國(guó)局-+腸桿菌屬-*（有例外）+*（有例外）沙雷菌屬-+哈夫尼亞菌屬-+塊他國(guó)局-志賀困局-沙門菌屬-枸檬酸桿菌屬-愛(ài)德華菌屬-耶爾森菌屬-腸桿菌科中：尿素