蘆薈對小鼠惡性腹水模型的影響

1、    蘆薈對小鼠惡性腹水模型的影響            作者：時間：2007-11-22 11:34:00                            &#

2、160;           作者：陳麗宏，路凡，沈新，陳葳，李旭，黃劍峰，楊春榮 【關(guān)鍵詞】  惡性腹水    Effect of Aloe on rat models of malignant ascites【Abstract】  AIM: To investigate the effect of Aloe, a kind of traditional Chinese drug, on the rat models of malignant

3、ascites. METHODS:  The malignant ascites model of Balb/c rat was induced by S180 cells and then was treated with the different doses of whole leaf, gel and peel of Aloe for 2 weeks. The therapeutic effect was evaluated by comparing the change of rat body mass, protein content in ascite and chan

4、ges of S180 cell cycle in the rats. RESULTS:  The Aloe delayed the rapid increase of the body mass in rat models（P<0.05）and decreased the albumin in ascites（P<0.05）. The analysis of cell cycle displayed that the G1 phase cells were decreased and the S phase cells were increased in the Alo

5、e treatment group compared with those in the blank group. CONCLUSION:  Aloe showsa great potential in the treatment of malignant ascites.【Keywords】  Aloe;  mice, inbred BALB C; malignant ascites; cell cycle【摘要】 目的: 探討中藥蘆薈對小鼠惡性腹水模型的影響.  方法： 將S180細胞接種于Balb/c小鼠腹腔，制備小鼠惡性腹水模型；分別用蘆薈全葉汁

6、、凝膠汁、皮汁的不同劑量組灌胃治療2 wk，同時設(shè)陽、陰性對照；檢測治療前后小鼠的體質(zhì)量、腹水蛋白質(zhì)含量的變化，用流式細胞儀分析腹水中S180細胞的細胞周期變化.  結(jié)果： 蘆薈全葉汁、凝膠汁、皮汁的高、低劑量組均可使模型小鼠體質(zhì)量的快速增長減緩（P<0.05）、腹水中白蛋白含量減少（P<0.05）；S180細胞周期中： G1期細胞減少，S期細胞增多，與未治療組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）.  結(jié)論： 蘆薈對惡性腹水的治療有良好的應(yīng)用前景.【關(guān)鍵詞】 蘆薈；小鼠，近交BALB C；惡性腹水；細胞周期0引言    

7、 蘆薈是百合科多年生、常綠、肉質(zhì)草本植物. 作為一種天然藥用植物，具有殺菌、抗炎、免疫、抗腫瘤、解毒等多種作用. 惡性腹水可出現(xiàn)腹脹、胃納下降，甚至呼吸困難等癥狀.  本文旨在探討蘆薈對惡性腹水的影響，以探討蘆薈對治療惡性腹水的可能性.1材料和方法1.1材料S180肉瘤細胞株（腹水型肉瘤細胞），西安交通大學第一醫(yī)院分子生物學中心提供，常規(guī)在體培養(yǎng)傳代，定期抽取腹水，離心棄上清后加入凍存液，液氮凍存. Balb/c小鼠48只，全部為雌性，體質(zhì)量1822 g，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供. 環(huán)磷酰胺，由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號： 000211. 蘆薈凝膠汁，將蘆薈鮮葉清洗后在無污

8、染條件下剝皮，剝皮后的凝膠搗碎、減壓過濾，取過濾液備用. 蘆薈皮汁，將蘆薈鮮葉清洗后在無污染條件下剝皮，取皮層搗碎、減壓過濾，保留過濾液備用. 蘆薈全葉汁，將蘆薈凝膠汁和蘆薈皮汁均勻混合. 日立7170型全自動生化分析儀，西安交通大學第一醫(yī)院檢驗中心提供，用于蛋白測定. 流式細胞儀，美國Colllter公司生產(chǎn)，西安交通大學第一醫(yī)院分子生物學實驗中心提供，用于細胞周期測定.1.2方法1.2.1小鼠惡性腹水模型將S180肉瘤細胞復(fù)蘇后用生理鹽水稀釋成14的混懸液，無菌條件下注射到小鼠腹腔，每鼠注入0.2 mL，制備小鼠惡性腹水模型.1.2.2灌胃小鼠腹腔注射S180肉瘤細胞3 d后給與灌胃治療.

9、 將48只Balb/c小鼠隨機分為全葉汁高劑量組（A1組），全葉汁低劑量組（A2組），凝膠汁高劑量組（B1組），凝膠汁低劑量組（B2組），皮汁高劑量組（C1組），皮汁低劑量組（C2組），藥物對照組（D組）和空白對照組（E組）共8組，每組6只. A1亞組、B1亞組、C1亞組分別灌服蘆薈凝膠汁、蘆薈皮汁和蘆薈全葉汁，20 mg/kg；A2亞組、B2亞組、C2亞組分別灌服生理鹽水稀釋過的蘆薈凝膠汁、蘆薈皮汁和蘆薈全葉汁（生理鹽水占2/3，蘆薈浸出液占1/3），20 mg/kg；D組灌服環(huán)磷酰胺，20 mg/kg，E組灌服生理鹽水，20 mg/kg，均為1次/d， 14 d.1.2.3指標15 d時處

10、死小鼠，稱量體質(zhì)量. 無菌條件下抽取腹水，一部分用全自動生化分析儀測定蛋白總量、白蛋白、球蛋白、A/G比值. 另一部分用流式細胞儀檢測： 1000 r/min離心5 min，棄上清；3 mL PBS洗滌1次，離心去除PBS；加入冰預(yù)冷的700 mL/L的乙醇固定，4, 12 h；離心棄去固定液，3 mL PBS重懸5 min；400目的篩網(wǎng)過濾1次，1000 r/min離心5 min，棄去PBS；用碘化丙啶（PI）染液1 mL染色，4避光30 min；上機檢測腹水中S180細胞的細胞周期. 統(tǒng)計學處理： 實驗結(jié)果采用完全隨機設(shè)計的方差分析,均數(shù)兩兩比較采用Dunnett檢驗. 以=0

11、.05為檢驗水準，通過SPSS 11.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件計算結(jié)果.2結(jié)果陰性對照組小鼠自接種S180肉瘤細胞后腹水快速增長，有液波感，呈現(xiàn)腹圍增大、少動、皮毛枯燥、精神萎靡等癥狀. 其余各組小鼠接種后腹圍也增大，觸之有液波感；給與藥物灌胃治療后腹圍增大不明顯甚至有所減小，日常行為未見明顯異常，皮毛順滑. 蘆薈對小鼠惡性腹水模型治療后的平均體質(zhì)量有一定影響（表1）. 灌注不同劑量的蘆薈浸出液，模型小鼠腹水中的總蛋白、白蛋白含量較空白對照組均顯著降低，而灌注環(huán)磷酰胺后，模型小鼠腹水中只有白蛋白有較明顯變化（表2）. 對小鼠惡性腹水中S180細胞的細胞周期均有影響（表3）.表1蘆薈對小鼠體質(zhì)量的影響（略

12、）表2蘆薈對小鼠惡性腹水中蛋白的影響（略）表3蘆薈對小鼠惡性腹水中細胞增殖狀態(tài)的影響（略）3討論惡性腹水作為常見的腫瘤并發(fā)癥，是臨床上一直困擾著人們的難題，一旦出現(xiàn)腹水多數(shù)已屬晚期,治療困難. 患者可出現(xiàn)腹脹、胃納下降，甚至不能平臥和出現(xiàn)呼吸困難等癥狀. 目前治療方法常采用腹腔穿刺抽腹水，雖然立即改善癥狀，但不能去除病因，很快又產(chǎn)生更多的腹水，并非長久之計. 化學藥物治療、放射治療和免疫治療. 常用的藥物有環(huán)磷酰胺、順鉑、卡鉑、5氟脲嘧啶、絲裂霉素、平陽霉素、阿霉素、米托蒽醌、依托泊苷、紫杉醇等，還有干擾素、白細胞介素2、腫瘤壞死因子等. 但這些藥物/射線在殺死腫瘤細胞的同時，無選擇性的殺死正

13、常細胞，特別是造血組織細胞，常常導(dǎo)致機體發(fā)生嚴重并發(fā)癥. 全身放化療毒性大，往往使治療無法進行或被迫中斷；腹腔化療常誘發(fā)化學性腹膜炎，形成粘連使藥物作用局限而影響療效. 這種無法回避的甚至是致死性的毒副作用限制了放療/化療的廣泛應(yīng)用. 而免疫治療療效有限. 所以，國內(nèi)外學者不斷探索新的藥物，試圖發(fā)現(xiàn)一種對惡性腹水安全、有效的治療方法.蘆薈作為天然藥用植物，臨床廣泛用于治療刀傷、燙傷等1. 蘆薈至少含有140多種成分，已經(jīng)研究清楚的化學成分大約有70多種，包括碳水化合物、蒽醌類化合物、酶（多肽）和氨基酸、維生素、甾體類化合物以及其他化合物. 蘆薈所含的碳水化合物中具有重要活性的是多糖. 多糖是蘆薈中凝膠的構(gòu)成成分，對國產(chǎn)蘆薈的研究發(fā)現(xiàn)，其多糖主要為(14)連接的甘露聚糖，