教學(xué)研究鈣磷鎂和微量元素檢驗

1、第十二章鈣、磷、鎂和微量元素檢驗第一節(jié)概述一、鈣、磷代謝及調(diào)節(jié)（一）含量與分布鈣是體內(nèi)含量最多的無機鹽，占體重的1.5%2%,總量約7001400g,其次是磷，占體重0.8%1.2%,總量約400800g。99%以上的鈣和86%以上的磷是以羥磷灰石形式沉積于骨、牙。（二）吸收與排泄吸收：在pH較低的小腸上段，鈣的吸收率隨年齡的增長而降低，每增加10歲減少5%10%,嬰兒吸收率可達50%以上，兒童40%,成人20%左右，故老人易發(fā)生骨質(zhì)疏松癥。磷的吸收率約70%,低磷時可達90%020%腎臟70%腎臟正常血清鈣2.252.75mmol/L (911mg/dl)排泄：主要通過腸道和腎臟。鈣：80%

2、腸道磷：30%腸道（二、血鈣與血磷血液中鈣幾乎全部存在于血漿,離子鈣50%|卜可擴散鈣JH+HCO3血鈣存在形式檸檬酸鈣.碳酸氫鈣結(jié)合鈣50%蛋白結(jié)合鈣非擴散鈣發(fā)揮生理作用的是離子鈣，但臨床實驗室測定的大多數(shù)是總鈣。血磷是指血液中的無機磷酸鹽（HPO42_、H2PO4J正常人血清無機磷0.971.61mmol/L（35mg/dl），兒童稍高。CaxP=3540大于40骨鹽沉積，有利于骨鈣化。小于35骨鹽溶解。（四）鈣、磷生理功能鈣：1參與血液凝固。2參與肌肉收縮。3.維持神經(jīng)肌肉應(yīng)激性。4作為第二信使。磷：1.作為核酸、磷脂、磷蛋白合成的原料。2參與高能磷酸化合物的合成。3 .構(gòu)成核甘酸輔酶。

3、4 .構(gòu)成磷酸鹽緩沖對。（五）鈣、磷代謝調(diào)節(jié)1.維生素Da(VitDa)月干腎D3肝25OHD3腎1,25(OH)2D3促進腸道對鈣、磷的吸收；促進腎小管對鈣、磷的重吸收；協(xié)同PTH促進骨重建。2.甲狀旁腺素（PTH）甲狀旁腺主細胞分泌的84肽。促進溶骨作用，促進間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化成破骨細胞，抑制破骨細胞轉(zhuǎn)化為成骨細胞；促進腎小管對鈣的重吸收，抑制磷的重吸收。3.降鈣素（CT）甲狀腺濾泡旁細胞分泌的32肽，與PTH拮抗。促進成骨作用，抑制間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化為破骨細胞，促進破骨細胞轉(zhuǎn)化為成骨細胞；抑制腎小管對鈣、磷的重吸收。間充質(zhì)細胞y破骨細胞一丁X/+CT*成骨細胞二、鎂代謝和生理功能（一）鎂代謝1

4、.鎂的含量與分布占體重的0.03%,正常成人鎂的總量2028g,其中60%存在于骨骼，20%30%存在于骨骼肌，其余10%存在于其它組織中。體液中細胞內(nèi)液鎂的含量占總量的39%,而細胞外液僅占1%。2 .血鎂血漿鎂的濃度約0.671.23mmol/L,存在形式主要有三種：離子鎂55%血鎂-碳酸氫鎂、檸檬酸鎂、磷酸鎂等15%蛋白結(jié)合鎂30%發(fā)揮生理作用的是離子鎂3吸收與排泄食物鎂含量豐富，人體每天需要量300350mg,鎂的吸收主要在小腸，吸收率只有30%40%,吸收率與腸腔中鎂的含量成反比。體內(nèi)鎂的排泄主要通過腎臟。（二）鎂的生理功能1 作為酶的輔助因子體內(nèi)約300種酶的輔助因子是Mg2+o2

5、 .維持神經(jīng)肌肉的應(yīng)激性Mg2+能降低神經(jīng)肌肉的應(yīng)激性。三、微量元素與疾?。?）體內(nèi)化學(xué)元素組成和分類人體約含有50多種元素人體元素主要元素含量OJg/kg體重C、H、0、N、S、P、Ca、K、Na、Cl、r必需的Fe>Cu、Zn>Mn、Co、Ni、Sei、F等14種微量兀素含量v0.1g/kg體重非必需的Si、As、Rb、B、Al有害的Bi、Hg、Pb、Be等（二）必需微量元素對人體各種生命活動的影響1 .促進機體的生長發(fā)育鐵、銅、鋅、鎰、鉆、碘等，作為酶和激素的重要組成成分。2 .對神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的影響鐵、銅、鋅、缽、鉆、碘等缺乏時可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的異常，智力低下。

6、3 .對內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響銅、鐵、鋅、錦、銘等元素的缺乏或過量可引起內(nèi)分泌功能失4 .對免疫系統(tǒng)的影響鐵、銅、鋅等缺乏時可降低機體的免疫力。5 .對心血管疾病及創(chuàng)傷的影響適量的鋅、鎰、格、硒等元素有利于心血管的結(jié)構(gòu)和功能。如食物中的鋅/鎘比與高血壓的發(fā)生和預(yù)后密切相關(guān)。多種微量元素還能影響核酸和蛋白質(zhì)的生物合成，故有利于創(chuàng)傷的愈合和疾病的恢復(fù)。第二節(jié)鈣、磷、鎂和微量元素測定一、鈣的測定血鈣測定方法很多。廠化學(xué)法滴定法（氧化還原滴定，絡(luò)合滴定）；J比色法（鄰甲酚猷絡(luò)合法，甲基麝香草酚藍法）血鈣測定.物理法火焰光度法；ISE法；原子吸收分光光度法；同位素稀釋質(zhì)譜法。1.EDTA-Na2絡(luò)合滴定法在堿

7、性溶液中，血清鈣與鈣紅指示劑結(jié)合成可溶性的復(fù)合物，使溶液呈淡紅色，EDTA-Na2對鈣有很大的親和力，能與復(fù)合物中的鈣絡(luò)合，使鈣紅指示劑重新游離，溶液變藍色，根據(jù)EDTA-Na2滴定用量可計算出血清鈣含量。鈣+鈣紅鈣-鈣紅復(fù)合物淡紅色鈣-鈣紅復(fù)合物+EDTA-Na2>EDTACa+鈣紅藍色鈣指示劑除鈣紅外，還有依地格黑T（紅f藍），鈣黃綠素（黃f綠），紫紅酸鏤（紅f紫）。鈣紅指示劑終點明顯，不受血清鎂干擾，血清鎂在強堿性條件下生成Mg（OH）2J,指示劑在強堿性條件下不穩(wěn)定，加指示劑后應(yīng)立即滴定。操作簡便，無需特殊儀器設(shè)備，適合于基層醫(yī)院，但終點判斷人為誤差較大，溶血、黃疸影響終點判斷。

8、2鄰甲酚酬絡(luò)合酮法（O-CPC）鄰甲酚獻絡(luò)合酮是一種金屬絡(luò)合染料，也是一種酸堿指示劑，在堿性溶液中能與鈣和鎂螯合，生成紫紅色螯合物（吸收峰575nm），作鈣測定時，加入8-羥基喳咻消除鎂的干擾。Mg2+8-羥基喳咻可溶性絡(luò)合物Ca2+鄰甲酚猷絡(luò)合酮紫紅色螯合物靈敏度很高，試管、器皿如有微量的鈣污染亦會引起誤差，最好使用一次性試管，所有試3.甲基麝香草酚藍法（MTB）血清鈣在堿性溶液中與甲基麝香草酚藍（MTB）結(jié)合，生成一種藍色絡(luò)合物，加入8-羥基喳咻消除鎂干擾。顯色穩(wěn)定，線性范圍大，溶血、黃疸無干擾。4離子選擇電極法（ISE）此法迅速、簡便、靈敏度高、重復(fù)性好，并可同時測定總鈣和離子鈣，離子鈣

9、測定最好用血清，不用抗凝劑，在急需檢測結(jié)果時可用肝素抗凝?！菊⒖贾怠砍扇丝傗}2.252.75mmol/L離子鈣1.151.42mmol/L二、無機磷測定目前還不能直接測定人體內(nèi)的磷元素，各種方法都是直接地分析兩種磷酸鹽陰離子（HPCU2八H2P。4-），常用的方法有磷鋁酸法，染料法，酶法。1 .磷鋁酸法以三氯醋酸沉淀蛋白，在無蛋白濾液中加入鋁酸鏤試劑，與無機磷結(jié)合成磷鋁酸，再以硫酸亞鐵為還原劑，還原成鋁藍。（NH4）6MO7O24+3H2SO4+4H2。>7H2Moe）4+3（NFk）2SO412H2MoO4+H3PO4>12Moe>3H3Po4+12H2O12MoO3-

10、H3P04+還原劑>鋁藍還原劑有很多種，1-氨基-2蔡酚4磺酸，應(yīng)用歷史較久，試劑不太穩(wěn)定，顯色時間長，靈敏度不高。氯化亞錫，靈敏度較高，顏色強度隨顯色時間時間而改變，偏離Beer定律。硫酸亞鐵，顯色較穩(wěn)定。2 .孔雀綠直接顯色法血清經(jīng)濃尿素溶液稀釋后，用孔雀綠鋁酸試劑顯色，加入吐溫20使標(biāo)準(zhǔn)液與血清標(biāo)本顯色反應(yīng)速度接近。靈敏度較高，但影響因素多，重復(fù)性差，顯色不穩(wěn)定。糖原磷酸化的葡萄糖磷酸變位酶GmG 1 P3 .酶法GnH3P。4PG6PNADPG6PD6磷酸葡萄糖酸次黃首H3PO4次黃喋吟H20 O2H2O2 N乙基嗦吟核昔磷酸化酷黃噱吟氧化酶次黃喋吟R 1 P尿酸H2O2N （3

11、甲基苯基） N乙酰乙胺P°D紫紅色復(fù)合物555nm發(fā)色底物三、鎂的測定r化學(xué)法鈣鎂試劑比色法，達旦黃比色法，甲基麝香草酚藍比色法。傳統(tǒng)方法測定方法Y物理法原子吸收分光光度法，（參考方法）同位素稀釋中子活化法（決定性方法）酶法新進展，將成為新的自動方法。1鈣鎂試劑（Calmagite）比色法血清鎂在堿性條件下與鈣鎂試劑生成紫紅色絡(luò)合物，顏色深淺與鎂濃度成正比。加入EGTA乙二醇雙（B-氨基乙醛）N,N,Ns,N/一四乙酸，可消除鈣的干擾。吸收峰520nm。顯色穩(wěn)定，操作簡便，快速，可手工操作，也可用于自動化分析。2原子吸收分光光度法血清經(jīng)酸性氯化錮溶液作50倍稀釋，直接用原子吸收分光光度計檢測285.2nm的吸光度。操作簡便，準(zhǔn)確，精密度好，可同時進行鈣的測定422.7nmo3酶法右旋葡萄糖MgATP"右旋葡萄糖6磷酸MgADP右旋葡萄糖6磷酸NADPG6PD右旋葡萄糖6磷酸NADPH【正常參考值】0.671.23mmol/L四、鐵的測定血清鐵測定血清鐵測定蟲I血清總鐵結(jié)合力（BC）測定TIBC是指可與血清運鐵蛋白結(jié)合的鐵的最大量。血清鐵總鐵結(jié)合力1°°%血清鐵和總鐵結(jié)合力的百分比稱為鐵飽和度。鐵飽和度測定方法，亞鐵嗪比色法。運鐵